鼠移植性肝癌内注射乙酸的治疗实验

世界华人消化杂志 1999年第1期第0卷 研究原著

作者：赵永锋^1，3　闻勤生¹　贾战生²

单位：赵永锋　闻勤生　第四军医大学唐都医院　消化科　贾战生　　传染科　710038；赵永锋　　武警技术学院医院内科　陕西省西安市　710086

关键词：肝肿瘤/治疗；乙酸；肿瘤移植；疾病模型，动物

　　中国图书资料分类号　R735.7

　　摘　要

　　目的　观察300mL/L乙酸局部注射治疗裸鼠移植瘤的效果，并探讨其作用机制.

　　方法　应用人肝癌(hHCC)细胞悬液接种于Balb/c nu/nu裸鼠皮下建立移植瘤模型共12只，分为3组，乙酸组5只注射300mL/L乙酸 0.15mL，乙醇组5只注射无水乙醇0.15mL，盐水组2只注射生理盐水0.15mL，2次/wk，共4次. 观察移植瘤生长情况.

　　结果　乙酸组移植瘤全部结痂、脱落，而乙醇组除一只裸鼠移植瘤结痂、脱落外其余均明显缩小(P＜0.05)，盐水组移植瘤呈结节样进行性生长. 病理学检查：乙酸组可见纤维组织未见肝癌细胞，乙醇组除大片组织坏死外可见散在的肝癌细胞团，盐水组肝癌细胞生长良好.

　　结论　300mL/L乙酸较无水乙醇能产生更广泛的组织坏死，可以代替无水乙醇局部注射治疗hHCC.

Local acetic acid injection in the

　　mice

ZHAO Yong-Feng^1,3, WEN Qin-Sheng¹ and JIA Zhan-Sheng²

　　¹Department of Gastroenterology, ²Department of Infectious Diseases, Tangdu Hospital, Fourth Military Medical University, Xi'an 710038, Shaanxi Province, China

　　³Department of Medicine, Hospital of Technical College of Armed Police Force, Xi'an 710086, Shaanxi Province, China

　　Subject headings　liver neoplasms/therapy; acetic acid; neoplasm transplantation; disease models, animal; nude mice

　　Abstract

　　AIM　To study the effect of 300mL/L acetic acid on the transplanted hepatic tumor in nude mice and its mechanism of action.

　　METHODS　Twelve nude Balb/c (nu/nu) mice were transplanted with human hepatocellular carcinoma line (hHCC) hypodermically, then divided into three groups. Five mice were injected locally with 300mL/L acetic acid, 5 with ethanol and 2with saline, 0.15mL twice weekly for 4 times, respectively.

　　RESULTS　All 5 mice of acetic acid group showed the scabbing and scaling of transplanted tumors while only 1 in the ethanol group presented the same (P＜0.05), but none of saline controls after therapy. Histopathologically, acetic acid group revealed local fibrosis without tumor cells and ethanol group tissue necrosis with scattering tumor cells but control only progressive growth of nodular carcinoma.

　　CONCLUSION　Three hundred mL/L acetic acid destroys effectively transplanted tumor in the nude mice and may replace ethanol as local injection to control human liver carcinoma.

　　0　引言

　　肝细胞性肝癌(HCC)进展快，手术切除率低. 故非手术疗法受到人们的极大重视. 多年来的动物实验和临床观察表明，应用不同制剂和方法直接对瘤体本身进行治疗，既具有疗效确切的优点，其毒副作用也比全身用药轻微. 寻找合适的药物和方法进行HCC的局部治疗是近来治疗研究的一个方向. 我们通过对Balb/c nu/nu裸鼠移植性HCC(简称移植癌)行300mL/L乙酸瘤体内注射治疗，观察其效果并与无水乙醇比较，拟为临床应用乙酸治疗HCC提供实验依据.

　　1　材料和方法

　　1.1　材料　人肝癌细胞hHCC由第四军医大学病理学教研室提供. 实验动物：Balb/c nu/nu裸鼠12只，(4～6)周龄，体重20.3g±2g，雌雄兼有，在SPF条件下饲养，由第四军医大学实验动物中心提供. 乙酸及无水乙醇均由西安精细化工厂提供，分析纯.

　　1.2　方法

　　1.2.1　人肝癌裸鼠模型的建立^［1］　hHCC细胞在37.0℃，50mL/L CO₂的孵箱内培养，于含100mL/L小牛血清的RPMI-1640培养液中贴壁生长，以2.5g/L胰酶消化液消化传代培养. 收集培养的hHCC细胞悬液，调整细胞浓度为1×10⁷/L，取0.1mL细胞悬液注入裸鼠右大腿背侧皮下. 20d后肿瘤平均为1.63cm×1.06cm，形成皮下移植瘤模型.

　　1.2.2　分组治疗和检查　将已接种好的裸鼠分成3组，乙酸和乙醇组各5只，盐水组2只. 用微量加样器在肿瘤组织长径中点局部注射给药，300mL/L乙酸组注射乙酸0.15mL，乙醇组注射无水乙醇0.15mL，盐水组注射生理盐水0.15mL，2次/wk，共4次. 注射前及末次注射后10d处死裸鼠，用精密卡尺测量瘤体的大小. 所有裸鼠均做系统剖检，取肿瘤，心肺肝肾组织做病理检查.

　　统计学处理　应用第四军医大学统计教研室SPLM软件处理，做方差分析和t检验.

　　2　结果

　　实验裸鼠食欲好，精神佳，生长良好. 生理盐水组裸鼠在1mo后因移植瘤体进行性增大而消瘦明显.

