CD3AK细胞对大肠癌术后早期机体免疫功能的影响
中华实验外科杂志 1999年第3期第16卷 大肠外科
作者：侯冰宗 李绵 刘泓基 周志伟
单位：侯冰宗 李绵 周志伟 519000 珠海，暨南大学医学院第三附属医院肿瘤外科；刘泓基 桂林医学院附属医院
关键词： 大肠癌；CD3AK细胞；免疫
【摘要】 目的 动态观察CD3AK细胞输注对大肠癌术后早期机体免疫功能的影响。方法 将25例大肠癌患者分为A、B两组。A组13例，术后第1天开始使用CD3AK细胞治疗，共2个周期。B组12例，未用CD3AK细胞治疗。另以大肠良性肿瘤患者作为对照组(C组)。结果 A组患者的细胞免疫指标(CD3、CD4、CD4/CD8、NKC、IL-2R、T淋巴细胞转化率)及体液免疫指标(sIL-2R、TNF-α)在术后第1周开始迅速恢复且维持在高水平状态(P＜0.05)，而B组术后细胞免疫及体液免疫功能指标在术后第一周时较术前明显降低(P＜0.05)。A、B两组术后同期同指标相比较差异有显著性(P＜0.05)。C组外周血单个核细胞的分布及体液免疫功能指标在术前、术后相比较差异无显著性(P＞0.05)，但均比A、B组高。结论 应用CD3AK细胞治疗可纠正、恢复及提高大肠癌患者术后早期机体的细胞免疫和体液免疫功能。
Effect of CD3AK cells on early stage body immune function following operation of carcinoma of colon
HOU Bingzong, LI Mian, LIU Hongji, et al.
Department of Tumor Surgery, The Third Affiliated Hospital, Medical College of Jinan University, Zhuhai 519000
【Abstract】Objective To actively observe the effect of CD3AK cells'infusion on early stage body immune function following operation of carcinoma of colon.Method Twenty-five cases of patients with colon carcinoma were divided into group A and group B. In group A, 13 cases received the CD3AK cells therapy on the lst postoperative day for 2 cycles. In group B, 12 cases did not underwent the CD3AK cells'therapy. The patients with benign neoplasm of colon served as control group.Results In group A, the immune indices (CD3, CD4, CD4/CD8, NKC, IL-2R, T lymphatic cell transformation rate) and humorae immunity indices (sIL-2R, TNF-α) restored swiftly and could maintain at a high level (P＜0.05) on the lst postoperative week. In group B, the cellular immunity and humorae immunity indices remained obviously low (P＜0.05) on the lst postoperatively week, and restored gradually at a slower pace after the 2nd postoperative week. In group C the peripheral mono-nuclear blood cells' distribution and basal fluid immunity had no significant difference before and afeer-operatively (P＞0.05), but higher than in group A and B.Conclusion CD3AK cells could rapidly correct, restore and enhance the cellular and humorae immunity of the post-operative patients with colon carcinoma at early stage.
【Key words】 Carcinoma of colon CD3AK cell Immunity
我们通过采用在手术后即应用CD3AK细胞/IL-2(CD3 monoclonal antibody activated killer cell, CD3AK细胞；白细胞介素2，IL-2)对患者进行过继免疫治疗，探索该疗法对机体免疫功能的影响。
对象与方法
1、一般资料 25例大肠癌根治术后患者(均经病理证实)，其中男14例，女11例。年龄34～71岁(平均年龄51岁)。临床分期采用Dukes分期方法，Dukes'B期16例，Dukes'C期9例。分为A、B两组，A组13例，术后应用CD3AK细胞治疗，B组12例术后未行CD3AK细胞治疗，另设10例大肠良性肿瘤患者作为对照组(C组)。
