乳腺癌中bcl-2蛋白表达的意义

中国普外基础与临床杂志 1999年第5期第6卷 基础与实验研究

作者：林　清　高东宸　张长淮　卢小梅　李卫民

单位：林　清　首都医科大学附属北京同仁医院普外科(北京　100730)；高东宸　首都医科大学附属北京友谊医院普外科；张长淮　卢小梅　首都医科大学附属北京友谊医院病理科；李卫民　卫生部结核病控制中心参比实验室

　　关键词： 乳腺癌；bcl-2蛋白；细胞凋亡

　　摘要　为探讨抑凋亡基因bcl-2蛋白表达在乳腺癌中的意义，应用免疫组织化学的方法(SP法)，对125例浸润性乳腺癌患者的石蜡包埋组织切片中bcl-2、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)及p53基因的表达产物进行检测。结果： bcl-2蛋白在浸润性导管癌中的表达为63.3%，而在浸润性小叶癌中为88.9%，二者间的差异有显著性意义(P＜0.001)； 在浸润性导管癌中，bcl-2蛋白的表达与原发癌大小及肿瘤分级呈负相关(P＜0.05)，与ER、PR的表达呈正相关(P＜0.001)，与p53的表达呈负相关(P＜0.001)。但未发现bcl-2表达与腋窝淋巴结转移有统计学上的显著性差异。结论： 乳腺癌bcl-2蛋白表达与预后良好的生物学指标有一致性，与预后不良的指标呈反向表达，提示bcl-2蛋白表达可作为乳腺癌的生物学指标，在乳腺癌的病理及临床中有一定意义。

THE SIGNIFICANCE OF BCL-2 PROTEIN EXPRESSION IN HUMAN BREAST CARCINOMA

Lin Qing, Gao Dongchen, Zhang Changhuai, et al.

　　Department of General Surgery, Affiliated Beijing Tongren Hospital, Capital Medical University, Beijing 100730

　　Abstract　To evaluate the significance of bcl-2 protein, estrogen receptor (ER), progesterone receptor (PR) and p53 oncogene in invasive breast cancer of ductal and lobular type. Tumor tissues were examined immunohistochemically in paraffin embedded tissues from 125 patients. Results: The invasive ductal breast carcinomas expressed bcl-2 protein significantly less frequently than the lobular type (P＜0.001). And the expression of bcl-2 protein was significantly correlated with ER, PR (P＜0.001) and p53 (P＜0.001), also correlated with primary tumor size and grade. No statistical evidence was found to indicate the relationship between bcl-2 protein expression and anxillary lymph node metastasis. Conclusions: The expression of bcl-2 protein may be regarded as a biological index and may play important role in evaluating the biological characteristics of breast cancer.

　　Key words　　Breast cancer　　Bcl-2 protein　　Apoptosis

　　本实验运用免疫组织化学方法(SP法)对125例乳腺浸润性导管癌及浸润性小叶癌患者的石蜡包埋组织切片进行bcl-2、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)及p53测定，并探讨bcl-2蛋白表达在乳腺癌中的病理和临床意义。

　　1　材料与方法

　　1.1　标本来源

　　采用北京友谊医院1993年1月至1995年6月收治的125例原发性浸润性乳腺癌患者的石蜡组织标本，其中浸润性导管癌98例，浸润性小叶癌27例。所有患者均行手术治疗(乳腺癌根治或改良根治术)，所有标本均经病理科取材证实。患者均为女性，年龄28～82岁，平均年龄54.5岁。获随访(患者复诊或回复随访信)80例，随访时间29～60个月。

