补肾健脾中药对哮喘模型大鼠肺组织β-肾上腺素能受体的影响

中药新药与临床药理 2000年第2期第11卷 药效与毒理学研究

作者：包照日格图　吴敦序　陈淑俊　吴昆懿　童舜华　奚蓓莉

单位：包照日格图（上海市气功研究所，上海 200030）；吴敦序　陈淑俊　吴昆懿　童舜华　奚蓓莉（上海中医药大学 中医基础理论教研室，上海 200032）

　　关键词： 龟芪散；药理学；补肾定喘汤；药理学；加味六君子汤；药理学；哮喘；中药疗法

　　摘要：采用放射配基结合分析法观察补肾健脾方龟芪散，补肾方补肾定喘汤和健脾方加味六君子汤扶正三方对连续激发哮喘的大鼠肺组织β-肾上腺素(β-AR)的影响。结果表明，激发后肺组织胞膜β-AR逐日下降，第7天明显低于正常对照组，激发第7天，扶正三方可明显上调哮喘大鼠肺组织β-AR密度。以上实验结果提示，扶正三方防治哮喘可能与其上调β-AR作用有关。

　　中图分类号：R245.5　文献标识码：A

　　文章编号：1003-9783(2000)02-0098-03

Effect of Kidney-Nourishing and Spleen-Invigorating Chinese

　　Medicine on β-Adrenergic Receptor of Lung Tissue in Rats with Asthma

Bao Zhaorigetu

　　（Shanghai Institute of Qigong,Shanghai,200030）

　　Wu Dunxu

　　（Department of Basic Theory

　　of Traditional Chinese Medicine,Shanghai University of TCM.Shanghai,200032）

　　Chen Shujun

　　（Department of Basic Theory

　　of Traditional Chinese Medicine,Shanghai University of TCM.Shanghai,200032）

　　Abstract：Radioligand-binding assay was applied to observe the effect of Guiqi San(GS),Bushen Dingchuan Tang(BDT) and Jiawei Liujunzi Tang(JLT)on β-Adrenergic receptor(β-AR)of lung tissue in rats with asthma induced by continuous excitation.The results showed that β-AR density in asthmatic rat group decreased day by day and was much lower than the normal control on 7th day after excitation,and GS,DT,JLT increased the decreasing level of β-AR.It is indicated that the mechanism of the above three formula for asthma is related to the increase of β-AR density in lung tissue.

　　Key　words：@Guiqi San/pharmacol.;@Bushen Dingchuan Tang/pharmacol.;Jiawei Liujunzi Tang/pharmacol.;asthma/TCD ther.

　　补肾健脾是中医药防治支气管哮喘的主要方法。我们在临床上长期应用补肾健脾方龟芪散、补肾方补肾定喘汤、健脾方加味六君子汤防治支气管哮喘的基础上，通过动物实验直接观察哮喘大鼠肺组织β-AR结合位点数(RT)的变化来探讨中药治疗哮喘的作用机理。

　　1　材料与方法

　　1.1.　试剂　卵蛋白，Sigma公司产品；百日咳杆菌疫苗，由上海市传染病研究所提供；丙酸倍氯米松(商品名为必可酮，以下简称必可酮)，重庆葛兰素制药有限公司产品；无载体¹²⁵I-NaI，Amersham公司产品；¹²⁵I-心得静，我校同位素室标记，比活度为2176Ci/mmol；心得安，北京制药厂产品。

　　1.2　中药　龟芪散，由黄芪、人参、白术、甘草、龟板、鹿角片、巴戟和紫河车等21味中药组成。加工制粉与鼠饲料相混匀，制成饼备用；补肾定喘汤由熟地、巴戟天、肉苁蓉和鹿角片等11味中药组成，制成浓度为3490g/L的水煎液；加味六君子汤由黄芪、人参、白术和甘草等9味药组成，制成浓度为2010g/L的水煎液。以上中药均由上海药材公司提供。

　　1.3　动物　雄性SD大鼠，体重200g左右，由上海计划生育研究所提供。

　　1.4　大鼠哮喘模型制备　参照吕国平等人的方法^［1］略加改动。先将动物随机分为正常对照组、模型组、龟芪散组、必可酮组及龟芪散加必可酮组，观察24h。然后，除正常对照组外，其余各组再分第1、3、7天组，腹腔注射卵蛋白100mg，灭活百日咳杆菌疫苗5×10⁹个和氢氧化铝干粉100mg致敏，2周后予超声雾化吸入1%卵蛋白激发。每天上午8～9时吸入20min重复激发。正常对照组用生理盐水代替抗原液进行注射和雾化吸入。各组在相应预定时间处死，摘取肺脏。

