慢性胃病T细胞亚群、一氧化氮、氨基己糖含量与Hp感染的研究
世界华人消化杂志 1999年第2期第0卷 专家述评
作者：张 辉 任锡玲 姚希贤
关键词：胃疾病；慢性病；T-淋巴细胞亚群；一氧化氮/分析；氨基己糖/分析；螺杆菌感染
中国图书资料分类号 R573
摘 要
目的 探讨慢性胃病患者T细胞亚群、一氧化氮(NO)、氨基己糖含量变化与Hp感染的关系.
方法 分别对30例慢性胃炎(CG)、32例消化性溃疡合并慢性胃炎(PU+CG)与20例正常对照分别进行T细胞亚群、NO、氨基己糖含量检测.
结果 CG患者外周血CD+3, CD+4, cD+8, CD+4/CD+8(60.7%±2.4%,35.8%±2.5%, 25.2%±2.4%，1.43±0.15)分别较正常对照组(68.3%±3.9%,43.0%±3.8%，26.4%±1.7%,1.64±0.18)明显降低(P＜0.05～0.01)；其Hp+组CD+3, cD+4(59.7%±2.5%，34.8%±2.6%)较Hp-组(62.2%±0.9%，36.9%±2.0%)为低(P＜0.01，0.05)；重度CG患者71%有Hp感染，其CD+3, cD+4, CD+4/ CD+8(59.5%±2.1%，35.4%±2.7%，1.40±0.13)分别均较轻中度患者(62.3%±1.7%，37.4%±1.8%，1.50±0.13)明显减低(P＜0.05～0.01). cG和PU+CG患者Hp感染率分别为60.0%和75.0%，其氨基己糖含量(mg/g，40±6，39±8)较Hp-组(45±8，51±7)明显减低(P＜0.05，0.01)；重度CG患者氨基己糖含量(mg/g，38±4)明显低于轻中度患者(47±8，P＜0.01). cG和PU+CG组NO含量(μg/L，2514±364, 2824±673)均明显高于正常对照组(μg/L,2227±214, p＜0.05,0.01)；其Hp+组NO含量(μg/L,2671±258,3071±398)均明显高于Hp-组(μg/L，2282±387,2579±668，P＜0.01，0.05)；重度CG和PU伴重度CG患者NO含量(μg/L，2656±251，2880±802)分别较轻中度患者明显增高(2328±413， 2403±284，P＜0.05，0.05).
结论 CG尤其是重症患者存在细胞免疫功能紊乱. cG，PU伴Hp感染患者胃粘膜氨基己糖含量随感染发生、发展呈进行性减低，血浆NO含量也随Hp感染、病变程度加重呈进行性升高.
T lymphocyte subsets, nitric oxide, hexosamine and Helicobacter pylori infection in patients with chronic gastric diseases
ZHANG Hui, REN Xi-Ling and YAO Xi-Xian
department of Gastroenterology, Second Hospital of Hebei medical University, Shijiazhuang 050000, Hebei province, China
Subject headings stomach diseases; chronic diseases; t-lymphocyte subsets; nitric oxide/analysis; hexosamine/analysis; Helicobacter pylori infections
Abstract
aIM To study the relationship among T lymphocyte subsets, NO, hexosamine and Hp infection in patients with chronic gastric diseases.
mETHODS Peripheral blood T lymphocyte subsets, plasma NO and hexosamine in gastric mucosa were measured respectively in 30 patients with chronic gastritis (CG), 32 patients with peptic ulcer and chronic gastritis (PU+CG) and 20 normal subjects.