　　癌组织分类按WHO分类标准，组织学分级标准按联合组织分级(修改BLOOM-RICHARDSON)判断。临床分期按“术后国际抗癌TNM分期”。

　　1.2　bcl-2、ER、PR及p53的免疫组织化学染色

　　石蜡标本行4 μm厚切片，二甲苯常规脱蜡、梯度乙醇水化； 室温3% H₂O₂孵育10分钟； 胃蛋白酶室温消化10分钟； 枸椽酸盐抗原修复液煮沸法修复抗原； 10%山羊血清封闭； 加入一抗，4℃湿盒过液； 加入生物素标记的羊抗鼠抗体(1∶150 PBS稀释)室温30分钟； 加入辣根过氧化物酶标记的链霉卵白素(1∶200 PBS稀释)室温30分钟； DAB反应显色，显微镜下监测反应程度，蒸馏水终止反应； 苏木素负染，中性树胶封片。

　　癌细胞的细胞核或胞浆呈棕黄色着色为阳性。正常的扁桃体组织或乳腺组织内浸润的淋巴细胞作为bcl-2的阳性对照；结肠腺癌切片作为p53的阳性对照； 不加一抗的阳性片作为阴性对照。

　　结果判断由两位有经验的病理科医生分别进行，结果不一致者经过共同观片研究后决定。

　　阳性率判断标准： 阳性细胞数0%～5%为(　-　)，5%～25%为(　+　)，25%～50%为(　+　+　)，＞50%为(　+　+　+　)。

　　1.3　统计学处理

　　按计数资料进行χ²检验，P＜0.05表示差异有显著性意义，P＜0.01表示差异有极显著性意义。

　　2　结果

　　2.1　bcl-2蛋白免疫组织化学染色结果

　　125例浸润性乳腺癌中，86例bcl-2蛋白表达呈阳性，阳性率为68.8%，阳性部位是乳腺导管或癌细胞的细胞浆。

　　2.2　bcl-2蛋白表达与病理、临床因素之间的关系

　　在98例浸润性导管癌中阳性者62例(63.3%)，27例浸润性小叶癌中阳性者24例(88.9%)，二者之间差异有极显著性意义(P＜0.01)，提示在分化较好的乳腺癌中bcl-2蛋白表达较高。

　　在乳腺浸润性导管癌中bcl-2蛋白表达与病理分级呈负相关(P＜0.05)，与原发肿瘤最大长径呈负相关(P＜0.05)。肿瘤分级越高，肿瘤最长径越大，bcl-2蛋白表达越低。但与腋窝淋巴转移情况、发病年龄和随访生存率的结果未表现出明显的统计学意义(见表1)。

表1　浸润性导管癌bcl-2蛋白表达与病理、临床因素之间的关系

　　2.3　bcl-2蛋白表达与ER、PR、p53等生物学指标的关系

　　在乳腺浸润性导管癌中，bcl-2蛋白表达与ER和PR的表达呈极显著的正相关(P＜0.001)，与p53的表达呈极显著的负相关(P＜0.001)，见表2。在所有病例中，bcl-2蛋白表达与ER表达一致者占82.4%(103/125)。bcl-2蛋白表达越高，ER及PR的表达也越高，但在小部分乳腺癌病例中存在ER和bcl-2蛋白表达的不一致性； 而bcl-2蛋白表达越高，p53表达却越低。

表2　浸润性导管癌bcl-2蛋白表达与乳腺癌其它生物学指标的相关性

　　3　讨论

　　正常乳腺组织中有bcl-2蛋白表达^〔1〕，其作用是调节乳腺腺上皮细胞的自我更新，若细胞失去bcl-2基因的正常表达，则会导致细胞的死亡。

　　3.1　bcl-2蛋白表达与乳腺癌病理的关系

　　从本实验结果看，在分化较差的浸润性导管癌中，63.3%的患者bcl-2蛋白表达阳性，而在分化较好的浸润性小叶癌中，bcl-2蛋白表达阳性率则高达88.9%，二者间差异有极显著性意义。另外，在浸润性导管癌中，bcl-2蛋白表达与肿瘤分级呈负相关，即肿瘤分级越高，bcl-2蛋白表达越少； bcl-2蛋白表达与原发肿瘤的最长径也呈负相关，原发肿瘤越大，bcl-2的表达阳性率越低。提示乳腺癌恶性程度越高，bcl-2蛋白表达越低。虽然未发现bcl-2蛋白表达与腋窝淋巴结转移和随访生存率之间的统计学意义，但在与腋窝淋巴结转移情况分析中，其χ²值很接近χ²　_0.05　　值，若扩大随访例数可能会发现某种相关关系。因此减少失访率及延长随访时间则有助于寻找bcl-2蛋白表达与生存率之间的关系。

