膀胱癌多药耐药基因与p53基因表达的临床意义

江苏医药 2000年第6期第26卷 论著

作者：阳东荣　殷福兴　颜纯海　李玲玲　单玉喜

单位：（215004　苏州医学院附属第二医院泌尿外科）

关键词：膀胱肿瘤；p53基因；多药耐药基因

　　【摘要】　目的　探讨膀胱癌中多药耐药基因（MDR1）与p53基因表达的临床意义。方法　采用免疫组化（SABC）法对35例膀胱移行细胞癌中MDR1表达产物P-GP与p53基因产物p53蛋白进行了检测。结果　35例膀胱移行细胞癌中P-GP、p53阳性率分别为40%和48.6％，随膀胱癌的病理分级和临床分期而增高。T₂～T₄期同Tis～T₁期相比，MDR1及p53的表达均有显著性差异。MDR1与p53的表达无相关性。同时表达MDR1及p53的患者预后较差。结论　膀胱癌中MDR1与p53的表达无相关性。临床检测MDR1及p53可对膀胱癌患者提供更多的预后信息

Clinical significance of MDR1 and p53 gene expression in bladder transitional cell carcinoma

YANG Dongrong　YIN Fuxin　YAN Chunhai（Department of Urology，the Second Affiliated Hospital, Suzhou Medical College，Suzhou 21500）

　　【Abstract】　Objective　To study the clinical significance of the expression of multidrug resistance gene（MDR1）and p53 gene in bladder transitional cell carcinoma（BTCC）．Methods　P-GP and p53 proteins were detected by immunohistochemical（SABC）methods in 35 BTCC specimens．Results　The positive staining of P-GP and p53 were 40％ and 48.6％ of all the specimens．The expression of MDR1 and p53 had a statistical significant difference between stages T₂～T₄ and Tis～T₁ BTCC．No correlation between MDR1 and p53 gene expression in BTCC was found．The coexpression of MDR1 and p53 had a poor prognosis．Conclusion　It is shown that the coexpression of MDR1 and p53 may contribute to the prognostic value of BTCC．

　　【Key words】　Bladder carcinoma 　p53 gene　Multidrug resistance gene

　　多药耐药基因（MDR1）的表达是化疗耐药的重要原因之一。其表达调控除受化疗药物的诱导与激活外，近年来，认为p53基因亦参与调节。本文采用免疫组化（SABC）法检测了35例膀胱移行细胞癌中MDR1与p53表达之间的关系，并探讨其临床意义，兹报告如下。

　　材料与方法

　　一、材料

　　1．临床资料：收集1994年～1996年住院手术的膀胱移行细胞癌石蜡包埋标本35例，男32例，女3例，年龄52～88岁，平均66.5岁。按WHO肿瘤分级：G₁11例，G₂17例，G₃7例；临床分期按UICC标准：Tis～T₁23例，T₂～T₄12例。35例膀胱移行细胞癌中8例行膀胱全切加尿流改道，17例行膀胱部分切除术，10例行膀胱肿瘤局部切除术。术后随访12～48个月，平均32个月，保留膀胱27例患者术后均以卡介苗（BCG）或丝裂霉素C（MMC）膀胱内灌注。其中4例局部复发，复发时间6个月至2年，2例分别于术后12个月、18个月广泛转移，1例术后3个月死于广泛转移。

　　2．主要试剂：小鼠单克隆抗p53蛋白抗体（DO-7）为美国Santa Cruz生产，小鼠单克隆抗P-GP抗体(检测MDR1的表达产物P-GP)为德国B．M公司生产。SABC试剂盒购自武汉博士德生物工程公司。

　　二、方法

　　1．免疫组化：按SABC顺序进行，其中增加了抗原修复程序，不用胰酶消化^［1］。

　　2．对照组的设立：取5例非肿瘤病人膀胱粘膜作正常对照。染色过程中以PBS代替一抗作空白对照。

　　三、结果判定

　　显微镜下观察，不着色者为阴性，呈棕褐色者为阳性。阳性程度分级参照文献［2］。结果用χ²检验（或四格表确切概率法）作统计学分析，MDR1与p53之间的相关性以Spearman等级相关分析并校正。

　　结　　果

　　35例膀胱移行细胞癌中，MDR1的表达产物P-GP、p53的阳性检出率分别为40％（14／35），48.6％（17／35）。5例正常膀胱粘膜未发现有P-GP、p53的阳性着色，P-GP定位于肿瘤细胞膜与细胞浆，p53则定位于肿瘤细胞核。

　　一、MDR1与p53表达与膀胱癌病理分级的关系

　　P-GP在Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级癌的阳性率分别为27.3％（3／11）、35.3％(6／17）、71.4％（5／7），随肿瘤的病理分级有升高趋势，但无统计学差异（P＞0.05）。p53在Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级癌中阳性率分别为27.3％（3／11）、47.1％（8／17）、85.7％（6／7），Ⅰ级与Ⅲ级癌之间的差异具有统计学意义（P＜0.05）。

