急性髓系白血病细胞粘附分子Mac-1、LFA-1、L-选择素的表达及其临床意义

中华血液学杂志 2000年第7期第21卷 研究报告

作者：童秀珍　洪文德　罗绍凯　彭爱华　陈运贤

单位：510080　广州，中山医科大学附属第一医院血液科

　　有研究表明，急性髓系白血病（AML）细胞表面有多种粘附分子表达的异常，早期造血前体细胞粘附分子CD₄₉、CD₅₆、CD₄₄的改变，与白血病发生、发展有关^［1］ 。但晚期髓系造血细胞的粘附分子β整合素巨噬细胞分子-1(Mac-1)、淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)及选择蛋白L-选择素(L-Selectin)在AML细胞的表达情况报道较少。我们对25例AML患者及20名正常人Mac-1、LFA-1、L-选择素表达进行检测，分析其表达特征及与临床及化疗的关系，现将结果报道如下。

　　病例和方法

　　1　病例选择　初诊AML 25例，年龄18～60岁，男13例，女12例。其中M₁ 3例，M₂ 6例，M₃ 2例，M₄ 6例，M₅ 7例，M₆ 1例，经形态及组化染色确诊。正常人20名，男11名，女9名，年龄20～40岁。

　　2　化疗　AML患者大多用MA（米托蒽醌+阿糖胞苷）方案，M₄及M₅患者在MA方案基础上加用足叶乙甙（Vp16）诱导化疗，缓解后以原方案或HA（高三尖杉酯碱+阿糖胞苷）、DA(柔红霉素+阿糖胞苷)等方案交替巩固化疗。AML-M₃部分用全反式维甲酸诱导缓解，3个疗程后评定疗效。

　　3　细胞株　HL-60、U937、K562细胞株均由我校肿瘤研究所提供。

　　4　主要试剂　Mac-1、LFA-1、L-选择素单克隆抗体购于美国Gibco公司，荧光标记的羊抗鼠IgG购于武汉生物技术研究所。

　　5　单个核细胞的制备　按本实验室常规，抽取正常人和AML患者的骨髓3ml，肝素抗凝，淋巴细胞分离液密度梯度离心20min，收集单个核细胞层，用PBS洗涤2次。涂片染色显示AML患者的单个核细胞中原始细胞＞0.95，将细胞浓度调至5×10⁶/ml,用于免疫荧光分析。

　　6　免疫荧光分析　参考文献［2］方法。计数200个AML细胞，计算荧光阳性率。患者荧光阳性率与对照组的比值≤20%为粘附分子表达下降标准。

　　7　统计学处理　χ²检验及t检验、F检验。

　　结果

　　1　AML细胞不同粘附分子的表达　与正常人相比，AML细胞Mac-1、L-选择素表达均明显下降(表1)。25例AML患者中Mac-1表达下降者达100%，L-选择素表达下降者占50%。而LFA-1在AML细胞中的荧光阳性率与正常人相比差异无显著性(P＞0.05)，表达下降患者只占20%。

表1　AML患者白血病细胞粘附分子的表达

　　2　HL-60、U937、K562细胞株粘附分子的表达　AML不同类型细胞株K562、U937、HL-60粘附分子Mac-1、L-选择素表达均明显低于正常人，HL-60细胞两种粘附分子的表达低于U937细胞和K562细胞（P＜0.05），而K562细胞LFA-1的表达则明显低于HL-60和U937细胞(图1)。

图1　不同类型细胞株粘附分子的表达

　　3　 AML患者某些临床特征与Mac-1、LFA-1、L-选择素表达的关系　比较Mac-1、LFA-1、L-选择率表达下降患者与表达正常患者的性别，年龄，就诊时血红蛋白、白细胞、血小板水平等，结果差异无显著性（P＞0.05）。

　　4　AML患者临床疗效与Mac-1、LFA-1、L-选择素异常表达的关系　表2显示Mac-1荧光阳性率缓解组明显高于未缓解组(P＜0.01)。 L-选择素在缓解组的表达高于未缓解组及部分缓解组(P＜0.05)。而LFA-1三组间比较差异无显著性。

表2　AML患者临床疗效与粘附分子表达关系

　　注： 与CR组比较，*P＜0.05,#P＜0.01

5　粘附分子的动态变化　动态观察10例AML患者粘附分子表达情况发现，化疗达CR后Mac-1表达均升至正常范围。4例患者复发时其Mac-1表达又下降。10例L-选择素表达下降者，化疗达CR后，8例表达升至正常范围。而LFA-1则无明显改变。

　　讨论

　　粘附分子LFA-1、Mac-1属整合素β₁、β₂亚家族，主要表达于晚期髓系前体细胞。L-选择素属选择蛋白类，可在单个核细胞上表达。本资料结果显示：100%的AML患者，其白血病细胞Mac-1的表达低于正常人，50%的AML患者L-选择素表达明显下降，而LFA-1只有20%的患者表达下降。表明AML细胞表面存在多个粘附分子异常表达。推测粘附分子表达下降有助于造血细胞脱离基质细胞的正常调控，形成恶性细胞克隆。

　　我们的资料显示Mac-1、L-选择素在HL-60细胞的表达低于U937、K562细胞，LFA-1在K562细胞的表达明显高于HL-60、U937细胞。提示检测粘附分子的表达有助于白血病分型。

　　本资料还显示Mac-1、L-选择素在完全缓解组的荧光阳性率高于未缓解组，Mac-1下降的患者化疗达完全缓解后，Mac-1、L-选择素的表达可升至正常范围。提示检测粘附分子Mac-1、L-选择素的改变可预示化疗疗效。

　　基金项目：广东省卫生厅基金资助项目(A1999146)

参 考 文 献

　　1，Reuss-Borst MA, Klein G, Waller HD, et al. Differential expression of adhesion molecules in acute leukemia. Leukemia, 1995, 9: 869-874.

　　2，Tatsumi T, Shimazaki C, Goto H, et al. Expression of adhesion molecules on myeloma cells. Jpn J Cancer Res, 1996,87: 837-842.

(收稿日期：1999-10-07)