急性白血病患者和白血病细胞系的bcl-2及bax基因表达

中华血液学杂志 1999年第7期第20卷 研究报告

作者：艾辉胜　芦淑娟　赖春宁　威尼热·阿不力兹

单位：艾辉胜　芦淑娟　100039北京，军事医学科学院附属医院；赖春宁　军事医学科学院基础医学研究所；威尼热·阿不力兹　新疆医学院生物化学教研室

　　为了进一步研究bcl-2和bax基因在急性白血病(AL)发病和治疗中的作用,我们检测了AL患者36例和白血病细胞系6株的bcl-2基因表达，现报告如下。

　　对象和方法

　　1　病例资料　AL36例均为我科住院患者。男26例,女10例,均符合FAB诊断标准并经免疫分型确诊,除2例外,其余34例检测时骨髓或外周血中原始和幼稚细胞数均＞0.6。急性髓系白血病(AML)23例，急性淋巴细胞白血病(ALL)13例。初治22例,复发或难治14例。白血病细胞系HL-60、U937、Raji、KG1、CEM和K562由军事医学科学院基础医学研究所提供。正常骨髓3份取自骨髓移植正常供髓员。

　　2　标本制备　取白血病患者骨髓，肝素抗凝，一部分用淋巴细胞分离液分离单个核细胞，另一部分离心甩片，封存在－20℃冰箱中备用。

　　3　原位杂交　bcl-2和bax基因探针由军事医学科学院基础医学研究所韩笛博士提供。将560bp的bcl-2cDNA探针和469bp的baxcDNA探针用光敏生物素标记后参照我室的方法^[1]作原位杂交。结果判定:每片计数200个细胞并计算阳性细胞百分率。阴性对照：①空白对照:用无关探针作原位杂交；②以RNase消化掉白血病细胞的RNA后再作原位杂交；③用不含bcl-2mRNA的K562细胞作原位杂交。

　　结果

　　1　白血病细胞系和正常骨髓细胞的bcl-2和bax基因表达　6株白血病细胞系中,B淋巴细胞系RaJi、粒细胞系HL-60、单核细胞系U937、原始粒细胞系KG1和T淋巴细胞系CEM均不同程度表达bcl-2基因和bax基因。其中Raji和HL-60细胞表达最强,阳性颗粒呈弥漫性分布,阳性细胞＞80％；U937和KG1细胞表达较弱,阳性颗粒散在分布,阳性细胞50％；CEM细胞仅微弱表达bcl-2基因,阳性细胞8％；K562细胞不表达bcl-2和bax基因。正常髓细胞微弱表达bax基因和bcl-2基因(1％～6％)。

　　2　急性白血病患者的bcl-2基因表达　AL患者36例中,bcl-2基因表达率＞20％者26例(72％)(表1),其中初治12例,复发难治14例；ALL9例,AML17例。AML的FAB亚型中慢性粒细胞白血病急粒变(CML-MBC)表达最高,M2和M4其次,M5和M3最低。白血病细胞阳性表达率＞80％者12例,其中初治4例,复发难治8例,ALL3例,AML9例。

表1　急性白血病患者的bcl-2、bax基因表达

　　注：A、B、C、D分别指基因表达率≤20％、21％～60％、61％～80％、＞80％

　　3　急性白血病患者的bax基因表达　AL患者36例中,bax基因阳性表达率＞20％者28例(78％)(表1),其中初治17例,复发难治AL11例；ALL11例,AML17例。AML的FAB亚型中,M4、M2和CML-MBC最高,M5其次,M3最低。AL患者36例中,12例bax基因阳性表达率＞80％。

　　4　急性白血病患者的bcl-2基因和bax基因联合表达　AL患者36例中,bcl-2基因和bax基因表达率均＞20％者24例,其中AML18例,ALL6例；单独bcl-2基因表达率＞20％者4例,AML和ALL各2例；单独bax基因表达率＞20％5例,AML2例,ALL3例；bcl-2和bax表达率均〈20％者3例,均为AML。

　　讨论

　　关于bcl-2基因和bax基因在白血病细胞系的表达已有较多报道。几乎所有的研究均证实HL-60和Raji细胞强表达bcl-2基因和bax基因,但是对CEM、U937和KG1细胞的bcl-2和bax基因表达的研究尚有不同结果。据Steube等^[2]的报告,CEM细胞不表达bcl-2基因和bax基因,U937细胞不表达bax基因。但是,Meijerink等^[3]认为CEM细胞高表达bcl-2和bax基因,U937细胞弱表达bcl-2和bax基因。我们的结果和文献相近，但亦有所不同,可能与所用检测方法不同等有关。

　　bcl-2基因在急性白血病的表达最初仅见于伴t(11;14)染色体异常的ALL患者。最近的研究表明,除ALL外,bcl-2基因亦可在AML和其它类型的白血病患者中表达并有重要的预后意义。我们用原位杂交方法检测AL患者36例,其中26例表达bcl-2基因,28例表达bax基因,此结果与Keith等^[4]的报道相近。对ALL和AML的bcl-2和bax基因表达是否有明显不同尚无结论,有作者报道AML亚型中M5、M4型表达最强,M1和M2其次,M3表达最弱。我们的研究结果,ALL和AML的bcl-2基因表达无明显不同，但AML亚型中以M4、M2和CML-MBC表达较强,M5和M3较弱,bax基因表达亦有类似结果。

　　参考文献：

　　1　艾辉胜，朱原晓，沈倍奋，等.非同位素原位杂交研究急性白血病的髓过氧化物酶基因表达.实验血液学杂志，1996，3：43-47.

　　2　Steube KG, Jadau A, Teep D, et al. Expression of bcl-2 mRNA and protein in leukemia lymphoma cell lines. Leukemia, 1995, 9:1841-1846.

　　3　Meijerink JPP, Smetsers T,Sloetjes AW. Bax mutations in cell lines derived from hematological malignancis. Leukemia,1995,9:1828-1832.

　　4　Keith FJ, Bradbury DA, Ming ZY, et al. Inhibition of bcl-2 with antisense oligonucleotides induces apoptosis and increases the sensitivity of AML blasts to Ara-C. Leukemia, 1995, 9:131-138.

收稿：1998-08-17　　修回：1999-02-04

校对：张吉贤