rESULTS CD+3, CD+4, cD+8, CD+4/CD+8 in CG patients (60.7%±2.4%, 35.8%±2.5%,25.2%±2.4%，1.43±0.15) were significantly lower than those in normal controls (68.3%±3.9%,43.0%±3.8%，26.4%±1.7%,1.64±0.18,P＜0.05～0.01). cD+3, CD+4 in Hp+ group (59.7%±2.5%，34.8%±2.6%) were significantly decreased (Hp-, 62.2%±0.9%， 36.9%±2.0%，P＜0.01，＜0.05). in addition, the majority (71%) of severe CG had Hp infection, and their CD+3, CD+4, cD+4/ CD+8(59.5%±2.1%，35.4%±2.7%，1.40±0.13) were significantly decreased than that of mild to moderate CG patients (62.3%±1.7%，37.4%±1.8%，1.50±0.13，P＜0.05～0.01). in 30 CG patients and 32 PU+CG patients, Hp infection rate was 61.9% and 75.0%. The hexosamine level (mg/g) in Hp+ group (39.5±6.2，38.6±7.5) was significantly lower than that of Hp- group (45.3±7.7，50.7±7.3，P＜0.05，＜0.01). in severe CG patients, the hexosamine level (mg/g) (38.0±3.8) was significantly lower than that in mild and moderate CG (47.0±7.6，P＜0.01). plasma NO (μg/L) levels in CG and PU+CG (2514±364, 2824±673) were significantly higher than that of normal controls (2227±214,P＜0.05,＜0.01). the NO levels in both Hp+ groups (2671±258,3071±398) were significantly higher than that of Hp- group (2282±387,2579±668,P＜0.01，＜0.05). the NO levels in both groups with severe CG (2656±251， 2880±802) were significantly higher than that of mild to moderate CG (2328±413，2403±284，P＜0.05，＜0.05).
cONCLUSION The cellular immunity is impaired in CG patients especially severe cG with Hp infection. The hexosamine level in gastric mucosa is decreased in CG and PU+CG patients. The severer the gastric mucosa is impaired by Hp infection, the lower the hexosamine level. The plasma NO levels in CG and PU+CG patients were increased to varying extent. The severer the gastric mucosa is impaired by hp infection, the higher the NO level.
0 引言
慢性胃炎(CG)和消化性溃疡(PU)是常见多发病，Hp感染是CG的主要致病因子，并与PU的发病有关.为此我们对30例CG，32例PU合并CG患者进行了T淋巴细胞亚群、NO、氨基己糖含量检测，藉以探讨慢性胃病患者Hp感染与NO、氨基己糖含量及其免疫功能的关系.
1 材料和方法
1.1 材料 1997-10/1998-01经我院内镜病理检查证实PU合并CG32例，男23例，女9例，年龄20岁～68岁，平均43.2岁；CG 30例，男18例，女12例，年龄24岁～66岁，平均44.3岁.并以相当年龄健康献血员20例为正常对照组.病例选择均除外内分泌及肝脏等其他脏器疾患.
1.2 方法 外周血T-淋巴细胞标本的采取为空腹静脉血1mL，肝素抗凝，待测.胃粘膜组织采取位于胃窦部距幽门口3cm内小弯、前壁组织各2块. t细胞亚群测定采用FCM方法. 应用美国Becton-Dickinson公司生产的FACS420型流式细胞仪.激光光源为2W氩离子激光，波长488nm，FITC发出的绿色荧光以520nm的长通滤片用于荧光检测.测量数值和图形输入Hp-300 Consort 30微机，应用相应程序进行资料处理. hp检测：①尿素酶试验：采用中外合资三强生物有限公司出品的Hp快速诊断试剂盒.②胃粘膜活检标本涂片Gram染色. 按Monshoy分级法：0级为无菌；Ⅰ级为认真寻找可见；Ⅱ级为在多数高倍视野下可见；Ⅲ级为很多或成堆.③Warthin-Starry染色组织学检查. 上述检查2项以上阳性确定为Hp感染.病理：HE染色用于观察粘膜炎症变化，按炎性细胞浸润范围分为3级：①轻度：炎性细胞浸润于胃小凹或肠绒毛底部以上；②中度：炎性细胞浸润达腺体固有层；③重度：炎性细胞浸润深达粘膜肌层［1］.氨基己糖测定：将胃粘膜组织2块，用人工组织研磨器将洗净的粘膜组织研磨成匀浆1mL，离心取上清液，-20℃保存备检.①测定上清液蛋白含量：取上清液和标准液各20μL，考马斯亮蓝G250试剂500μL、波长600nm，Cobas mira自动分析仪(瑞士Roche公司生产)测定. ②取粘膜匀浆上清液0.5mL，加浓HCl0.5mL，混匀，高压(147kPa) 30min后加8.3mol/L的NaOH和乙酰丙酮溶液各0.5mL，并置沸水浴中15min，冷却后Cobas mira全自动生化分析仪测定，结果以mg/L表示. ③氨基己糖计算：氨基己糖(mg/g)=上清液氨基己糖mg/L/上清液蛋白质g/L. nO测定：①前处理过程：取血浆200μL，加等量乙腈，摇匀后离心10min(5000r/min)，此步骤重复1次，取上清液10μL，进样.②仪器：美国Waters公司产Baseline810高效液相仪，486紫外检测器.③色谱条件：流动相2.5mmol/L LiOH水溶液+50g/L乙腈，流速1.2mL/min，柱温40℃，检测波长214nm，分析IC-Pak anion, 4.6mm×5cm(美国Waters公司)，检测时间10min.