　　1.5　给药方法　龟芪散在哮喘激发前2周开始给药，含药物饲料吃净，补加普通饲料，直至动物处死为止，每鼠服用剂量为2.4g/d；补肾定喘汤和加味六君子汤每鼠服用剂量分别为3mL/d，哮喘激发前2周开始给药，哮喘激发期间继续给药，直至实验结束。必可酮在每日激发哮喘的同时予以每鼠喷雾吸入0.1mg/d，对照组吸入等容积生理盐水。

　　1.6　肺组织测定　肺组织放入加蔗糖缓冲液中，以细胞分散器粉碎，然后以teflon匀浆器匀浆，27000g离心15min，取沉淀以反应缓冲液配成所需浓度的膜蛋白悬液。反应试管中加入¹²⁵I-心得静50μL和膜蛋白悬液200μL，平行非特异管另加入100μL心得安，总容积为400μL。以上操作均在0～4℃中进行。37℃水浴中反应30min后，收集结合部分于玻璃纤维滤膜上，以放射免疫γ计数器测量放射性。再以公式算出结合位点数(RT)，结合位点数=(总结合-非特异性结合)/［仪器效率×比活度×蛋白量(mg)］^［2］。1.7　蛋白含量测定　用 Lowry 微量定蛋白法^［2］。

　　2　结果

　　2.1　补肾健脾中药对哮喘大鼠肺组织-AR的RT值的影响

　　上表显示，哮喘激发第1天，除必可酮组外，各组大鼠肺组织β-AR的RT值相比较无明显差异。哮喘激发第3天，模型组β-AR的RT值和正常对照组β-AR的RT值相比较下降明显(P＜0.05)。各用药组与模型组比较，无明显差异。哮喘激发第7天，哮喘模型组β-AR的RT值显著下降，与正常对照组β-AR的RT值相比较P＜0.01，有非常显著性意义。各用药组与模型组比较，有显著性差异。各用药组组间β-AR的RT值无明显差异。提示扶正三方均可上调哮喘大鼠肺组织β-AR的RT值。

表 1　补肾健脾中药对哮喘大鼠肺组织β -AR 的 RT 值的影响 (±s)

　　与正常对照组比较，^△P＜0.05，^△△P＜0.01；与模型组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01。3　讨论

　　支气管哮喘是以呼吸道慢性非特异性炎症和阵发性通气障碍为主的疾病，其病理生理变化涉及到免疫系统和神经内分泌系统多个环节。其中肾上腺素能β-AR功能低下是重要一环。临床上通常采用糖皮质激素(GC)与β-AR激动剂联合用药，通过前者的抗炎，细胞膜稳定，改善β-AR的亲和力及促进β-AR的mRNA转录等诸方面上调β-AR^［3，4］，但副作用较大，且不易克服。我们的临床实践表明，补肾健脾中药与皮质激素和β-AR激动剂联合用药，可使发作容易控制和减少皮质激素及β-AR激动剂的副作用。龟芪散、补肾定喘汤和加味六君子汤是吴敦序教授在长期的临床实践中用于防治支气管哮喘发作的常用方剂。龟芪散组方由补肾健脾两类中药组成，方义为温补肾阳，纳气利水，补益肺脾之气，堵截生痰之源；补肾定喘汤是以“金匮肾气丸”为基础，以温补肾阳为功用；六君子汤则是健脾化痰的名方,随症加减可加强疗效。

　　研究结果显示，哮喘大鼠肺胞膜β-AR的RT值随哮喘持续激发而逐日下降，在第3天即低于正常对照组，在第7天进一步下降达最低水平。在哮喘激发第7天，扶正三方均可使已经下降的哮喘大鼠肺组织β-AR结合位点数显著上调，和皮质激素的疗效一致。其中，龟芪散的β-AR上调作用最强。可见，补肾健脾中药方与GC一样对β-AR具有上调作用，从而发挥防治支气管哮喘发作的疗效。

　　作者简介：黄芒莉，女，副主任技师，1988年获WHO奖学金赴日本进修

　　特殊毒理学，现从事新药药理、毒理研究工作

　　参考文献：

　　［1］吕国平，崔德健，郭英江，等.介绍一种建立 SD 大鼠哮喘模型的实验方法［J］.中华结核和呼吸杂志，1995，18：377.

　　［2］易宁育，夏宗勤，胡雅儿，等.知母皂甙元对 β-肾上腺素受体的调节作用［J］.中药药理与临床，1992，8(5)：40.

　　［3］Mak, JCW, Adcock, I,Barnes PJ.Dexamethsone increase β₂-adrenoceptor gene expression in human lung(abstract)［J］.Am Rev Respir Dis, 1992, 145:A834.

　　［4］Wallukakt G, Wollenberger A. Autoantibodies tobeta2-adrenergic receptors with antiadrenrgic activity frompatients with allergic asthma ［J］.J Allergy Clin. Immunol, 1991,88:581.

收稿日期：1998-09-28