CD_44V6和CD_{44S表达与膀胱癌转移的相关性研究}

山东医药 2000年第11期第40卷 论著

作者：刘海涛　谭保斌　高佃军　程继义　王延军　金讯波

单位：刘海涛（潍坊医学院附属医院261031）；谭保斌（潍坊医学院附属医院261031）；高佃军（潍坊医学院附属医院261031）；程继义（山东省立医院）；王延军（山东省立医院）；金讯波（山东省立医院）

关键词：膀胱肿瘤　CD_{44V6　CD44S　免疫组织化学}

　　摘要　采用免疫组化SABC法对81例膀胱移行细胞癌患者癌组织中细胞粘附分子CD_44V6和CD_44S的表达进行检测。结果显示，CD_44V6的阳性表达与膀胱癌临床分期、病理分级有显著关系（P均＜0.05），伴淋巴结转移组的CD_44V6阳性表达率显著低于未转移组（P＜0.01）。CD_44S的阳性表达与临床分期、病理分级无明显相关性，但与淋巴结转移有显著关系（P＜0.01）。认为CD_44V6和CD_44S均与膀胱癌转移明显相关，可作为监测膀胱癌转移的可靠指标。

　　abstract Immunohistochemical method was used to detemine the expression of CD_44V6 and CD_44S on 81 cases of bladder transitional cell cancer.Results showed CD_44V6 expression correlated well with histological grade，clinical stage and lymphnode metastasis.No significant correlation with CD_44S and histological grade，clinical stage.But it was significantly correlated with lymphnode metastasis.It is concluded that CD_44V6 and CD_44S immunoreactivity are significantly correlated with lymphnode metastasis，their expressions might have practical significance in assessing metastasis of bladder cancer.

　　Key words Bladder neoplasms CD_44V6 CD_44S Immunohistochemistry

　　转移是恶性肿瘤治疗失败及患者死亡的主要原因，研究肿瘤转移的分子机制对判断肿瘤的转移潜能及其预后具有十分重要的意义。细胞粘附分子CD₄₄又称淋巴细胞归巢受体（Lymhocyte　homing　receptor），分为标准型CD₄₄（CD_44S）和剪接变异体CD₄₄（CD_44V）两类。近年来的研究表明，CD₄₄分子参与细胞与细胞、细胞与基质之间的相互作用，与恶性肿瘤的浸润及转移密切相关^〔1〕。我们采用免疫组织化学方法检测了CD_44V6和CD_44S在膀胱癌和正常膀胱粘膜上皮的表达情况，以探讨其表达与膀胱癌转移的相关性。

　　1　资料与方法

　　1.1　一般资料　选择经病理检查证实的81例膀胱癌患者的癌组织标本（观察组），患者男65例、女16例，年龄30～84岁、平均60岁；随访3～4年。按WHO的病理分级标准，Ⅰ级16例，Ⅱ级36例，Ⅲ级29例。按UICC-TNM的分期标准，Tis～T₁37例，T₂～T₄44例。伴淋巴结转移组24例，未转移组57例。所有病例术前均未行任何治疗。对照组为10例正常人的膀胱粘膜标本。

　　1.2　实验方法　取10％中性福尔马林固定的石蜡包埋切片，厚5μm，分别行HE染色和免疫组化染色。SABC试剂盒为武汉博士德公司产品，鼠抗CD_44V6、CD_44S单克隆抗体为Zymed公司产品（工作浓度分别为1∶50，1∶50）。用3％甲醇过氧化氢阻断内源性氧化物酶，微波（750W）加热到95℃修复抗原，苏木精复染，每批染色均设阳性对照和阴性对照。

　　1.3　结果判定标准　采用半定量方法于光镜下分析。在排除非特异性染色前提下，黄色、棕黄色、棕褐色为阳性。结果判断用AB值法，A为按切片中细胞显色有无及深浅评分，0分：细胞无着色；1分：显色为浅黄色；2分：为深黄色；3分：为棕褐色。B为按切片中显色细胞比例评分，1分：显色细胞少于切片中细胞总数的1／3；2分：1／3～2／3细胞显色；3分：2／3以上细胞显色。每例肿瘤积分＝A×B，按积分高低分为阴性（－）：0分；阳性（＋）：1～4分；强阳性（＋＋）：＞4分。采用SAS统计软件分析数据，进行X²检验。

　　2　结果

　　对照组CD_44V6均为强阳性或阳性表达，CD_44S阳性表达6例，主要以膜表达为主，呈棕黄色颗粒。观察组CD_44V6呈阳性表达40例（占49.4％），其阳性表达与膀胱癌病理分级、临床分期有显著关系，P均＜0.05；伴淋巴结转移组的CD_44V6阳性表达率（25％）显著低于未转移组（59.6％），P＜0.01。CD_44S呈阳性表达45例（占55.5％），其阳性表达与淋巴结转移有明显相关性，伴有淋巴结转移组CD_44S阳性表达率（33.3％）显著低于未转移组（64.9％），P＜0.01，但与临床分期、病理分级无关。见表1。

表1　CD_44V6、CD_44S阳性表达与膀胱癌临床病理特征的关系（例）

　　注：与阴性者比较，^*P＜0.05，^**P＜0.013　讨论

　　恶性肿瘤的浸润转移是一个复杂过程，是肿瘤与宿主之间相互作用的连续过程，主要包括原发肿瘤生长、肿瘤血管生成、组织浸润、粘附分子相互作用及细胞运动的调节^〔2〕。CD₄₄分子为细胞表面的跨膜糖蛋白，是介导细胞与细胞、细胞与基质间相互作用的粘附分子，广泛存在于白细胞、上皮细胞及内皮细胞上^〔3〕。CD_44S和CD_44V6作为恶性肿瘤浸润转移的标志物已被临床证实。其表达情况与恶性肿瘤的转移及不良预后有关。