统计学处理 各种数据均用
±s表示，两样本均数采用t检验，P＜0.05有显著差异性.
2 结果
2.1 CG患者T细胞亚群 CG患者总淋巴细胞(CD3+)、辅助细胞(CD4+)、抑制细胞(CD8+)明显低于正常人(P＜0.05～0.01).且CD4+/CD8+亦较正常为低，具有显著性差异(P＜0.01，表1).在30例患者中，Hp感染(+)者18例，占60%，其CD3+,CD4+均较Hp(-)者明显减低(P＜0.01，0.05).但CD4+/CD8+无明显变化(见表2). 就CG病理分级而言，重度CG患者CD3+，CD4+，CD4+/CD8+分别较轻中度者明显减低(P＜0.01，0.05，0.05，表3).
表1 CG患者T细胞亚群 (±s,%)
| 淋巴细胞 |
慢性胃炎(n=30) |
正常对照组(n=20) |
| CD+3 |
60.7±2.4b |
68.3±3.9 |
| CD+4 |
35.8±2.5b |
43.0±3.8 |
| CD+8 |
25.2±2.4a |
26.4±1.7 |
| CD+4/CD+8 |
1.43±0.15b |
1.64±0.18 |
aP＜0.05，bP＜0.01，vs正常组.
表2 CG患者Hp感染T细胞亚群 (±s,%)
| 淋巴细胞 |
Hp(+)(n=18) |
Hp(-)(n=12) |
| CD+3 |
59.7±2.5b |
62.2±0.9 |
| CD+4 |
34.8±2.6a |
36.9±2.0 |
| CD+8 |
25.3±2.5 |
25.0±2.3 |
| CD+4/CD+8 |
1.42±0.17 |
1.45±0.12 |
aP＜0.05，bP＜0.01，vs hp(-).
表3 CG病理分级与T细胞亚群 (±s,%)
| 淋巴细胞 |
轻中度(n=13) |
重度(n=17) |
| CD+3 |
62.3±1.7 |
59.5±2.1b |
| CD+4 |
37.4±1.8 |
35.4±2.7a |
| CD+8 |
25.5±2.1 |
24.9±2.6 |
| CD+4/CD+8 |
1.50±0.13 |
1.40±0.13a |
aP＜0.05，bP＜0.01，vs轻中度.
2.2 氨基己糖含量 本组CG 30例氨基己糖含量随病变加重而减少(P＜0.01). hp感染组更低(P＜0.05，表4). PU+CG者Hp感染率较高，24例Hp感染组较无感染组明显减低(P＜0.01，表4).
表4 CG，PU+CG Hp感染与氨基己糖变化 (±s，mg/g)
| |
CG |
PU+CG |
| Hp(+)
(n=18) |
Hp(-)
(n=12) |
Hp(+)
(n=24) |
Hp(-)
(n=8) |
| 氨基己糖 |
40±6 |
45±7 |
39±8 |
51±7 |
aP＜0.05，bP＜0.01，vs hp(-).
2.3 CG，PU+CG组 NO明显高于正常对照组(P＜0.05，0.01)，而且PU+CG患者NO含量较CG患者为高(P＜0.05). cG,PU+CG中Hp感染组NO含量分别较无感染组明显增高(P＜0.01，0.05，见表5).重度CG和PU+重度CG组NO含量较轻中度患者明显增高(P＜0.05，见表5).
表5 CG,PU+CG Hp感染与病理分级血浆NO变化 (±s,μg/L)
| |
CG |
PU+CG |
| Hp(+) |
2671±258 |
3071±398 |
| Hp(-) |
2282±387 |
2579±668 |
| 轻中度 |
2328±413 |
2403±284 |
| 重度 |
2656±251 |
2880±802 |
aP＜0.05，bP＜0.01，vs hp(-);cP＜0.05，vs 重度.
