大肠癌P53蛋白PCNA和CEA的表达与淋巴结转移的关系

世界华人消化杂志 1998年第3期第0卷 研究原著

作者：许庆文¹　李岩松²　朱荷根¹

单位：广东医学院附属医院　1普外科　2病理科　广东省湛江市　524001

关键词：结肠肿瘤/病理学；直肠肿瘤/病理学；淋巴转移；蛋白质P53/代谢；增殖细胞核抗原/代谢；癌胚抗原/代谢

Relationship between expression P53 protein, pCNA and CEA in colorectal cancer and lymph node metastasis

XU Qing-Wen¹, LI Yan-Song² and ZHU He-Gen¹¹Department of Surgery, ²Department of Pathology, The affiliated Hospital of Guangdong Medical College, Zhanjiang 524001, Guangdong province, China

　　Subject headings　colonic neoplasms/pathology; rectal neoplasms/pathology; lymphatic metastasis; protein p53/metabolism; proliferating cell nuclear antigen/metabolism; carcinoembryonic antigen/metabolism

　　abstract

　　AIM　To study the P53 protein, PCNA and CEA expression and its relationship with lymph node metastasis in colorectal cancer.

　　METHODS　SP immunohistochemical method was used to examine the positive rates of P53 protein, PCNA and the phenotype of cEA in 44 cases of colorectal cancer.

　　RESULTS　The positive rate of P53 protein expression in colorectal cancer was 52.3%, which was not related to sex, age, tumor location, differentiation or invasion (P＞0.05). the frequency of lymph node metastasis in P53-positive cases was significantly higher than in P53-negative cases (14/ 23, 60.9% vs 6/ 21, 28.6%，P＜0.05). the cell proliferative activity in P53-positive and nodal metastasis cases were markedly higher than in P53-negative and non-nodal metastasis cases (55.9±1.7 vs 37.9±1.4，P＜0.05；56.2±1.5 vs 39.6±1.7，P＜0.05). the phenotype of CEA in both P53-positive and nodal metastasis cases was mainly the cytoplasm and stroma patterns (21/ 23, 91.3% vs 13/ 21, 61.9%，P＜0.05；19/20, 95.0% vs 15/ 24, 62.5%, P＜0.05).

　　CONCLUSION　P53, PCNA and CEA expression is important to determine the degree of malignancy and prognosis, and pre-dict lymph node metastasis of colorectal cancer.

　　中国图书资料分类号　R 735.34

　　摘　要

　　目的　研究大肠癌P53蛋白、增殖细胞核抗原(PCNA)和CEA的表达与淋巴结转移的关系.

　　方法　应用链霉菌素-生物素(SP)免疫组化法，观察44例大肠癌P53，PCNA的阳性率和CEA的表达型式.

　　结果　大肠癌P53阳性率为52.3%；大肠癌P53阳性表达与性别、年龄及肿瘤的部位、分化程度和浸润深度无关(P＞0.05)；大肠癌P53阳性者其淋巴结转移率较阴性者高(14/23，60.9% vs 6/ 21，28.6%，P＜0.05)；P53阳性表达及有淋巴结转移者其细胞增殖活性分别较P53阴性表达及无淋巴结转移者高(55.9±1.7 vs 37.9±1.4，P＜0.05；56.2±1.5 vs 39.6±1.7，P＜0.05)；P53阳性表达及有淋巴结转移者其CEA表型均以胞质型和间质型为主(21/23，91.3% vs 13/ 21，61.9%，P＜0.05；19/20, 95.0% vs 15/ 24，62.5%，P＜0.05).

　　结论　检测P53和PCNA表达及CEA表型对判断大肠癌的恶性程度，预测其淋巴结转移趋势和预后及指导临床治疗有重要价值.

　　0　引言

　　p53基因的突变或失活与多种肿瘤发生发展密切相关^［1］. p53蛋白过度表达被认为是大肠癌预后不良的表现^［2，3］.增殖细胞核抗原(PCNA)是一种增殖细胞的酸性核内蛋白质，它的出现与细胞增殖有关^［4］，对判断胃肠道肿瘤的预后有重要意义^［5］.我们用链霉菌素-生物素(SP)免疫组化法对大肠癌P53蛋白和PCNA表达及CEA的表达型式进行了检测，观察它们与淋巴结转移的关系.