　　本研究证实，正常膀胱上皮在细胞交界区显示CD_44V6和CD_44S的膜表达，反映出细胞粘附分子的正常定位。我们认为，CD_44V6的阳性表达与肿瘤细胞分化程度、浸润有密切关系。因为实验中观察到随着肿瘤分化程度的降低，CD_44V6的阳性表达率相应降低，两者有明显相关性。本组81例膀胱癌患者中，Tis～T₁37例，CD_44V6的阳性表达率为64.9％（24／37），而T₂～T₄的44例中，CD_44V6的阳性表达率只有36.4％（16／44），显示随着肿瘤浸润程度的增加，CD_44V6的阳性表达逐渐减弱，亦表明肌层浸润者与无肌层浸润者CD_44V6的表达有显著性差异。这种情况在其他人体肿瘤组织亦被发现，但结果报道不一。同时，我们发现CD_44V6的阳性表达与肿瘤的转移程度亦有密切关系。本组24例伴有淋巴结转移者中，有6例CD_44V6呈阳性表达，阳性表达率显著低于无淋巴结转移者（P＜0.01）。目前发现，CD_44V6在不同肿瘤中的表达水平和功能均不相同，有的则得出相反结果。Yokozki^〔4〕用免疫组化技术检测胃癌组织中CD_44V6的表达，结果发现，细胞分化差和伴有淋巴结转移的癌标本中CD_44V6阳性表达率明显增高，随访发现此组患者易复发，预后不良，提示CD_44V6的表达促进了肿瘤的侵袭转移。但在另一些肿瘤中，CD_44V6表达减弱或无表达，如Friedrichsk等^〔5〕用免疫组化技术分析乳腺癌中的CD_44V6表达情况，发现随着肿瘤获得侵袭和转移能力，CD_44V6表达逐渐减弱，甚至消失。Ross等^〔6〕认为，CD_44V6的表达与其在同型细胞间粘附作用有关，细胞与细胞、细胞与基质间粘附性的丧失可能促进肿瘤去分化和间质及肌层浸润，并促使远处转移发生；并认为CD_44V6在肿瘤转移中的作用，可能取决于物种、肿瘤类型或宿主微环境。本研究表明，膀胱癌中的CD_44V6可能是一种潜在的转移抑制因子，CD_44V6表达缺失与膀胱癌转移及预后差可能有关。

　　分析本组资料，我们认为CD_44S与膀胱癌细胞分化、浸润程度无关，而与淋巴结转移有密切关系。因为实验中观察到CD_44S在正常膀胱粘膜及不同分级分期的膀胱癌中均有阳性表达，但无统计学意义。在伴有淋巴结转移的患者中，有8例CD_44S阳性表达（33.3％），阳性表达率明显低于无淋巴结转移者（64.8％，P＜0.01）。Sugino^〔7〕认为，CD_44S在伴有转移的膀胱癌中的低表达或无表达，是由于CD_44S的mRNA异常转录引起其在细胞与细胞间表达能力下调所致，CD_44S的表达减少最终可导致癌细胞转移。Gao等^〔8〕在前列腺癌中转染入CD_44S，结果肿瘤细胞的生长没有受到影响，但其转移能力受到明显抑制，因此认为CD_44S可能是一转移抑制基因，本实验的结果亦符合这一观点。

　　在膀胱癌的诊治过程中，虽然膀胱镜检查有助于肿瘤分级、分期的判断，但对膀胱癌有无转移尚未找到特异的诊治方法。通过研究81例膀胱癌组织中CD_44V6和CD_44S的表达，发现两者均与肿瘤转移明显相关。本文有转移的24例中，大多数（90％）表现为CD_44V6和CD_44S阴性表达。由于肿瘤的恶性表型来自多基因、多步骤的遗传学改变，因此我们认为，CD_44V6和CD_44S联合检测可更准确地反映肿瘤的生物学行为，对判断及预测人膀胱癌的转移与否提供有意义的资料，可以作为监测膀胱癌转移的可靠指标。

　　4　参考文献

　　1，Screaton GR，Bell MV.Genonic structure of DNA encoding the lymphocyte homing receptor CD₄₄ reveals at least 12 alternating spliced exons.Proc Natl Acad Sci USA，1992，89：12160.

　　2，Hart RA，Saini A.Biology of tumor angionesis.Lancet，1992，339：1453.

　　3，Matsumura Y， Hanbury D，Smith J， et al. Non-invasive

　　detection of malignancy by identification of unusual CD₄₄ gene activity in exfoliated cancer cells.Brit Med J，1994，308：619.

　　4，Yokozaki H，Ito K，Nakagama H，et al.Expression of CD₄₄ abnormal transcripts in human gastric carcinomas.Cancer-lett，1994，83：229.

　　5，Friedrichs K，Franke F，Lisboa.et al.CD₄₄ isoforms correlate with cellular differentiation but not with prognosis in human breast cancer.Cancer Res，1995，55：5424.

　　6，Ross JS，Rosario AD，Bui HX，et al.Expression of the CD_44v cell adherin molecules in urinary bladder transitonal cell carcinoma.Mod Pathol，1996，9：854.

　　7，Sugino T，Gorham H，Yashida K，et al.Progressive loss of CD₄₄ gene expression in invasive bladder cancer.Am J Pathol，1996，149：8732.

　　8，Gao AC，Lou W，Dong JT，et al.CD₄₄ is a metastasis suppressor gene for prostatic cancer located on human chromosome 11p¹³.Cancer Res，1997，57：846.

收稿2000-03-18