红色诺卡氏菌细胞壁骨架对小鼠膀胱癌的治疗作用

中华实验外科杂志 1999年第6期第16卷 论　著

作者：崔喆　李黎明　强万明　王建宇　吴明明　虞颂庭

单位：300052　天津医科大学总医院泌尿外科

　　关键词： 免疫治疗；红色诺卡氏菌；膀胱癌

　　【摘要】　目的　探讨红色诺卡氏菌细胞壁骨架(N-CWS)对膀胱肿瘤的治疗效果及其机理。方法　观察皮下注射N-CWS对小鼠同系移植膀胱癌的抗癌效应和N-CWS对细胞免疫因子的影响。结果　给予N-CWS的小鼠与肿瘤对照组比较肿瘤消退率为41.67%，抑瘤率为96.2%；N-CWS组IL-1、IL-2、IL-6及NK细胞活性和部分T细胞亚群则明显高于肿瘤对照组，但未能达到正常对照组的水平。结论N-CWS对膀胱癌具有明显的抗癌效应，其机理为通过提高机体的IL-1、IL-2、IL-6水平和NK的活性及部分T细胞亚群，提高机体的抗肿瘤免疫能力。

The inhibitory effects of N-CWS on bladder carcinoma and the immune mechanism in mice

CUI ZHE, LI Liming, QIANG Wanming, et al.

　　Department of Urology, The General Hospital of Tianjin Medical University, Tianjin 300052

　　【Abstract】　Objective　To evaluate the effect and mechanics of Nocardia rubra cell wall skeleton (N-CWS) in the treatment of bladder carcinoma in mice.Methods　After subcutaneous injection of N-CWS, the anti-tumor effects of N-CWS and the influence of N-CWS on IL-1, IL-2, IL-6, T lymphocyte subgroup and the activity of NK were studied on transplanted bladder carcinoma (BST₇₃₉) in syngeneic T₇₃₉ mice.Results　The tumor inhibition rate in the mice treated with N-CWS was 96.2%. The levels of IL-1, IL-2, IL-6 and the activity of NK in the mice treated with N-CWS was higher than those in tumor control mice.Conclusion　N-CWS, as an immune promoter, had obvious anti-tumor effects on bladder carcinoma. The mechanism may be that the levels of IL-1, IL-2, IL-6, NK activity and part T lymphocyte subgroups, and human anti-tumor immunological function are increased by N-CWS.

　　【Key words】　Nocardia rubra　　Cancer immunotherapy　　Bladder cancer

　　本实验旨在观察红色诺卡氏菌细胞壁骨架(nocardia rubra cell wall skeleton, N-CWS)小鼠膀胱癌同系移植瘤的抑瘤作用及对荷瘤鼠脾淋巴细胞分泌白细胞介素1、2、6(IL-1、IL-2、IL-6)肿瘤坏死因子α(TNFα)及自然杀伤细胞(NK细胞)活性和T细胞亚群的影响，并探讨其抑瘤机理，结果报道如下。

　　材料与方法

　　1. 动物及分组　4～6周龄T₇₃₉小鼠52只，体重18～23 g,雌雄各半。购自中国医科院肿瘤研究所动物中心N-CWS组23只，肿瘤对照组19只， 正常小鼠对照组10只。 其中 N-CWS 组和肿瘤对照组各有12只小鼠用于抑瘤率的研究。

