¹²⁵I标记抗C-erbB-2单抗对荷人乳腺癌裸鼠的定位诊断及生物学分布

中华实验外科杂志 1999年第3期第16卷 论著

作者：杨金巧　王琳　龙启明　胡锐　周蕾蕾　赵俊玲　范伟

单位：610041　成都，华西医科大学附属第一医院普外科

　　关键词： 乳腺癌；C-erbB-2；单克隆抗体ICR12；放射免疫定位诊断

　　【摘要】　目的　研究¹²⁵I标记抗C-erbB-2单克隆抗体ICR12(简称¹²⁵I-ICR12)及正常小鼠IgG(简称¹²⁵I-mIgG)在荷人乳腺癌裸鼠体内的分布，为放射免疫显像(RII)及临床应用提供依据。方法　每鼠尾静脉注射抗体92.5 KBq/0.1 ml,于注射后24、48、96、120小时分批处死，测定肿瘤和血液、肝、肺等重要脏器的单位重量放射性比值(T/NT)、各组织摄取百分比(%ID/g)及定位指数(LI)。结果　¹²⁵I-ICR12注射后24～120小时内，肿瘤部位出现选择性放射性浓聚；T/NT在120小时最高，为19.374。¹²⁵I-mIgG未出现放射性浓聚，呈全身分布。结论　ICR12在荷人乳腺癌裸鼠体内，对过度表达C-erbB-2的乳腺癌具有亲和力，可望用作乳腺癌诊断、预后判断的导向载体。

Radioimmunolocalization and biodistribution of　¹²⁵I labeled Anti-C-erbB-2 monoclonal antibody ICR12 in nude mice bearing human breast cancer xenografts

YANG Jinqiao, WANG Lin, LONG Qiming, et al.

　　Department of General Surgery, The First Affitiated Hospital of West China University of Medical Sciences, Chengdu 610041

　　【Abstract】　Objective　To study the distribution of¹²⁵ I labeled anti-C-erbB-2 monoclonal antibody ICR12 (¹²⁵I-ICR12) and normal mice IgG in nude mice bearing human breast cancer and to provide the basis for radioimmunoimaging (RII) and clinical use.Methods.　92.5 KBq/0.1 ml labeled antibody was injected into the tail vein in each mouse respectively. Radioactivity ratio of tumor and non-tumor (T/NT), percent injected dosage of every gram tissue (%ID/g), and localization index (LI) were measured after 24, 48, 98, 120 h interval of injection.Results　Radioactivity concentration in tumor was found during the 24 to 120 h after the ¹²⁵I-ICR12 injection. The peak value of T/NT was 19.374 at 120 h, but non-concentration of ¹²⁵　I-mIgG was found, which was distributed evenly in body.Conclusions　ICR12 had affinity to breast cancer which overexpressed C-erbB-2 in nude mice bearing human breast cancer xenografts. ICR12 is prospective to be used as the direct carrier of breast cancer diagnosis.

　　【Key words】　Breast neoplasm C-erbB-2　　Monoclonal antibody ICR12

　　Radioimmunolocalization

　　我们应用¹²⁵I标记ICR12对荷人乳腺癌裸鼠模型进行放免定位诊断研究，现将结果报道如下。

　　材料和方法

　　1. 荷人乳腺癌裸鼠模型的建立　将人乳腺癌细胞株MDA-MB-231(C-erbB-2强表达)及MCF-7(C-erbB-2弱表达)接种于4周龄BALB/C裸鼠右胸部皮下，1×10⁷个细胞/只，2周后肿瘤直径1 cm时，取出肿瘤分成两部分，一部分福马林固定拟作免疫组化检测，另一部分切成1 mm³小块，移植于裸鼠右胸皮下，3周后肿瘤长到直径0.5 cm备用。

