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Ki-67、Bcl-2和EMA的表达及其与膀胱肿瘤生物学行为的关系

Ki-67、Bcl-2和EMA的表达及其与膀胱肿瘤生物学行为的关系

中华实验外科杂志 1999年第1期第16卷 膀光肿瘤

作者:窦中岭 周四维 陈书昌

单位:471003 河南洛阳医学高等专科学校附属医院(窦中岭、陈书昌);同济医科大学附属同济医院泌尿外科(周四维)

  关键词: 膀胱肿瘤;免疫组织化学;Ki-67;Bcl-2;EMA

  【摘要】 目的 研究Ki-67、Bcl-2和EMA在膀胱肿瘤细胞中的表达及其与肿瘤细胞生物学行为的关系。方法 用免疫组化技术(LSAB法)检测Ki-67、Bcl-2和EMA在膀胱移行细胞肿瘤标本中的表达。结果 Ki-67标记表达率与肿瘤细胞的增殖率有关(除Ⅲ级肿瘤),P<0.01。在Ⅲ级肿瘤中用Ki-67标记率代表肿瘤的增殖活性不可靠。各种肿瘤参数中只有年龄因素与Bcl-2的表达水平有统计学上的相关性,P<0.05。EMA的表达率随着膀胱肿瘤组织学分级和分期的增加而降低(P<0.01,P<0.05)。在复发和多发肿瘤中EMA的表达率亦较低(P<0.01)。结论 三种抗原均可从某些方面反映出膀胱肿瘤的生物学行为。但只有EMA与膀胱肿瘤的生物学行为关系密切,可作为判定膀胱肿瘤的恶性程度和愈后的重要标记物。

   Expression of Ki-67, Bcl-2 and EMA and the correlation with biological behavior of bladder tumor Dou Zhonglin*, Zhou Siwei, Chen Shukang. *Department of Urology, The Affiliated Hospital, Luoyang Medical College, Luoyan 471003

     【Abstract】 Objective To study the relationship between the expression of Ki-67, Bcl-2 and EMA and biological behavior of bladder tumor. Method Using an immunohistochemical method (LSAB), the expression of Ki-67, Bcl-2 and EMA in formalin-fixed paraffin-embedded sections of tumor tissues were detected in 49 patients with bladder cancer. Result Ki-67 labeling index was associated with the proliferation of tumor cells in grade 0,Ⅰ,Ⅱ but in grade Ⅲ (P<0.01). It is unreliable to represent the proliferation of tumor by the Ki-67-positive incidence in grade Ⅲ. Statistical correlation existed between age factor and the level of Bcl-2 expression except for the other tumor background parameters (P<0.05). The frequency of EMA-positive cells was decreased with the increase of the tumor grades and stage (P<0.01 and P<0.05, respectively). Conclusion The expression of the three antigens can show the biological behavior of bladder tumor in some aspects. EMA is closely related to the biological behavior of bladder tumor. It is an essential marker for judging the malignancy and prognosis of bladder tumor.

     【Key words】 Bladder tumor Immunohistochemistry Ki-67 Bcl-2 EMA

  我们用LSAB免疫组化方法检测Ki-67、Bcl-2及EMA在49例膀胱肿瘤中的表达,旨在从细胞核、细胞质和细胞膜等三种抗原的表达探索与膀胱肿瘤生物学行为的关系。

  材料和方法

  1. 标本和试剂 所有肿瘤组织均来自近五年内行手术或TUR治疗、病理证实且有完整资料的膀胱肿瘤病理标本。49例中有8例是膀胱移行细胞瘤,其余为TCC。根据WHO标准,在TCC中Ⅰ级有10例,Ⅱ级有19例,Ⅲ级有12例。临床分期按UICC.TNM标准,浅表性Tis-1 36例,有浸润的T2~T4 13例。其它肿瘤参数及例数见附表。一抗用鼠抗单克隆抗体(DAKO公司产品);Ki-67、Bcl-2、EMA抗体。免疫组化试剂盒用Zymed公司SP试剂盒。

  2. 方法 组织标本均经过甲醛固定、石蜡包埋处理。每个标本做5μm厚切片5张。按试剂盒说明实验。在做Ki-67免疫染色时先置微波炉行抗原修复。最后以PBS代替一抗做对照。

  3. 结果判断 凡细胞成份被标记染成棕黄色者为阳性细胞。阳性细胞计数时每片随机取5个高倍视野下计100个瘤巢中阳性细胞数,求其平均值,行t检验和方差分析。

  结 果

  1. 各抗原在膀胱肿瘤中的表达 三种抗原在各级/期肿瘤中均有不同程度的表达。Ki-67染色阳性细胞显示细胞核呈棕黄色,核膜着色较浓。Bcl-2染色阳性细胞呈随机散在分布于肿瘤组织中,细胞质内非均匀染色。EMA在肿瘤组织中的表达有一定规律性,乳头状瘤和低级/期TCC中 ,绝大多数瘤细胞表达EMA,浅表腔面几层染色浓,往基底方向染色逐渐减弱,呈极性表达。阳性细胞以胞膜染色为主。随着分级/分期的增加可见阳性细胞数逐渐减少,但仍呈极性分布。至Ⅲ级/pT3~T4阳性细胞极少,且散在分布。

