膀胱癌的血管内皮细胞生长因子表达、微血管计数及其临床意义

中华实验外科杂志 1999年第1期第16卷 膀光肿瘤

作者：赵国范　孙锐　刘武英　吕纯义

单位：300203　天津医科大学病理教研室

　　关键词： 膀胱肿瘤；癌；免疫组化；新血管形成

　　【摘要】　目的　寻求与膀胱移行细胞癌预后相关的新诊断方法。方法　以SABC免疫组化及亲和组化法研究83例膀胱移行细胞癌的血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达、微血管计数及其与病理分级、预后的关系。结果　VEGF表达强度、微血管计数在Ⅲ与Ⅰ级癌间、在有复发、转移及5年死亡组与无复发、转移组间有极显著性差异(P＜0.01)。VEGF表达、微血管计数在Ⅲ级癌组、在有复发、转移及5年死亡组有相关性。结论　VEGF是血管形成的重要因子，VEGF高表达、微血管计数高是辅助预测膀胱癌患者预后不佳的新指标。

　　 Expression of VEGF and microvessel counts in bladder cancer and the clinical implication Zhao Guofan^*, Sun Rui, Liu Wuying, et al. Department of Pathology, Tianjin Medical University, Tianjin 300203

　　 　　【Abstract】 Objective To investigate a new diagnostic method for the prognosis of bladder transitional cell cancer.Method Using immunohistochemistry and lectin binding histochemical methods (SABC), the expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) and tumor angiogenesis were studied on archival specimens of 83 cases of human bladder transitional cell carcinoma and 6 cases of normal bladder mucosa, and their relation to the pathological grading and prognosis was analyzed.Result There was a significant difference in the intensity of VEGF staining or microvessel counts between grade Ⅲ and grade Ⅰ carcinoma, or metastatic, recurrent, 5-year death group and the group without metastasis and recurrence (P＜0.01). The expression of VEGF was correlated with microvessel counts in grad Ⅲ carcinoma or in cases of metastasis, recurrence, 5-year death (P＜0.05). Conclusion VEGF is an important angiogenic factor, and high expression of VEGF and microvessel counts may aid in predicting at risk for metastasis, recurrence and 5-year death.

　　 　　【Key words】 Bladder neoplasms Carcinoma Immunohistochemistry Neovascularization

　　我们通过观测膀胱移行细胞癌(BTCC)血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达，并以荆豆凝集素(UEA-1/Bio)为标记物计数肿瘤组织中的微血管，以探讨其与BTCC分级及预后的关系。

　　材料和方法

　　1.标本　选取天津医大三院、天津市泌尿外科研究所、天津天和医院的BTCC组织蜡块114例，去除材料不全者余83例供研究用。其中男62例、女21例，年龄28～80岁，平均54岁。正常膀胱移行上皮6例，取自非膀胱癌患者。组织皆为福尔马林固定，石蜡包埋，切片厚4～5μm。

　　2.试剂　兔多抗血管内皮细胞生长因子(VEGF)、生物素化荆豆凝集素UEA-1均购自北京中山生物技术有限公司，分别系美国Santa Cruz及ZYMED产品。采用新一代SABC法及亲和组化法。一抗的工作浓度分别为1∶50与1∶200。阳性对照：为已知的肾癌阳性切片，阴性对照：用TBS代替一抗。

　　3.观测　(1)BTCC的HE切片按WHO分级法分为：Ⅰ级21例，Ⅱ级35例，Ⅲ级27例。(2)VEGF表达的评估：以肿瘤细胞及其附近的血管内皮细胞胞浆出现黄色的为性表达，依其染色呈不着色→黄→深棕黄，其强度依次记分为0-5-10。(3)微血管计数法：UEA-1将小静脉及微血管的内皮细胞染成黄色或棕黄色，40×光镜下选微血管分布热点(hot spot)，再在200×(0.739mm\+2)光镜下计数微血管，每张切片计数一个视野。(4)统计学方法：t检验，卡方检验及相关系数的统计意义检验。

　　结　果

　　1.VEGF表达及微血管计数(MC)与BTCC病理分级及不同预后组的关系见表1。正常移行上皮不表达或轻表达VEGF，正常移行上皮内MC为0。

表1　VEGF表达、微血管计数与BTCC的关系(±s)

