术前化疗诱导乳腺癌生理凋亡的研究

中华实验外科杂志 1999年第3期第16卷 论著

作者：张平　徐越超　左凤祥　谭毓铨　成漱隆吉

单位：张平　徐越超　谭毓铨　130021　长春，白求恩医科大学第一临床学院普外科；左凤祥　解放军空军461医院外科；成漱隆吉　日本爱知医科大学第一外科教研室

　　关键词： 乳腺癌；5-氟脱氧尿嘧啶；生理凋亡

　　【摘要】　目的　探讨化疗对乳腺癌生理凋亡的诱导机制。方法　以初发乳腺癌患者为研究对象，24名患者分为2组。化疗组投与5-氟脱氧尿嘧啶(5-DFUR)800 mg/天，连续14天，共14例，非化疗组10例，利用末端标记法来检测两组手术前后生理凋亡情况。结果　发现经化疗后乳腺癌的生理凋亡增加，同化疗前比较有统计学意义(P＜0.05)。结论　化学药物可以诱导乳腺癌的生理凋亡，并且对肿瘤治疗的途径做了进一步探讨。

Exprimental study on apoptosis induction of preoperative chemotherapy for breast cancer.

ZHANG Ping, XU Yuechao, ZUO Fengxiang, et al.

　　^*Department of General Surgery, Teaching Hospital of Norman Bethune University of Medical Sciences, Changchun 130021

　　【Abstract】Objective To study the mechanism of apoptosis induction of chemotherapy for breast cancer.Methods Twenty-four cases of primary breast cancer were divided into 2 groups. 14 cases in chemotherapy group were administered 5-DFUR (800 mg/day) for 14 days. The other 10 cases in non-chemotherapy group served as control group. Apoptosis manifestation was detected by TUNEL method.Result Postoperative apoptosis of breast cancer was increased significantly as compared with that of preoperative stage (P＜0.05).Conclusion Chemotherapy drug couldd induce the apoptosis of breast cancer.

　　【Key words】 Breast cancer 5-DFUR Apoptosis

　　我们通过5-氟脱氧尿嘧啶对初发乳腺癌的治疗，来探讨化学药物对乳腺癌生理凋亡的诱导情况及其发生机理。现报道如下。

　　对象及方法

　　以1997年1月～7月，在日本爱知医科大学附属医院乳腺外科门诊就诊的女性病人为研究对象。年龄在32～65岁。病人术前取肿瘤组织(行组织吸引法)做病理检查。确定诊断后将病人分成两组，服药组及对照组。服药组给予5-氟脱氧尿嘧啶800 mg/天，连续14天，共14例。对照组10例，行乳腺癌手术后再次取肿瘤组织同术前做生理凋亡的比较。

　　标本用10%福尔马林固定，石蜡包埋做4 μm的连续切片，一切片行HE染色以确定为肿瘤组织，另一切片行生理凋亡的细胞检测。方法用末端标记法，试剂盒为日本理科研株式会社的MK500生理凋亡原位检出试剂盒。全部切片脱蜡后用胰酶处理(0.1 15分钟)，然后用末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)反应60分钟，最后用DAB行发色反应。细胞质及细胞核呈颗粒状着色为阳性细胞。在400倍镜下20个视野，镜检2000个以上肿瘤细胞，计算出每100个细胞中阳性细胞数，即凋亡细胞率(AI)^［1］。统计学处理同t检验。

　　结果

　　1、一般资料　两组病人之间在年龄、病理组织学分化度及手术的术式等项目上没有统计学方面差别。

　　2、末端标记法染色的阳性率　服药组：术前平均为(1.8±1.6)%，术后(3.5±1.7)%，有统计学意义(P＜0.05)。对照组：术前平均为(1.7±1.3)%，术后为(1.9±1.4)%，差异无显著性(P＞0.1)。

　　讨论

　　在以往的研究中，乳腺癌化学疗法的组织学效果判定是以肿瘤病灶坏死范围和残存癌细胞的数量为根据的。近年来的研究发现，各种抗肿瘤药物可以引起一个共同的细胞死亡模式——程序性细胞死亡或生理凋亡。这一发现明显提示各种药物导致的损害将激活一个固有的，基因介导的细胞死亡程序、肿瘤细胞是否能够进入程序性细胞死亡可作为化学治疗反应的焦点^［2］。由于引发程序性细胞死亡的机制十分复杂，因此，各种抗肿瘤药物诱发肿瘤细胞产生程序性死亡的机制也不尽相同。最近在癌基因的研究中p53基因在化学药剂诱导癌细胞发生凋亡起重要作用。化学药剂可以阻害细胞DNA的合成。5-DFUR是通过嘧啶核苷磷酸化酶(PYNPase)转化为5-氟尿嘧啶(5-Fu)而发挥作用的。DNA的积蓄可以通过p53基因诱导细胞的生理凋亡^［3］。在对p53基因逐渐认识的同时，其它癌基因对凋亡有着抑制或促进的作用，前者如c-myc. bcl-2等，后者为crdd45、p21、bas、ras等^［4］。

　　化学药物对肿瘤细胞凋亡的诱导可以减少肿瘤细胞的数量，促进细胞坏死。一般来讲，随着诱导凋亡的药物浓度的增加，可以促进癌细胞的死亡。药物对肿瘤细胞的作用是引起凋亡还是死亡，同细胞的种类、药物的浓度及细胞感受性有关。在这基础上根据细胞的种类，对可以诱导凋亡但不能导致细胞死亡的药物浓度进行探讨，以减少临床化疗药物的副作用。尽管对于程序细胞凋亡的产生及调控机制，目前还不十分清楚，但我们相信，关于药物所致程序性细胞死亡作用机制的进一步深入，将对肿瘤化学治疗的成功或失败提供科学依据，并为发掘新的抗肿瘤药物拓宽研究领域。

　　参考文献

　　1　掘真佐雄，长谷川　博，小泉　澄彦.乳癌におけゐろポト一シス关连DNA断片化の检出.癌の临床，1996，42：717-722.

　　2　李鹏飞，刘耕陶.抗肿瘤新策略—程序性细胞死亡.中国药理学通报,1996，12：11-14.

　　3　高桥　玲，筱原　尚.p53遗传因子ヒろポト一シス日本临床；1996，54：1881-1887.

　　4　Miyashita T, Reed JC. Tumor suppressor p53 is a direct transcriptional activator of the human bax gene cell. Biol, 1995,80:293-299.

(收稿：1998-02-05　修回：1998-07-15)