　　2.1　移植瘤体积的变化　各组治疗前瘤体积比较无差异，治疗后乙酸组与乙醇组比较有显著差异(P＜0.05)，盐水组与乙酸组及乙醇组比较有显著差异(P＜0.01，表1)，300mL/L乙酸组在第1次注射后，瘤体无明显增大或缩小，但瘤体中央部呈褐色，第2次注射后瘤体中央部坏死并出现结痂，第3次注射后瘤体坏死，结痂，9d～10d后结痂脱落，留下创面逐渐愈合. 乙醇组第3次注射后瘤体中央部有坏死出现，其中一只裸鼠坏死程度明显，第4次注射后该瘤体坏死，结痂，9d后干痂脱落. 盐水组瘤体呈结节样进行性生长(图1).

图1　第4次注射后瘤体的变化

表1　各组治疗前后鼠瘤体体积的变化

(±s，cm)

^aP＜0.05，vs 乙醇组；^bP＜0.01，vs 乙酸组和乙醇组.

　　2.2　移植瘤病理学改变　光镜下生理盐水组瘤体生长活跃，血管丰富，HCC细胞大；电镜下胞质各种细胞器结构良好，少量内质网轻度扩张. 乙酸组光镜下见大片的纤维组织，未见HCC细胞(图2). 乙醇组光镜下见大片的出血坏死及散在的HCC细胞团(图3)，电镜下见细胞膜破裂，胞质内各种细胞器破损，核膜破裂，核染色质固缩外溢(图4). 各组裸鼠的心、肝、肺、肾组织切片未见异常.

图2　乙酸组未见HCC细胞　HE×400

　　图3　乙醇组肿瘤组织大片坏死，可见HCC细胞团　HE×400

　　图4　乙醇组肿瘤细胞膜破裂，胞质内各种细胞破损、核膜破裂、核染色质固缩外溢　×7500

　　3　讨论

　　经皮肝穿刺对HCC肿块行各种局部治疗是近年来HCC介入治疗的重大进展. 1980年Ohto et al^［2］首先报道在超声引导下经皮肝穿刺HCC肿块内注射无水乙醇治疗肿瘤直径＜3cm的HCC患者以来，文献有较多关于瘤体内注射无水乙醇治疗HCC的动物实验及临床应用报告. 10a后有学者将瘤内注射无水乙醇治疗HCC应用于经肝动脉栓塞的大HCC残余癌灶的治疗，取得了良好的疗效^［3，4］. 其机制是通过高浓度乙醇对细胞的脱水和蛋白质的凝固作用以及对瘤体血管的闭塞作用使瘤体组织坏死. 但由于乙醇浸润能力有限，需要较大的无水乙醇量以及多次穿刺，多个疗程治疗，才能使肿瘤完全坏死. 这就不可避免地增加了各种副反应以及并发症，增加了针道种植的可能性. 为了提高疗效，减少注射次数，1994年Ohnishi et al^［5］首先报道用150mL/L～500mL/L乙酸经皮注射治疗小HCC具有强大的破坏肝细胞及HCC组织的作用，乙酸浓度在500mL/L时破坏能力最强. 目前，国内未见文献报道.

　　我们用300mL/L乙酸局部注射治疗移植瘤. 结果表明，300mL/L乙酸组疗效优于乙醇组(P＜0.05)，其结果与国外文献报道一致. 乙酸作为一种新的优于乙醇局部注射治疗HCC的药物，其优点是除具有与乙醇相似的细胞脱水，蛋白凝固和血管闭塞作用外，其浸润肿瘤组织的扩散能力及溶解穿透肿瘤组织内纤维分隔的能力强于乙醇. 局部注射可使肿瘤大块坏死，从而消除乙醇局部注射治疗小HCC时瘤周细胞的继续生长，而达到治愈肿瘤的目的或使肿瘤得到有效的控制. 乙酸局部注射治疗的次数也较乙醇少，且无副反应，故可以代替无水乙醇局部注射治疗HCC. 病例选择除小HCC外还适应于较大HCC的局部治疗及配合大HCC介入治疗后的综合治疗.

　　作者简介：赵永锋，男，1957-01-24，陕西省商州市人，汉族. 1983年第四军医大学空医系毕业，主治医师，主要从事消化内科临床工作，发表论文5篇，现在武警技术学院医院.

　　通讯作者　赵永锋，710086，武警技术学院医院内科，陕西省西安市三桥公路副6号.

　　Correspondence to:ZHAO Yong-Feng, Department of Medicine, Hospital of Technical College of Armed Police Force, Xi'an 710086, Shaanxi Province, China

　　Tel. +86·29·4512418 Ext. 3391

　　4　参考文献

　　［1］　米力，陈志南，徐力青，曲萍，何风昌，刘成刚. 人肝癌细胞裸鼠模型的建立及应用. 第四军医大学学报，1996；17：107

　　［2］　Ohto M, Karasawa E, Tsuchiya Y, Kimura K, Saiho H, Ono T. Ultrasonicolly guided percutaneous contrast medium injection and aspiration biopsy using a real-time puneture transducer. Radiology, 1980;136:171-176

　　［3］　罗鹏飞，胡景玲，陈晓明，林华欢. 经皮乙醇注射治疗肝癌栓塞术后残余癌灶. 中华消化杂志，1994；14：366

　　［4］　Tanaka K, Okazaki H, Nakamura S. Hepatocellular carcinoma: treatment with a combination the rapy of transcatheter arterial embolization and percutoneous ethanol injection. Radiology, 1991;126:179-213

　　［5］ Ohnishi K, Ohyama N, Ito S, Fujiwara K. Small hepatocellular carcinoma: treatment with US-guided intratumoral injection of acetic acid. Radiology, 1994;193:747-752

收稿日期　1998-07-06