　　二、MDR1与p53表达与膀胱癌临床分期的关系

　　表浅性（Tis～T₁期）癌中P-GP、p53的阳性率分别为21.7％（5／23）、30.4％（7／23）；浸润性癌（T₂～T₄期）中P-GP、p53的阳性率分别为75％（9／12）、83.3％（10／12），浸润性癌中P-GP、p53的阳性率均较表浅性癌高。具明显的统计学意义（P分别为＜0.001，＜0.01）。

　　三、MDR1与p53在膀胱癌中表达的关系

　　35例膀胱癌中，P-GP与p53同时阳性者9例，两者都阴性者13例。其中5例仅P-GP阳性，8例仅p53阳性，P-GP与p53在膀胱癌中的表达没有相关性（r′_s＝0.242，0.1＜P＜0.2）。

　　四、MDR1与p53表达的临床预后价值

　　本组术后肿瘤复发患者MDR1和p53阳性表达，4例局部肿瘤复发p53或MDR1表达，2例全身广泛转移和1例术后3个月死亡的肿瘤MDR1和p53同时表达。

　　讨　　论

　　膀胱癌是泌尿系统最常见的肿瘤，早期治疗以手术为主，晚期病例化疗亦是治疗措施之一，但疗效并不确切。如何判断化疗药物的疗效，目前尚无明确可行的方法。研究认为，MDR1的表达与肿瘤对化疗药物的耐药性有关。如果肿瘤组织中出现MDR1的表达，则该肿瘤对化疗药物不敏感，表现为原发性耐药；如果在化疗过程中出现MDR1的表达，则该肿瘤对化疗失败。MDR1调控的耐药现象通过其编码的糖蛋白P-GP（P-glycoprotein）起作用。P-GP为跨膜蛋白，能逆浓度差把化疗药物泵出肿瘤细胞外，使肿瘤细胞免受化疗药物的毒性^［3］。膀胱肿瘤对化疗药物的不敏感性可能与MDR1的表达产物P-GP的高表达有关。本研究表明，膀胱癌中P-GP的表达随肿瘤的病理分级和临床分期的增高而增高，浸润性（T₂～T₄期）膀胱癌中P-GP的表达明显高于表浅性（Tis～T₁期）膀胱癌（P＜0.01），低分化癌的阳性率高于高分化癌，与文献报告相似^［4］。

　　近年来的研究发现，p53基因作为肿瘤抑制基因，其突变不仅参与了肿瘤的恶性生成，亦参与了MDR1表达的调节。研究表明，把MDR1基因启动子与突变型p53一同转染至NIH3T3细胞株中，可发现MDR1启动子的活性增高，而把野生型p53与MDR1启动子一同转染，却没有发现这一现象^［5］。对体外肿瘤细胞株的分析表明，在有突变型p53基因存在的条件下，MDR1基因产物P-GP的表达增高^［6］。但由于肿瘤细胞体外培养的方法不同，与体内肿瘤内环境差别很大。体内突变型p53与MDR1之间的关系需要进一步研究证实。Linn等^［7］对58例乳腺癌手术标本中MDR1和p53的检测分析表明：MDR1与p53之间具有相关性，两者的同时表达可致肿瘤明显的恶性表型、耐药性。但Soini等^［8］对31例肝细胞癌中MDR1与p53的表达分析却没有发现MDR1与p53之间的相关性。本实验结果表明，膀胱癌中MDR1与p53的表达没有相关性。但是9例同时表达MDR1与p53的患者，3例明显预后不良。说明膀胱癌中联合检测MDR1和p53可提供更多的预后信息。

参考文献

　　1，Cuevas EC，Bateman AC，Wilkins BS，et al．Microwave antigen retrieral in immunocytochemistry：a study of 80 antibodies．J Clin Pathol，1994，47：448-452.

　　2，叶定伟，郑家富，钱松溪，等．突变性p53基因蛋白产物在人类膀胱移行上皮细胞癌中的表达．中华外科杂志，1993，31：484-486.

　　3，Moscow JA，Cowan KH．Multidrug resistance．J Natl Cancer Inst，1988，80：14-20.

　　4，Park J，Shinohara N，Liebert M，et al．P-glycoprotein expression in bladder cancer．J Urol，1994，151：43-46.

　　5，Chin KV，Ueda K，Pastan I，et al．Modulation of activity of the promoter of the human MDR1 gene by ras and p53．Science，1992，255：459-462.

　　6，Kopnin BP，Stromskaya TP，Kondratov RV，et al．Influence of exogenous ras and p53 on P-glycoprotein function in immortalized rodent fibroblasts．Oncol Res，1995，7：299-306.

　　7，Linn SC，Honkoop SH，Hoelman K，et al．p53 and P-glycoprotein are often coexpressed and are associated with poor prognosis in breast cancer. Br J Cancer，1996，74：63-68.

　　8，Soini Y，Virkajarvi N，Raunio H，et al．Expression of P-glycoprotein in hepatocellular carcinoma：a potential marker of prognosis．J Clin Pathol，1996，49：470-473．

（收稿：1999-07-09　修回：1999-12-09）