2、IL-2(上海生物制品二厂产品)；CD3单克隆抗体(军事医学科学院产品)；RPMI 1640细胞培养基(美国gibcobr公司产品)。
3、CD3AK细胞的制作及活性测定(肿瘤生物治疗中心提供) 取正常献血员外周血经密度梯度离心所得富含淋巴细胞成分液，置于RPMI 1640细胞培养液，细胞浓度为1×106个/ml(细胞培养液含CD3单克隆抗体30 μg/L及IL-2 200 U/ml,PHA 10 mg/L,5%AB型人血清)，置于体积分数为5%的CO2孵箱37 ℃温育8～12天，收集不同时间的CD3AK细胞制成细胞悬液200 ml/瓶即用(内含CD3AK细胞2×108个)。同时取样留检，细胞活性＞95%。
4、CD3AK细胞输注 术后第1天开始，从外周静脉输入CD3AK细胞/IL-2、(细胞数为2×108个/次，IL-2：10万U)，1次/日，连续10天，休息5天为1周期，2周期为1疗程。
5、免疫指标测定 手术治疗前1周、手术后1周、2周、3周、4周分别测定患者外周血T淋巴细胞亚群(APAAP法)，T淋巴细胞转化率，NK细胞活性试验，IL-2R(采用间接免疫荧光法)，sIL-2(采用多抗单抗ELISA法)，TNF-α(酶联免疫法)。统计学处理：各项数据均用(
±s)表示，根据需要采用t检验或F检验。
结果
1、A、B、C组手术前后T细胞亚群的动态变化见表1。
2、A、B、C组手术前后NK细胞，IL-2R，T淋巴细胞转化的动态变化见表2。
3、A、B、C组手术前后血清sIL-2R，TNF-α的动态变化见表3。
表1 A、B、C组手术前后T细胞亚群的动态变化(±s)
| 组别 |
CD3 |
CD4 |
CD8 |
CD4/CD8 |
| A组(13例) |
| 术前1周 |
39.45±5.21# |
30.49±7.14# |
32.96±5.72 |
0.98±0.32# |
| 术后1周 |
50.23±4.13** |
38.41±5.12** |
26.79±3.21 |
1.51±0.27* |
| 术后2周 |
56.72±7.44** |
42.76±4.32** |
23.58±4.16 |
1.89±0.38* |
| 术后3周 |
59.06±6.83** |
45.51±6.62** |
22.48±3.27 |
2.17±0.41** |
| 术后4周 |
61.46±5.65* |
46.95±5.75* |
20.83±4.11* |
2.38±0.61** |
| B组(12例) |
| 术前1周 |
40.36±4.76## |
31.87±6.38# |
33.52±4.83 |
0.95±0.46 |
| 术后1周 |
21.55±4.13 |
23.63±4.31 |
27.01±4.21 |
0.93±0.31 |
| 术后2周 |
29.81±5.84 |
25.14±3.23 |
24.14±5.61 |
1.17±0.26 |
| 术后3周 |
37.19±6.65 |
32.48±5.53 |
28.67±3.27 |
1.22±0.35 |
| 术后4周 |
45.68±7.06 |
36.19±4.81 |
26.92±5.16 |
1.52±0.28 |
| C组(10例) |
| 术前1周 |
65.48±7.78 |
50.73±8.12 |
23.91±5.58 |
2.24±0.22 |
| 术后1周 |
61.43±6.45 |
54.76±7.45 |
20.37±4.31 |
2.51±0.28 |
| 术后2周 |
67.78±8.46 |
51.32±8.83 |
25.41±3.81 |
2.36±0.17 |
| 术后3周 |
62.26±6.83 |
55.37±8.01 |
19.33±3.42 |
2.46±0.31 |
| 术后4周 |
68.21±7.42 |
52.18±6.68 |
21.12±3.36 |
2.35±0.29 |
注：*P＜0.05；**P＜0.001(A组与B组同期同类指标相比较)；#P＜0.05；##P＜0.001(A组或B组术前与术后1周同类指标相比较)，下同。
表2 A、B、C组手术前后NK细胞、IL-2R、T淋转的动态变化(±s)
| 组别 |
术前1周 |
术后1周 |
术后2周 |
术后3周 |
术后4周 |
| NKC |
| A组(13例) |
23.41±4.89# |
32.25±4.43** |
35.12±5.34** |
39.67±3.16** |
39.32±5.78* |
| B组(12例) |
22.38±4.66 |
16.28±3.31 |
19.64±3.58 |
23.19±4.14 |
28.07±5.37 |
| C组(10例) |
43.83±6.34 |
40.08±5.37 |
45.91±7.72 |
42.42±6.90 |
46.63±6.57 |
| IL-2R |
| A组(13例) |
33.15±5.58# |
41.37±6.68** |
45.62±5.83** |
47.76±6.48** |
46.37±7.06* |
| B组(12例) |
34.22±4.48## |
20.61±3.27 |
26.45±3.78 |
31.32±6.35 |
37.57±6.81 |
| C组(10例) |