　　2. 方法　(1) 实验肿瘤及荷瘤鼠动物模型制作： 可移植性小鼠膀胱癌瘤株BST₇₃₉，由南京铁道医学院赠。皮下接种10～14天的荷瘤鼠1只，断椎处死，无菌条件下剥离瘤块，取肿瘤边缘生长旺盛的瘤块，经研磨过筛加冷生理盐水制成肿瘤细胞悬液，将细胞数调至1.6×16⁶个/ml。每只小鼠于腋窝皮下注射肿瘤细胞悬液0.1 ml。(2) N-CWS剂量及给药途径： 用生理盐水溶解N-CWS冻干粉剂(福建省微生物研究所生产)，N-CWS实验组小鼠接种肿瘤后7天及14天分别给药1次，于接种肿瘤的对侧腋窝皮下注射N-CWS 50 mg 0.15 L,肿瘤对照组小鼠注射等量生理盐水。(3) 抑瘤效应： 接种肿瘤后20天处死小鼠，先取脾脏准备做免疫测定，再剥离肿瘤，称瘤重。抑瘤率及肿瘤消退率：抑瘤率=(1-实验组瘤重/对照组瘤重)×100%；肿瘤消退率=实验组肿瘤消退只数/实验组总只数×100%。(4) NK细胞活性和T细胞亚群及IL-1、IL-2、IL-6、TNFα测定 (天津医科大学医学检验系免疫学教研室协助检测)：①NK活性测定： 采用MTT法。杀伤率(%)=［1-OD_(E+T)/ODT-ODE/ODT］×100%。［OD_(E+T)指效应细胞+靶细胞孔OD值；ODE指效应细胞对照孔OD值；ODT指靶细胞对照孔OD值］。② T淋巴细胞亚群检测： 采用间接免疫荧光法进行检测。③ IL-2活性测定： HT-2细胞株为IL-2依赖细胞株，将HT-2细胞生长至对数生长期，将细胞调整为1×10⁵个/ml,加入96孔细胞培养板，每孔加细胞悬液100 μl，分别加入待测样品及IL-2标准品各100 μl,37℃、体积分数为5%CO₂培养48小时后加入MTT(0.5 g/L)50 μl/孔，培养4小时，加入盐酸异丙醇(1∶300)，振荡，酶标仪测其OD值，波长为570 nm,绘出标准曲线，求出样品IL-2含量。IL-1活性测定时用对IL-1敏感的LBRM33-IA5细胞；IL-6活性测定则用KD83细胞；TNFα测定时用L929细胞株，其余步骤同IL-2活性测定方法。

　　3. 统计学方法　组间差异比较用t检验。

　　结果

　　1. N-CWS对荷瘤鼠的抑瘤效应　肿瘤对照组12只小鼠接种肿瘤后均见肿瘤生长，无肿瘤消退情况，而N-CWS注射组12只小鼠中7只可见肿瘤生长，另外5只小鼠至实验结束解剖检验无肉眼可见的瘤结生长，肿瘤消退率41.6%，抑瘤率为96.2%。全部小鼠于接种肿瘤后20天处死，剥离肿瘤称重，二者差异具有显著性(P＜0.001)。

　　2. 各组小鼠NK细胞活性变化情况　N-CWS组的NK活性(44.2±3.9)%明显高于肿瘤对照组(33.8±3.7)%(P＜0.001)，表明N-CWS能明显促进NK杀伤活性。但N-CWS组与正常对照组(58.2±5.2)%比较差异有显著性(P＜0.05)。

　　3. 各组小鼠T细胞亚群变化情况　各组的CD₃T细胞(总T细胞)百分比差异无显著性(P＞0.05)。N-CWS组的CD₄亚群低于肿瘤对照组(P＜0.05)；CD₈亚群明显高于肿瘤对照组(P＜0.001)；CD₄/CD₈比值则明显低于肿瘤组(P＜0.01)，处于正常范围内，见表1。

表1　各组小鼠T细胞亚群比较(%，±s)

　　注： ^*　与肿瘤对照、正常对照组比较P＞0.05　　4. 各组小鼠分泌细胞因子变化情况　N-CWS组的IL-1、IL-2和IL-6均明显高于肿瘤对照组(P＜0.001)，但仍未达到正常对照组水平(P＜0.01)。而N-CWS组的TNF明显低于肿瘤对照组(P＜0.001)，但比正常对照组高(P＜0.001)，见表2。

表2　各组小鼠细胞因子水平比较(%，±s)

　　注： ^*　与肿瘤对照组、正常对照组比较P＜0.01讨论

　　本研究结果显示N-CWS组小鼠IL-1、IL-2、IL-6水平及NK细胞杀伤活性明显高于肿瘤对照组，而且N-CWS组小鼠肿瘤明显小于肿瘤对照组，有的甚至未见瘤结的生长，抑瘤率达96.2%，证明N-CWS可促进抗肿瘤免疫功能而发挥其抑癌效应。

　　注：本课题为天津市21世纪青年科学基金资助项目(No.941309015)

　　参考文献

　　1　Rohde D, Gastl G, Biesterfeld S, et al. Local expression of cytokines in rat bladder carcinoma tissue after intrvesical treatment with Nocardia rebra cell wall skeleton and bacille-Calmette-Guerin. Uro Res, 1997,25:19-22.

(收稿：1999-05-10)