Ki-67、 p16在胃肠道平滑肌肿瘤中表达的相互关系

中华实验外科杂志 1999年第5期第16卷 论著

作者：孙威　王强　赵毅　秦晔　丁安利　于文泉

单位：孙威　王强　赵毅　(110003　沈阳，中国医科大学第二临床学院外科)；秦晔　(辽宁中医学院外科)；丁安利　(辽宁省宽甸县医院外科)；于文泉(辽宁省北票矿物局医院外科)

　　关键词： 胃肠肿瘤；平滑肌瘤；平滑肌肉瘤；人抗增殖细胞核抗原Ki-67；抑癌基因p16

　　【摘要】　目的　探讨胃肠道平滑肌肿瘤(GISMT)人抗增殖细胞核抗原Ki-67、抑癌基因p16表达的临床病理意义及其相互关系。方法　采用微波修复抗原及免疫组化S-P法检测人抗增殖细胞核抗原Ki-67，免疫组化S-P法检测抑癌基因p16在86例GISMT中的表达情况。结果　Ki-67表达按平滑肌瘤，平滑肌肉瘤Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级的顺序依次明显上升(P＜0.01)，而p16的表达却依次明显下降(P＜0.05)。同时，Ki-67、p16的表达与肿瘤的良恶性生长方式、肿瘤大小、中心有无坏死亦有明显的关系(P＜0.01)。Ki-67低表达组的5年生存率明显高于高表达组(P＜0.05)，p16阳性表达组的5年生存率明显高于阴性表达组(P＜0.05)。结论　Ki-67、p16在GISMT中表达呈相反趋势，Ki-67、p16可作为判断GISMT良恶性、恶性程度、转换及预后的客观指标。

Relationship between the expression of Ki-67 and p16 in gastrointestinal smooth muscle tumors

SUN Wei,WANG Qiang,ZHAO Yi,et al.

　　(Department of Surgery,The Second Affiliated Hospital of China Medical University,Shengyang 110003)

　　【Abstract】　Objective　In order to investigate the relationship between the expression of Ki-67 and p16 in gastrointestinal smooth muscle tumors (GISMT) and the clinical pathological implications.Methods　Expression of Ki-67 and p16 in 86 cases of GISMT were detected by using microwave antigen retrieval in formalin-fixed tissues and the immunohistochemical staining S-P method, and the immunohistochemical staining S-P method, respectively.Results　The expression of Ki-67 was increased significantly in the following order: leiomyomas, grade-Ⅰ,-Ⅱ,-Ⅲ (P＜0.01), but the expression of p16 decreased accordingly (P＜0.05). Meantime, the expression of Ki-67 and p16 was associated with the tumors with or without continuous organ invasion or distant metastasis, the size of tumors, the tumors with or without center necrosis (P＜0.01). The 5-year survival rate was significantly higher in patients with p16 positive expression than those with p16 negative expression (P＜0.05).Conclusion　The expressive tendency of Ki-67 and p16 in GISMT is opposite. Ki-67 and p16 could be used as the parameters in distinguishing malignant from benign tumors, judging the malignant degree and predicting the prognosis of the patients with GISMT.

　　【Key words】　Gastrointestinal neoplasms　Leiomyoma　Leiomyosarcoma　Ki-67　p16 gene

　　我们应用微波修复抗原和免疫组化方法检测胃肠道平滑肌肿瘤(GISMT)中Ki-67及p16表达情况，探讨其在鉴别GISMT良恶性及判断恶性程度和预后上的意义及两者的相互关系。结果报道如下。

　　对象与方法

　　1. 临床病理资料　我院1977年1月～1996年4月间手术切除GISMT 86例。其中男性49例，女性37例。年龄1～77岁，平均48.6岁。肿瘤发生于食管11例，胃30例，小肠27例，结直肠18例。按Evans^［1］和He LJ等^［2］的标准区分平滑肌瘤(LM)、平滑肌肉瘤(LS)。LS组织学分级参考Patrick等^［3］的标准。其中LM 25例；LSⅠ级(LS-Ⅰ)26例，Ⅱ级(LS-Ⅱ)20例，Ⅲ级(LS-Ⅲ)15例。恶性生长方式组(肿瘤有周围浸润、种植或转移)40例；良性生长方式组(肿瘤无周围浸润、种植或转移)46例。肿瘤直径0.3～5.9cm组38例；≥6cm组48例。肿瘤中心有坏死组41例；无坏死组45例。86例GISMT中，除3例因其它原因死亡外，其余83例随访资料完整，平均随访时间58个月。所有标本均经10%福马林溶液固定，石蜡包埋，常规连续切片，分别做HE染色，Ki-67微波修复抗原与免疫组化染色。

　　2. 主要试剂　鼠抗人Ki-67(MIB-1)单抗工作浓度为1∶100，鼠抗p16多抗工作浓度为1∶50，S-P试剂盒工作浓度为1∶150，上述试剂均购自福州迈新生物制品公司。

