p53基因突变和肿瘤标志物对大肠癌患者预后的影响

世界华人消化杂志 1999年第5期第0卷 研究快报

作者：李铭　王灏　郁宝铭　郑民华

单位：上海第二医科大学附属瑞金医院外科　上海市　200025

关键词：结直肠肿瘤；p53基因；突变；肿瘤标志物/ 分析；预后

　　Subject headings　colorectal neoplasms; p53 gene; mutation; tumor markers/ analysis; prognosis

　　中国图书馆分类号　R 735.34

　　进一步了解肿瘤标志物与基因检测在判断结直肠肿瘤患者预后中的价值，我们选用与大肠肿瘤关系甚密的p53基因，结合术前大肠相关抗原CEA,CA19-9的检测，对大肠癌患者的预后作一初步评价.

　　1　材料和方法

　　1.1　材料　1996-03/ 1997-06，对54例结直肠癌患者手术切除的标本，选用PCR-SSCP法行p53基因第5～8外显子检测. 54例患者术前取血检测大肠相关抗原血清CEA,CA19-9水平，术后均行密切随访.

　　1.2　方法　CA19-9测定采用法国CIS公司的单克隆抗体CA19-9 IRMA法药盒进行检测，正常值≤37 u/ mL，＞37 u/ mL为阳性(+). CEA测定采用上海生物制品研究所生产的药盒，用RIA法进行检测，正常值≤15 μg/ L,＞15 μg/ L为阳性(+). p53基因检测用PCR扩增. PCR反应体系为50 μL，其余各组分参照文献，p53基因点突变主要发生在外显子5，6，7，8中，4对引物设计参见国外文献^［1-3］. 最后用SSCP分析，结果与对照样品的条带比较，判断待析样品是否有突变存在，与对照条带有不同者存在突变，完全相同者则无突变.

　　统计学处理　选用χ²检验，以P＜0.05认为有显著性差异.

　　2　结果

　　54例大肠肿瘤患者中，p53基因突变24例，突变率为44%(24/ 54)，经临床密切随访，54例患者中，12例发生复发或转移，其中9例已死亡. 24例p53基因突变患者中，9例发生复发或远处转移，而30例p53基因未突变患者中仅发现3例. 术前检测患者血清CEA,CA19-9水平，在p53基因突变患者中，CEA阳性率明显高于p53基因未突变者(41% vs 10%　P＜0.05)，而CA19-9阳性率在两组中无差别(P＞0.05). p53基因有突变患者术前CEA，CA19-9均阳性6例，CEA(-)，CA19-9(+)2例，CEA(+)，CA19-9(-)4例，两者均阴性12例；p53基因突变上述分别为2例，4例，1例和23例. 复发或转移12例患者中，p53(+)，CEA(+)8例，p53(+),CEA(-)1例，p53(-)，CEA(+)3例，两者阴性者为0；而无复发或转移患者42例中，上述分别为2例，13例，0和27例，两者有显著差异(P＜0.05).

　　3　讨论

　　目前，测定血清CEA水平是结直肠癌患者随访中应用最广泛的一种肿瘤标志物，其与患者预后的关系较为肯定. 但单检测CEA对结直肠癌复发或转移的敏感性约为60%左右，同时存在一定比例的假阳性率^［4］，故早有报道认为联合检测CEA，CA19-9可作为结直肠癌患者术后的常规监测手段，因其既能够明显提高敏感性，而又不影响特异性^［4］. 然而，这些肿瘤标志物检测通常只能预先得知患者有较大风险发生复发或转移的可能，而不能指导临床医师术后制订合理的治疗方案以减少患者复发或转移的风险. 若能在术前或手术后及时正确判断患者预后，将有助于优化治疗手段，有效减少患者复发或远处转移的风险. 近年来，在分子生物学领域，人们发现抑癌基因p53与大肠肿瘤患者预后关系密切，突变者预后较差^［5，6］，但其敏感性亦不高，故作为判断患者预后的一个独立指标尚有待深入探讨. 作者在术前联合检测肿瘤标志物CEA，CA19-9血清水平，同时结合术后患者肿瘤标本中p53基因的检测发现：术前CEA(+)及肿瘤标本p53基因突变的患者多数易发生复发或远处转移，并有显著性差异(P＜0.05)，这不但可以提前预测患者的预后情况以便及早制订治疗方案，而且还可以确定术后易发生复发或远处转移的高发人群，以进一步加强临床随访工作. 至于术前CEA(+)及肿瘤标本中p53基因突变患者为什么易发生复发或远处转移的原因，目前认为可能为：①高血清CEA水平抑制了淋巴细胞活性，肿瘤细胞不易被清除，从而引起复发或转移^［7］；② p53基因突变的肿瘤细胞对常规化疗药物(如5-FU等)不感敏^［8］，因此减弱了体内、体外两方面杀伤肿瘤细胞的效应. 故对于这部分患者，临床医师应予以高度重视，必要时需选用特殊化疗药物并联用生物治疗方案以加强患者的免疫功能，有效杀伤肿瘤细胞.

　　本研究从术前血清肿瘤标志物测定结合p53基因突变检测中发现：术前CEA(+)及肿瘤标本中p53基因突变的患者，临床预后差，这不但说明了术前测定肿瘤标志物同样存在临床实用价值，而且对于术后如何制订合理的、优化的治疗方案、如何进一步有效地加强临床随访工作均有一定的参考价值.

　　通讯作者：李铭

　　4　参考文献

　　[1]　Hirotoshi H, Masakazu U, Kazuo F, Nakagawa K, Yasumitsu T, Kotake Y, Ueshima S. p53 gene mutations in early colorectal carcinoma. De Novo Vs Adenoma-carcinoma sequence. Int J Cancer, 1991;64:47-51

　　[2] Kaisa K, Sakari H, Kari S, Olsen NJ, Park JH. Rapid and effective detection of mutations in the p53 gene using nonradioactive single strand conformationpolymorphism (SSCP) technique applied on Phast System. J Virol Methods, 1995;51:43-54

　　[3] Jacqueline AMV, J Alfred W, Salvatore AEM, Owen WF, Meyer KB, Schmidt G. Predictive value of p53 mutations analyzed in bladder washings for progression of high-risk superficial bladder cancer. Clin Cancer Res, 1996;2:1055-1068

　　[4] 郁宝铭，曹慧芳，王一春，蒋家提，李铭，许叔祥，唐静芬. 检测大肠癌相关抗原对大肠癌手术患者预后的评估. 中华外科杂志，1992；30：707-709

　　[5] Nathanson SD, Linden MD, Tender P, Zarbo RJ, Jacobsen G, Nelson LT. Relationship among p53, stage and prognosis of large bowel cancer. Dis Colon Rectum, 1994;37:527-534

　　[6] Hamelin R, Laurent PP, Olschwang S, Jego N, Asselain B, Remvikos Y, Girodet J, Salmon RJ, Thomas G. Association of p53 mutations with short survival in colorectal cancer. Gastroenterology, 1994;106:42-48

　　[7] King J, Caplehorn JR, Ross WB, Morris DJ. High serum carcinoembryonic antigen concentration in patients with colorectal liver metastases is associated with poorcell-mediatedd immunity, which is predictive of survival. Br J Surg, 1997;84:1382-1385

　　[8]　王灏，郁宝铭，郑民华，张浩波. p53基因与大肠癌化疗药敏的实验研究. 肿瘤，1998；18：105-107

收稿日期：1999-01-03　修回日期：1999-03-01