　　3.2　bcl-2蛋白表达与ER、PR、p53蛋白表达的相关性

　　本实验结果表明，在浸润性导管癌中，bcl-2的表达与ER、PR的表达呈高度正相关，而与变异型p53的表达呈反向表达，与Lee等^〔2〕和Julia等^〔3〕的研究结果相吻合。由此可见，bcl-2蛋白表达与预后良好的生物学指标有一致性，而与预后不良的指标呈反向表达。这将为探讨bcl-2蛋白表达作为一个新的生物学指标，在综合评价乳腺癌的生物学行为中的作用提供了一些线索。

　　3.3　bcl-2蛋白表达的临床意义

　　激素受体的水平是目前应用内分泌治疗乳腺癌的一个主要依据，而对于激素受体表达阴性病例的治疗选择仍存在分歧。本实验发现，bcl-2蛋白表达与ER的表达存在一定比例的不一致性，当ER表达阴性的情况下，测定bcl-2蛋白表达就很有意义。Hellemans等^〔4〕和Gasparini等^〔5〕报道，bcl-2蛋白表达可作为判断乳腺癌患者预后的一个新的指标，可以用来估计乳腺癌患者对药物治疗的敏感程度。Julia等^〔3〕在观察了不同年龄患乳腺癌的妇女接受内分泌治疗后得出结论，bcl-2蛋白表达和乳腺癌患者对内分泌治疗的反应之间存在着高度的相关性，bcl-2表达(+)者内分泌治疗后临床效果显著，而且bcl-2表达程度越高，对治疗的反应越好； 而bcl-2表达(-)者内分泌治疗后肿瘤无明显缓解。他们还观察到，尽管ER的表达也和内分泌治疗有统计学上的相关性，但ER(+)者对内分泌治疗的反应却不及bcl-2(+)者的反应好。所以，bcl-2蛋白表达的结果有可能为激素受体阴性的患者带来新的内分泌治疗选择的机会。

　　总之，bcl-2蛋白表达与预后良好的生物学指标有一致性，与预后不良的生物学指标呈反向表达，提示bcl-2蛋白表达可作为一个生物学指标，在综合评价乳腺癌的生物学行为、估计预后及辅助治疗的选择上均有一定价值。参考文献

　　1　Shunzo K, Hirotaka I, Yukashi I, et al. Clinical significance of bcl-2 gene expression in human breast cancer tissue. Breast Cancer Res Treatment, 1997; 42(2)∶173

　　2　Lee WY, Jin YT, Tzeng CC, et al. Reciprocal expression of bcl-2 and p53 in breast ductal carcinoma. Anticancer Research, 1996; 16(5A)∶3007

　　3　Julia MWG, John FRR, Ian OE, et al. Immunocytochemical localization of bcl-2 protein in human breast cancers and its relationship to a series of prognostic markers and response to endocrine therapy. Int J Cancer, 1994; 59(5)∶619

　　4　Hellemans P, Van Dam PA, Weyle J. Prognostic value of bcl-2 expression in invasive breast cancer. Br J Cancer, 1995; 72(2)∶354

　　5　Gasparini G, Barbareschi M, Doglioni C, et al. Expression of bcl-2 protein predicts efficacy of adjuvant treatment in operable node-positive breast cancer. Clin Cancer Res, 1995; 1(2)∶189

(1999-04-12收稿，1999-07-05修回)