  2. 各抗原免疫染色表达率与肿瘤分期/级的关系(表1) Ki-67标记表达率在Ⅱ级TCC中最高,达27.1%,与其它各级比较差异有显著意义(P<0.05),但其它各级之间却无明显差异。Bcl-2表达率随组织学分级的增高而增加,但差异无显著意义(P>0.05)。EMA的表达率随着肿瘤分级的增加明显降低,且O级与Ⅱ级、Ⅰ级与Ⅱ级、Ⅰ级与Ⅲ级、Ⅱ级与Ⅲ级及O级与Ⅲ级之间有极显著性差异(P<0.01)。Ki-67及Bcl-2表达率在Tis-1和T3~T4之间无显著性差异(P>0.05)。EMA表达率则随着肿瘤分期的增加而明显减少,Tis-1和T3~T4相比差异有显著意义(P<0.05)。

表1 Ki-67、Bcl-2和EMA表达与肿瘤特性关系(ID%,±s)

参数 例数 Ki-67 Bcl-2 EMA
分 期 Tis-1 36 11.15±3.82 20.26±4.72 46.48±5.42
  T2~T4 13 13.20±7.56 29.18±10.76 19.77±8.31
发病 初发 34 14.64±4.78 19.19±4.92 49.47±5.63
特性 复发 15 5.89±2.16 30.14±9.36 16.53±6.04
  单发 28 11.46±5.11 27.75±5.24 53.79±6.19
  多发 21 12.63±4.26 35.48±7.74 20.19±5.74
年 龄 <50 18 11.15±5.95 9.04±3.89 50.72±7.44
  >50 31 12.43±4.21 30.51±6.30 32.81±6.04
性 别 39 9.64±3.01 24.33±5.21 38.13±5.29
  10 21.01±11.99 15.99±8.16 44.30±11.94

  3. 各抗原表达与其它肿瘤参数 在Ki-67和Bcl-2的表达率方面,初/复发肿瘤、单/多发肿瘤以及性别因素之间差异无显著意义(P>0.05)。而EMA的表达却明显不同,初/复发肿瘤和单/多发肿瘤的表达率差异有极显著意义(P<0.01)。性别和年龄因素不影响EMA和Ki-67的表达。但Bcl-2却受年龄的影响,50岁前后差异有显著意义(P<0.05)。另外在Ki-67免疫染色过程中,我们发现除某些肿瘤细胞核着色呈阳性外,有7/19的Ⅱ级TCC和3/12的Ⅲ级TCC的肿瘤组织周围腺体组织细胞核着色,且偶见肿瘤组织间质细胞核着色。讨 论

  我们的结果显示:Bcl-2在膀胱肿瘤中也有表达,并见于各级/期移行细胞肿瘤中。随着肿瘤分化程度的降低,其表达率升高。同时,在有浸润的T2~T4肿瘤、复发肿瘤和多发肿瘤中其表达率也增加。这从一定程度上反映了Bcl-2过度表达有助于肿瘤细胞的生存,并有可能最终导致肿瘤的进展和转移。因为在Bcl-2表达率与膀胱TCC分级、分期、初/复发、单/多发及性别关系上其差异无显著意义,所以Bcl-2表达率在反应膀胱肿瘤这些生物学行为方面不理想。我们发现随着患者年龄的增加Bcl-2表达率增高。在50岁前后其差异有显著意义。表明高龄患者更易表达Bcl-2,其恶性程度有增加趋势。正常膀胱粘膜上EMA呈极性分布,表层最多,往基底层逐渐减少。免疫染色阳性细胞约占62.5%以上,且以细胞膜表达为主[1]。膀胱肿瘤时EMA的分布表达发生改变。我们的实验显示:随着肿瘤分级的增加,EMA表达率减少。且在O级与Ⅱ级、Ⅰ级与Ⅱ级、Ⅱ级与Ⅲ级、Ⅰ级与Ⅲ级、O级与Ⅲ级之间其差异有极显著意义。说明EMA标记表达率的变化与膀胱肿瘤分级有密切关系。同时,在有浸润的T2~T4期TCC、复发的TCC和多发的TCC中,EMA表达率明显下降,差异有极显著意义。说明当EMA的表达率低于19.77%±8.31%时患者肿瘤的恶性程度高,提示预后不良。在膀胱肿瘤病中,肿瘤在膀胱壁浸润的深度是选择治疗和评估预后的重要指标[2]。虽然适当的活检对判定有无浸润、病理分级等有决定性意义,但目前临床上经TUR获得的肿瘤标本仍难以定论。我们的实验表明,在Ki-67、Bcl-2及EMA三种抗原中,只有EMA与肿瘤有无浸润关系密切。

   参考文献

  1 Nakopoulou L, Zerzas A, Constantinides C et al. Epithelial differentiation antigens and epidermal growth factor receptors in transitional cell bladder carcinoma: correlation with prognosis. Urol Int, 1995,54:191-197.

  2 Narayana SA, Loening AS, Slymen DJ et al. Bladder cancer: factors affecting survival. J Urol, 1983, 130:56-60.

(收稿:1998-08-24)


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