　　2. 抗C-erbB-2单抗的标记　单抗ICR12是人乳腺癌细胞株BT474作免疫原制成的，与C-erbB-2产物P185在细胞外结合域结合^［1］。ICR12和正常小鼠IgG都是鼠IgG免疫球蛋白。用改良氯胺T法将¹²⁵I分别标记ICR12和mIgG,Sephadex G50柱分离纯化。测得标记率分别是67%和65%，比活度分别是2.53 MBq/μg和2.27 MBq/μg，放化纯度分别是99.2%和99.5%。

　　3. 体内分布实验　(1) 注射示踪抗体前2日，裸鼠饮用0.5% KI溶液以封备甲状腺。(2) 荷瘤裸鼠分3组，每组8只：①实验I组(荷MDA-MB-231瘤)，尾静脉注射¹²⁵I-ICR1292.5 KBq/只；②实验II组(荷MCF-7瘤)，尾静脉注射¹²⁵I-ICR1292.5 KBq/只；③对照组(荷MDA-MB-231)，尾静脉注射¹²⁵I-mIgG 92.5 KBq/只。注射标记抗体后于24、48、96、120小时分批处死，取肿瘤、血液、肝、肺和其他脏器，称重测其放射性计数，计算T/NT、%ID/g和LI。

　　4. 免疫组化检测　用单抗ICR 12，以LSAB免疫组化法，对2例已经多克隆抗体证实的C-erbB-2表达阳性和1例C-erbB-2表达阴性的乳腺癌石蜡标本，以及裸鼠移植瘤石蜡标本进行C-erbB-2癌基因表达的检测。

　　结果

　　1. ¹²⁵I-ICR12在荷瘤裸鼠体内的分布见表1。注射¹²⁵I-ICR12见表2。

表1　¹²⁵I-ICR12和¹²⁵I-mIgG在荷瘤裸鼠体内分布的T/NT比值

　　表2　¹²⁵I-ICR12和¹²⁵I-mIgG在荷人乳腺癌裸鼠体内分布的定位指数

　　2. 免疫组化检测　2例多抗证实C-erbB-2过度表达阳性的乳腺癌标本及裸鼠荷MDA-MB-231移植瘤用ICR12检测染色为阳性，裸鼠荷MCF-7移植瘤染色弱阳性，已证实阴性的乳腺癌组织及正常乳腺检测为阴性。讨论

　　本实验体内分布检测结果表明，ICR12单克隆抗体在荷C-erbB-2过度表达的移植性人乳腺癌的裸鼠体内分布具选择性，其%ID/g在96小时最高，T/NT在24～120小时之间，随时间延长逐渐上升，在120小时为19.374。ICR12与mIgG分布的差异，说明该抗体能识别过度表达C-erbB-2的乳腺肿瘤和正常组织，而且ICR12在体内存留时间长于mIgG，这是因为前者选择性与肿瘤细胞抗原结合，具特异性。而其他组织均为非特异性结合。肿瘤对ICR12的摄取率在120小时后骤然下降，是由于标记抗体在肿瘤细胞中代谢，在溶酶体内进行降解和脱碘反应，然后将放射性核素排出细胞外。本实验发现在注射¹²⁵I-ICR12后120小时，全部T/NT＞2.867。两种不同程度C-erbB-2表达的移植瘤定位分布差异说明，抗原表达越强的癌组织，结合¹²⁵I-ICR12越多，这对于乳腺癌的诊断、监测、预后判断具有重要临床价值。本实验中存在血本底过高及肺、肝等网状内皮系统的吸附。另外放免定位诊断普遍存在的问题是血中分泌型肿瘤相关抗原的存在，人抗鼠单抗(HAMA)的产生，标记抗体不稳定性等^［2］。

　　本研究为卫生部课题基金资助项目

　　参考文献

　　1　Styles JM, Harrison S, Gusterson BA. et al. Rat monoclonal antibodies to the external domain of the product of the C-erbB-2 proto-oncogene. Int J Cancer, 1990,45:320-324.

　　2　Jager RD, Abdel-Nabi H, Serfini A, et al. Current Status of cancer immunodetection with radiolabelled human monoclonal antibodies. Semi in Nucl Med，1993,23:165-179.

(收稿：1998-08-13　修回：1998-11-27)