　　3. 方法、步骤、结果判断　(1) Ki-67： 微波修复抗原按试剂说明进行。免疫组化染色S-P法： 3% H₂O₂洗10分钟，PBS洗5分钟；10%山羊血清15分钟；一抗室温过夜，PBS洗5分钟；生物素标记二抗15分钟；PBS洗15分钟；S-P15分钟，PBS洗5分钟；AEC显色5～10分钟，自来水冲洗； 苏木素复染；脱水，透明，封固。结果判定：以细胞核呈棕红色或细胞核、细胞浆同时呈棕红色为阳性；单纯细胞浆着色而细胞核无着色，或细胞核，细胞浆均无着色为阴性，于40倍光镜下10个视野计数，每个视野计数100个细胞，Ki-67标记值为： 阳性细胞总和/1000×100%。(2) p16： 切片常规脱蜡水化，PBS洗5分钟；余同前述S-P免疫组化方法。以细胞浆呈清晰红色为阳性判定标准，根据着色浓度分为： 深红色，强阳性+++；淡红色，弱阳性+；界于两者之间，++；以细胞不着色或与背景一致为阴性。(3) 对照： 同已知阳性片对照。

　　4. 统计学方法　χ²检验、t检验。生存率分析采用Kaplan-Meire寿命表法及Long-rank检验。

　　结　　果

　　1. Ki-67、p16与GISMT临床病理特征的关系见表1。

表1　Ki-67、p16表达与GISMT临床病理特征的关系

临床病理特征	例数	Ki-67值 　　(±s)	p16表达
			-	＋			阳性率(%)
分类分级
LM	25	1.34±0.22	0	3	8	13	100.00
LS-Ⅰ	26	3.49±0.40	6	4	10	6	76.92
LS-Ⅱ	20	6.73±2.32	11	5	4	0	45.00
LS-Ⅲ	15	10.18±2.07**	14	1	0	0	6.67*
生长方式
良性	46	2.32±1.12	5	8	15	18	89.13
恶性	40	7.69±2.90**	25	7	6	2	37.50**
直径(cm)
0.3～5.9	38	2.05±1.28	3	7	10	18	92.10
≥6.0	48	6.86±3.24**	27	8	11	2	43.70**
中心坏死
无	45	2.69±1.56	9	7	13	16	80.00
有	41	7.16±3.41**	21	8	8	4	42.40**

注： ^* P＜0.05　^** P＜0.01

　　2. Ki-67、p16表达与GISMT病人预后的关系Ki-67低表达组(＜均数5.25)5年生存率为87.5%；高表达组(≥均数5.25)5年生存率32.30%。两组间差异存在显著性(P＜0.05)。p16表达阳性组5年生存率70.48%；阴性组5年生存率36.25%。两组间差异有显著性(P＜0.05)。

　　3. GISMT中Ki-67与p16表达的关系　p16阳性表达的Ki-67值(7.74±3.05)明显低于阴性表达组的Ki-67值(3.25±2.47)。两组间差异有非常显著性(P＜0.01)。

　　讨　　论

　　本实验结果表明： 从LM到LSⅠ、Ⅱ、Ⅲ级，其Ki-67表达逐渐升高，说明肿瘤的分化程度越低，增殖活性越强，恶性程度越高，基本反映了肿瘤细胞增殖和分化程度的一般规律。本研究提示： 肿瘤体积大、中心有坏死、有临近器官的浸润或腹腔种植和远处转移时，Ki-67计数均明显提高。Ki-67高表达组与低表达组的5年生存率之间显著性有差异。

　　本研究结果显示： GISMT中，从LM到LSⅠ、Ⅱ、Ⅲ，随着组织分级的升高，阳性表达率依次下降(P＜0.05)。在较大肿瘤、中心有坏死、恶性生长方式组中的p16表达率明显低于相对照组(P＜0.01)。因而说明p16基因在GISMT的增殖、分化及复发、转移过程中起着重要的负性调控作用。

　　本研究发现Ki-67、p16随着恶性程度的升高的同时，它们的表达趋势呈相反趋势。p16的缺失使其对细胞增殖的负性调控作用下降或消失，细胞增殖过度，表现为Ki-67表达的明显升高。因此可以认为Ki-67高表达而p16阴性表达的GISMT恶性程度很高，预后非常差。

　　本课题为辽宁省自然科学基金资助项目(No. 972254)

　　参考文献

　　1　Evans. H L Smooth muscle tumors of the gastrointestinal tract: a study of 56 cases followed for a minimum of 10 years. Cancer, 1985,56:2242-2250.

　　2　He, L J Wang, B S Chen. C C Smooth muscle tumors of the digestive tract: report of 160 cases. Br J Surg, 1988, 75: 184-186.

　　3　Patrick CM, James PN, Walter L, et al. Gastrointestinal. Sarcomas: analysis of prognostic factors. Ann Surg, 1987, 206: 706-710.

(收稿： 1998-11-03　　修回： 1999-03-08)