50.24±6.58 |
46.62±6.01 |
55.37±8.38 |
52.53±7.27 |
49.18±6.23 |
| T淋巴细胞转化率 |
| A组(13例) |
34.36±7.19# |
44.56±6.23** |
49.21±7.28** |
53.78±9.15** |
52.23±8.10* |
| B组(12例) |
33.54±6.39# |
23.17±5.61 |
30.54±7.04 |
35.27±6.93 |
43.94±8.82 |
| C组(10例) |
58.83±10.36 |
52.23±9.25 |
57.30±8.47 |
60.62±11.51 |
56.93±8.13 |
表3 A、B、C组手术前后血清sIL-2R、TNF-α的动态变化(±s)
| 组别 |
术前1周 |
术后1周 |
术后2周 |
术后3周 |
术后4周 |
| sIL-2R |
| A组(13例) |
858±189## |
485±107* |
354±87* |
316±93* |
384±115* |
| B组(12例) |
980±216# |
703±228 |
544±171 |
652±163 |
593±102 |
| C组(10例) |
239±69 |
276±103 |
196±96 |
221±108 |
263±82 |
| TNF-α |
| A组(13例) |
28.45±6.24## |
15.16±5.53** |
14.87±5.07* |
8.33±4.24* |
8.71±3.65* |
| B组(12例) |
27.04±5.38 |
30.15±6.81 |
20.16±5.39 |
19.22±5.65 |
14.36±4.48 |
| C组(10例) |
4.04±2.03 |
3.28±1.84 |
3.14±2.25 |
4.35±3.16 |
3.86±2.63 |
讨论 肿瘤宿主的免疫力，尤其是机体的细胞免疫功能与肿瘤的发生、发展有密切关系。T淋巴细胞的活化、分化、增殖除本身起到免疫监视及抗肿瘤作用之外，尚可促进NK细胞、Mφ细胞活性，促进B细胞分泌抗体等，是肿瘤免疫中的重要因素之一。目前常用于过继免疫治疗的细胞有TIL及LAK细胞等。基础和临床研究表明：CD3AK细胞是一种兼备LAK和TIL细胞优点和自己特点的肿瘤免疫效应细胞，具有细胞前体来源丰富，能在短期内大量扩增，体外可长期保持活跃的生长势态，抗瘤活性高以及IL-2依赖性低等优点。其杀瘤机制为：(1)直接接触杀伤肿瘤细胞；(2)分泌细胞因子：释放IL-2，TNF，IFN-r等，诱导B细胞转化为高效分泌抗体的浆细胞，提高机体的体液免疫力，间接杀伤肿瘤细胞。这为肿瘤的过继免疫治疗提供了更强大的物质基础。本研究显示：恶性肿瘤患者术前的T细胞亚群CD3、CD4均低于对照组，CD4/CD8比值下降，说明大肠癌患者免疫功能受到明显的抑制及调节紊乱。A组应用CD3AK细胞治疗，能迅速纠正大肠癌患者术后T细胞功能低下及紊乱状态，从而发挥机体早期自身抗肿瘤作用，克服了B组术后T细胞功能明显降低及恢复缓慢的缺点，这一点在肿瘤的治疗中具有特别重要的意义。关于预防肿瘤术后复发，提高肿瘤患者术后的生存率的问题，我们认为关键之一是在最大限度减少患者瘤负荷的基础上，尽快恢复、提高患者的机体免疫力，尤其是细胞免疫功能。因此，积极进行免疫治疗调节，尤其是具有强抗瘤效应细胞的继承疗法甚为重要。NK细胞具有免疫监视和直接杀伤肿瘤细胞的作用，TNF-α是一种重要的炎症介质，在机体免疫应答和肿瘤发展过程中起重要作用［1］。本研究中A组在短期内NK细胞的活性明显提高、IL-2R表达明显提高、sIL-2R及TNF-α明显下降。结果进一步表明：CD3AK细胞的治疗不仅能使细胞免疫功能增强，而且在体液免疫中同样发挥重要的作用。刘剑仑等［2］分析了肿瘤患者手术前后细胞免疫功能状态时发现，术后1周时细免疫功能明显降低，直至2周后才开始逐渐恢复。而术后2周内是及时杀灭残留肿瘤细胞以及抑制其生长、分化、浸润、转移的关键时期。本研究中B组得出同样的结论。而A组在机体的免疫力恢复方面，手术后1周机体免疫力即得到明显恢复、提高，与术前相比差异有显著性(P＜0.05)，第2周、第3周、第4周机体免疫力逐渐上升且维持在高水平状态，无B组在术后免疫功能先降低后回升的现象，避免了由手术打击所引起的机体免疫力明显减退的缺陷，从而更好地发挥术后早期机体的抗肿瘤作用。NK细胞、T淋巴细胞转化率以及CD4/CD8明显增加，特别是IL-2R由术前(28.93±4.12)上升至术后第4周的(45.93±7.89(P＜0.01)，更显示T淋巴细胞处于明显的激活增殖状态，这可能与CD3AK细胞杀灭或抑制肿瘤细胞，分泌细胞因子，解除机体荷瘤状态下患者免疫功能受到明显抑制的现象，提高机体体内免疫功能，促进免疫调节、免疫监视、及免疫活性细胞直接或间接发挥抗肿瘤作用有关。
本课题为广东省医学科研立项课题(No.B1997137)
参考文献
1 Nakazaki H. Preoperative and postoperative cytokines in patients with cancer. Cancer, 1992, 70:709-710.
2 刘剑仑，秦伟新，韦长元，等.大肠癌病人手术后细胞免疫功能的动态研究.中华实验外科杂志，1995，12：710-711.
(收稿：1998-12-03)
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