3 讨论
3.1 T细胞亚群 CG的发生与Hp感染关系密切，但对其与T细胞亚群关系的研究尚乏报道.我们的结果表明，CG患者外周血CD3+，CD4+，CD8+，CD4+/CD8+均较正常对照组减低，表明本病患者多有细胞免疫功能减低与免疫调节紊乱.为了进一步探讨本病T细胞亚群变化与Hp感染的关系，又将之分为有无Hp感染两组进行比较，结果显示，Hp感染组较无感染组CD3+，CD4+明显减低；而CD8+，CD4+/CD8+变化不明显，说明本病患者Hp感染可能与细胞免疫功能减低有关.为探讨病变轻重与免疫功能的关系，按病理分级观察了T细胞亚群的变化，结果发现，重度CG患者(71%有Hp感染)较轻中度患者CD3+，CD4+，CD4+/CD8+明显减低.提示，CG尤其重症患者多有免疫功能异常，此与Hp感染导致本病的发生发展可能有关.
3.2 氨基己糖含量 胃粘液-碳酸氢盐屏障是构成胃粘膜屏障主要因素.粘液成分为多聚糖蛋白、电解质、肽和脂质等. 研究表明，Hp的定植与脂多糖、尿素酶、空泡毒素以及粘附素等致病因子有关［2］.氨基己糖可反映粘液糖蛋白的含量［3］，因而，本实验系藉胃粘膜氨基己糖含量检测评价Hp对胃粘膜屏障损害情况.结果发现，CG，PU+CG患者Hp感染(+)者，氨基己糖含量较无Hp感染者明显降低.就病变程度而言，中重度炎症者Hp感染率分别为60.7%，74.2%，Hp感染导致胃粘膜氨基己糖含量减低，并随感染病变加重含量更为减低.重度炎症氨基己糖含量较轻中度者明显减低. 提示，Hp是藉破坏粘液、糖蛋白等维持胃粘膜屏障因素导致胃粘膜炎症或重度胃炎的重要致病因素.
3.3 血浆NO NO系机体多功能调节物质，具有多种生物活性. nO分子参与消化道许多生理、病理调节作用，内源性NO是维持胃粘膜血流灌注的重要递质，除维护胃粘膜血流，保护胃粘膜外，还可能对胃粘膜微循环的血小板凝集具有抑制作用，本组CG，PU+CG者血浆NO含量明显高于正常，而且PU+CG者NO含量较单纯CG者更为增高，表明CG，PU+CG hp(+)者NO含量分别较Hp(-)组明显增高. 就病变程度而言，重度CG，PU+重度CG者血浆NO含量较轻中度者明显增高.表明CG Hp感染NO含量明显增高，此与细菌感染诱发炎症细胞产生大量NO可能有关［4］，是否为机体防御Hp入侵的一种手段有待进一步证实.
作者简介:张辉，女，1963-06-08生，天津市人，汉族.1986年河北医科大学本科毕业，医学硕士，主治医师，曾发表论文6篇，参编专著5部.
通讯作者 张辉，050000，河北医科大学第二医院内科，河北省石家庄市和平西路215号.
Correspondence to:ZHANG Hui, Department of Gastroenterology, second Hospital of Hebei Medical University, 215 Hepingwestroad, Shijiazhuang050000, Hebei Province, China
tel. +86·311·7046901 Ext. 6413(O)
作者单位 张 辉 任锡玲 姚希贤 河北医科大学第二医院内科 河北省石家庄市 050000
4 参考文献
［1］ 李尚勤，徐克成，左建生，孟宪庸.不同疗法对十二指肠溃疡治疗作用的探讨. 中华内科杂志，1995；34：623-624
［2］ 张万岱. 幽门螺杆菌研究的现状与展望.中华消化杂志，1998；18：5-6
［3］ 钱伟，侯晓华，谢小平，张锦坤.消化性溃疡与粘膜中糖蛋白含量的关系. 中华消化杂志，1993；13：232
［4］ Stuehr DJ, Marletta MA, Mammalian nitrate biosynthesis: mourse macrophages produce nitrate and nitrate in response to Escherichia Coli lipopolysacaride. Proc Natl Acad Sci USA, 1985;82:7738-7742
收稿日期 1998-07-15 修回日期 1998-11-20
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