　　1　材料和方法

　　1.1　材料　我院1996-04/11大肠癌患者手术切除标本44例.所有患者术前未经放疗和化疗.新鲜标本用常规福尔马林固定24 h，石蜡包埋，连续切片，HE染色.

　　1.2 方法　采用链霉菌素-生物素(SP)免疫组化技术，全部试剂盒购自美国Maxim公司，操作按说明书进行. pBS代替第一抗体作阴性对照. P53及PCNA阳性染色呈棕黄色颗粒定位于细胞核内.光镜下随机观察5个高倍视野共计500个细胞中的阳性细胞数，计算阳性P53和PCNA阳性细胞的百分数.当P53阳性染色的大肠癌细胞＞10%时定为P53染色阳性. pCNA阳性染色的大肠癌细胞数越多，表示大肠癌细胞的增殖活性越高.根据CEA免疫组化阳性反应的表达的部位分为3型：①Ⅰ型(膜型)，棕黄色颗粒主要局限于大肠癌细胞膜上；②Ⅱ型(胞质型)，棕黄色颗粒弥漫分布于整个胞质；③Ⅲ型(间质型)，棕黄色颗粒除见于胞质，还可见邻近癌细胞的间质内.

　　统计学处理　用χ²检验和t检验.

　　2　结果

　　2.1　P53表达与临床病理学特征　大肠癌标本44例中，P53染色阳性23例，占52.3%，周围非肿瘤部分的组织未见染色. p53阳性染色与患者的性别、年龄、肿瘤的位置及分化、浸润程度无明显关系，而与淋巴结转移有明显关系，即P53阳性肿瘤的淋巴结转移率(60.9%)，明显高于P53阴性的肿瘤(28.6%，表1).

表1　大肠癌P53表达与临床病理学特征

P53表达	n	PCNA标记率	CEA表型
		±s	Ⅰ	Ⅱ+Ⅲ
阳性	23	55.9±1.7a	2	21a
阴性	21	37.9±1.4	8	13

　　^aP＜0.05 vs 阴性.2.3　淋巴结转移与PCNA及CEA　大肠癌淋巴结转移与PCNA标记率和CEA表型有明显关系，即有淋巴结转移者其细胞增殖活性明显高于无淋巴结转移者；CEA表型以胞浆型和间质型为主(表3).

表3　大肠癌淋巴结转移与PCNA及CEA

淋巴转移	n	PCNA标记率	CEA表型
		±s	Ⅰ	Ⅱ+Ⅲ
阳性	20	56.2±1.5a	1	19a
阴性	24	39.6±1.7	9	15

　　^aP＜0.05 vs 阴性.3　讨论

　　近年来，抑癌基因在癌变过程中的作用越来越受到重视，野生型p53基因是一种抑癌基因，通过对细胞生长的调控和促进程序性死亡的发生而起抑癌作用，当其发生突变后，即变成突变型p53基因，其功能亦转为促癌作用.由于野生型P53蛋白的T_1/2很短，用免疫组化方法不易检出，而突变型P53蛋白的T_1/2延长，因此可以认为，免疫组化法阳性即提示突变型p53基因的存在^［2］.我们观察到，大肠癌P53蛋白表达的阳性率为52.3%，提示在人类大肠癌的发生过程中，p53基因突变是一个重要的遗传学事件；P53蛋白表达与大肠癌患者的性别、年龄、肿瘤的部位和分化、浸润程度无关，而与淋巴结转移、细胞增殖活性和CEA表型有明显关系.这进一步提示p53基因突变在大肠癌的发生发展以及淋巴结转移的过程中起着重要作用.突变型p53基因异常表达与大肠癌淋巴结转移相关性的机制还不清楚，但其相关性可为临床预测淋巴结转移趋势提供有用的信息.