注：*Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ为BTCC病理分级的三个级别

　　**N₁：有转移复发及5年死亡组， N₂：无转移、复发组

　　N₃：5年内死亡组， N₄：5年内有转移、复发而依然存活组

　　2.BTCC患者在有随访结果的72例中发生复发、转移及5年死亡的百分率与VEGF染色强度记分及MC的关系：VEGF表达记分为2～6，预后不佳发生率为32.4%(11/34)；7～10时，预后不佳发生率为63.2(24/38)。两者相比有非常显著性差异(P＜0.01)。微血管计数小于100时，预后不佳发生率为35.7%(20/56)；计数大于100时，预后不佳发生率为93.8(15/16)；两者相比有非常显著性差异(P＜0.01)。

　　3.VEGF表达强度与微血管密度的关系　Ⅱ级癌组及N₁组的VEGF表达与微血管密度有相关性(r=0.354、P＜0.05及r=0.366、P＜0.05)。N₂组无相关性(r=0.314、P＞0.05)。其余组标本过小不宜比较。研究中发现VEGF表达记分在7以上或血管密度每200×视野高于100个，其不佳预后的发病率显著高于VEGF在7以下，血管计数在100↓/×200(63.16%或93.75% P＜0.01)。

　　讨　论

　　我们观察到BTCC肿瘤细胞几乎皆表达VEGF，只是强度不同，Ⅰ与Ⅱ、Ⅱ与Ⅲ级癌的VEGF表达未见显著性差异，而Ⅲ级癌的VEGF表达强度显著大于Ⅰ级癌。研究中发现由于生长旺盛的细胞VEGF过表达，Ⅲ级及有侵袭性的Ⅱ级癌中这种细胞多，而Ⅰ级癌中少，故导致了上述结果。有转移、复发及5年内死亡组的VEGF表达强度显著高于无转移、复发组(P＜0.01)，5年死亡组的VEGF表达强度与伴有转移、复发的5年存活组无显著性差异(P＞0.05)，揭示VEGF表达可辅助估价转移、复发而不宜直接预测5年生存与否。VEGF表达强度在7以上，发生转移、复发甚至死亡的百分率显著高于7以下组(P＜0.01)，进一步证实了VEGF表达对估测患者预后的意义。

　　Jaeger等^[1]研究了膀胱癌的MC与其淋巴结转移的意义，与我们报道不同的是MC与分级无关，考虑为组织块的构成不同所致。MC在5年死亡组与伴有转移、复发的5年存活组间无统计学意义，而转移、复发及5年死亡组的MC显著高于无转移、复发组，提示高MC是转移、复发及5年死亡的参考指标。MC为100⁺/×200视野，患者发生复发、转移及5年死亡的百分率高达93.75%，是否可考虑200×镜下见100个以上微血管是预后不佳的辅助指标。

　　VEGF表达强度与微血管密度在Ⅱ级癌及在有转移、复发及5年死亡组有相关性(r=0.354、P＜0.05， r=0.366、P＜0.05)，这证实了VEGF可能是癌转移的重要血管形成因子的推断^[2]。我们依据Dvorak等^[3]及Waleh等^[4]等学者的实验推测，VEGF表达与MC相关性的发生机理可能是肿瘤细胞内V-Src等基因直接上调VEGF表达，同时/或突变型p53等调控瘤细胞异常增殖，瘤体迅速增大，造成缺氧环境而诱发VEGF合成、分泌及对血管内皮的粘附，从而过表达。VEGF增多则与其KDR受体结合者多，后者通过一系列调控机制导致血管内皮细胞的分裂、增殖、促使内皮细胞迁移，毛细血管通透性增强、血浆外渗，而利于新血管以出芽方式大量形成。无转移复发组二者无相关性，考虑为VEGF表达与微血管的形成尚存有一时间差所致。其它组有待增大样本数，以便深入研究。

　　 参考文献

　　1.Jaeger TM, Weidner N, Chew K, et al. Tumor angiogenesis correlates with lymph node metastases in invasive bladder cancer. J Urol, 1995, 154:69-71.

　　2 Ellis LM, Liu W. Vascular endothelial growth factor (VBGF) expression and alternate splicing in non-metastatic human colon cancer cell lines. Cancer Res, 1995,36:88-89.

　　3 Dvorak HF, Brown LF, Detmar M, et al. Vascular permeability factor/vascular endothelial growth factor, microvascular hyperpermeability, and angiogenesis. Am J Pathol, 1995,146:1029-1038.

　　4 Waleh NS, Brody MD, Knapp MA, et al. Mapping of the vascular endothelial growth factor-producing hypoxic cellsin multicelllular tumor spheroids using a hypoxia-specific marker. Cancer Res, 1995,55:6222-6226.

(收稿：1998-03-13　修回：1998-07-15)