　　PCNA是一种细胞增殖状态的理想标记物，其表达在细胞增殖周期G₁后期开始升高，G₁/S期交界时达高峰，S期持续高水平^［6］.这一表达特点说明该标记物适用于p53基因突变时细胞增殖状态的研究. p53蛋白表达阳性的大肠癌，其细胞增殖活性明显高于P53蛋白表达阴性者，表明突变型p53基因缺乏野生型p53基因具有的对细胞增殖的负调控作用，野生型p53基因一旦发生突变，将导致细胞的恶性增殖.此外，还发现有淋巴结转移者其细胞增殖活性也明显高于无淋巴结转移者，表明细胞增殖活性高的大肠癌更易发生淋巴结转移.因此，PCNA可作为反映肿瘤恶性程度的重要指标.

　　近年来注意到CEA表达型式可能与大肠癌生物学行为关系更密切^［7］.我们发现在大肠癌组织中，CEA有3种不同的分布型式，而且CEA的分布型式与大肠癌的淋巴结转移有明显关系.有淋巴结转移者，CEA表型以胞质型和间质型为主.这一结果与邱向南 et al^［8］的研究基本一致.表明CEA在大肠癌的表达型式与其生物学行为有关，胞质型和间质型更易发生淋巴结转移.至于CEA阳性物质出现于癌周围间质的机制还不清楚，邱向南等认为CEA进入间质可能是由于癌细胞在丧失了正常的情况下CEA主要在细胞顶缘表达的特性，逐渐分布于细胞的侧缘和基底缘，最后占据整个胞质，以致通过癌细胞的松散连接漏入间质.

　　总之，P53蛋白表达与PCNA的高表达有明显关系，P53蛋白、PCNA表达与CEA表型均和淋巴结转移有明显关系.因此可以认为，联合检测P53蛋白和PCNA表达及CEA表型对判断肿瘤的恶性程度，早期预测其淋巴结转移趋势，制定合理的治疗方案，改善患者预后有重要价值.

　　许庆文，男，1962-05-20生，广东省湛江市人，汉族.1985年广东医学院本科毕业，副主任医师，主要从事胃肠道肿瘤的研究，发表论文15篇.

　　通讯作者　许庆文，524001，广东医学院附属医院普外科，广东省湛江市霞山人民大道南57号.

　　Correspondence to: XU Qing-Wen, Department of Surgery, The affiliated Hospital of Guangdong Medical College, 57 Xiashan Renmin Avenue, zhanjiang 524001, Guangdong Province, China

　　tel. +86·759·2387083收稿日期　1997-11-10

　　4　参考文献

　　1　Porter pL, Gown AM, Kramp SG, Coltrera MD. Widespread P53 overexpression in human malignant tumor. Am J Pathol, 1992;140(1):145-153

　　2 Yamaguchi A, Kurosaka Y, Fushida S, Kanno M, Yonemura Y, Miwa K et al. expression of P53 protein in colorectal cancer and its relationship to short-term prognosis. Cancer, 1992;70(12):2778-2784

　　3 Starzyska T, Bromley M, Chosh A, Stern PL. Prognostic significance of P53 overexpression in gastric and colorectal carcinoma. Br J Cancer,1992;66(3):558-562

　　4　黄杰雄，黄致治. 增殖细胞核抗原的研究进展.国外医学生理病理科学与临床分册，1994；14(1)：9-11

　　5　Hickey K, Grehan D, Reid IM, O＇Briain s, Walsh TN, Hennessy TP. Expression of epidermal growth factor receptor and proliferating cell nuclear antigen predicts response of esophageal squamous cell carcinoma to chemoradiotherapy. Cancer, 1994;74(6):1693-1698

　　6 Robbins BA, Vega DDL, Ogata K, Tan EM, Nakamura RM. Immunohistochemical detection of proliferating cell nuclear antigen in solid human malignancies. arch Pathol Lab Med, 1987;111(9):841-845

　　7 Hamada Y, Yamamura M, Hioki K, Yamamoto M, Nagura H, Watanabe K. immunohistochemical study of carcinoembryonic antigen in patients with colorectal cancer. Cancer, 1986;55(1):136-141

　　8　邱向南，喻兵. 大肠癌生物学行为与CEA、EMA表达之间的关系.天津医药，1993；21(1)：13-15