API在感染性腹泻病原菌鉴定中的应用

黑龙江医药科学 2000年第3期第23卷 临床研究

作者：蒋金芬　来汉江　佘军

单位：蒋金芬（萧山市人民医院检验科 311200）；来汉江（萧山市人民医院检验科 311200）；佘军（萧山市人民医院检验科 311200）

关键词：API；感染性腹泻；病原菌；鉴定

　　提要 近两年来我院使用法国生物－梅里埃生产的API试条，对门诊和住院病人粪便，标本中分离到的398株菌株进行鉴定。发现除志贺菌沙门菌属外其它感染性腹泻，致病菌明显增多。认为腹泻病人不仅对志贺菌属，沙门菌属或霍乱弧菌加以重视外。也不能忽视其它病原性弧菌如气单胞菌属、念珠菌等。而对临床大量使用抗生素而导致肠道菌群失调大量念珠菌生长，对临床医生合理使用抗生素提供依据。

Application of API in indentification of pathogen of infective diarrhea

Jiang Jinfen, et al

　　Abstract 398 strains of microbe from clinical stool specimens were indentified in API system in recent two years. It was found that some pathogens of infective diarrhea were increased significantly besides shigella and salmonlla. Therefore other pathogens such as. aeromonas and candido can't be ignored in diarrhea patients except that shigella,salmonlla and V. cholerac were atlached to importance, which helps clinician select proper antibiotics.

　　Key words API; infective diarrhea; pathogen; indentify

　　近几年来弧菌属及气单胞菌属等引起急性感染性腹泻，日益受到国内外微生物学专家的重视^[1]。但临床微生物实验室的腹泻粪便培养，以往只着重于志贺菌属，沙门菌属或霍乱弧菌的检出，对其它病原性弧菌^[2]，气单胞菌属，念珠菌等甚为忽视，故大多被漏检或误认为非致病菌。本文报道1997～1998年从门诊和住院腹泻病人的粪便中共分离培养出398株病原菌，现报道如下。

　　1 材料与方法

　　1.1 标本来源

　　本院肠道门诊急性腹泻患者和住院腹泻患者的粪便。

　　1.2 细菌培养

　　采集腹泻粪便，同时接种SS平板，伊红美蓝平板，沙保平板及碱性胨水中，其中碱性胨水经35℃增菌6～8h后挑取表面培养物划线接种于4号琼脂，置35℃培养18～24h，观察平板挑取可能菌落作生化鉴定。

　　1.3 生化鉴定

　　自上述4种选择性分离平板上挑取可疑菌落，如需纯分离则接种于营养琼脂平板培养18～24h，作涂片染色，氧化酶试验，然后用法国生物梅里埃生产的API试条进行鉴定。对革兰阴性，氧化酶(-)菌株用API-20E作生化鉴定；如为氧化酶(+)细菌则选用API-20NE作生化鉴定；酵母菌用API-20 CAUX作生化鉴定。根据生化反应的结果，对志贺菌，沙门菌用诊断血清分型。

　　1.4 药敏试验

　　均采用法国生物梅里埃生产ATB药敏试条进行药敏试验，试验方法及判断结果按ATB操作说明书进行。

　　2 结果

　　389株感染性腹泻病原菌的种别分布，结果见表1。志贺菌与沙门菌的血清型分布，结果显示，志贺菌以福志贺菌为主，有128株，占94.8%；宋内志贺菌5株(3.7%)，痢疾志贺菌2株(1.5%)。沙门菌以伤寒沙门菌占第1位，有36株，占53.7%。乙型副伤寒沙门菌17株(25.4%)，鼠伤寒沙门菌3株(4.5%)，丙型副伤寒沙门菌3株(4.5%)，猪伤寒沙门菌2株(3.0%)，肠炎沙门菌6株(9.0%)。

表1 398株病原菌的种别分析

　　3 讨论

　　我们对近两年门诊和住院病人粪便标本中分离到的398株病原菌进行鉴定。发现除志贺菌沙门菌属的其它感染性腹泻致病菌明显增多，本组资料结果显示：感染性腹泻50.7%，由志贺菌沙门菌属所致，其后依次为弧菌属，32.9%(副溶血弧菌23.4%，河弧菌3.8%，拟态弧菌2.3%，溶藻弧菌1.7%，梅氏弧菌1.2%，霍利斯弧菌0.5%)；念珠菌属8.0%(白色念珠菌4.0%，热带念珠菌2.0%，光滑球拟酵母菌1.2%，克柔念珠菌0.8%)；气单胞菌属5.3%(嗜水气单胞菌3.3%，温和气单胞菌1.2%，豚鼠气单胞菌0.8%)小肠结肠耶尔森菌2.3%；类志贺邻单胞菌0.8%。目前引起腹泻不可忽视的病原菌是致病性弧菌，念珠菌、气单胞菌。其中致病性弧菌比郑联德等^[1]1987年报道用常规粪便培养基分离的弧菌属检出率为1.49%(副溶血弧菌1.43%；溶藻弧菌0.06%)高得多。原因是：以往实验室在分离肠道致病菌中，对弧菌认识不够。不注意弧菌的分离，鉴定非常困难，造成很多可以分离的弧菌被遗漏或错定。本组实验中有131株弧菌，包括6个种别，而郑德等^[1]1987年报道只有两个种，原因是：在分离弧菌过程中，如果按照以前单凭血清学和盐类试验，很容易把拟态弧菌误认为不凝集弧菌。把河弧菌、溶藻弧菌、霍利斯弧菌误认为副溶血弧菌。而我们使用的API-20NE鉴定系统能够在24h内准确地把各类弧菌鉴定到种。从而使我们分离出较多种类的弧菌，使临床能更快更准确地诊断和治疗。131株弧菌及21株气单胞菌引起的腹泻，均为散在发生，未造成流行(患者发病前大多数吃过海产品)，其主要临床症状多呈急性肠炎，以分泌型腹泻为主。两类菌群所致腹泻的临床表现不易鉴别，唯一通过病原学检查，鉴定，才是区别两类菌群与其它病原体引起腹泻病的可靠方法。本组实验中有32株(8.0%)念珠菌引起腹泻，这主要与临床滥用抗生素有关，因临床大量使用抗生素而导致肠道菌群失调，粪便培养出现菌群紊乱，大量念珠菌生长，当临床停止使用抗生素一段时间后，腹泻自然好转。所以需提示临床医生要注意合理使用抗生素，防止用药引起腹泻。

　　参考文献

　　1.郑联德.空肠弯曲菌,亲水气胞菌和耶尔菌肠炎临床与实验研究.中华传染病杂志,1987;5:210

　　2.程知义.引起急性腹泻的新弧菌.中华传染病杂志,1985;6:52

　　3.郑联德.急性感染性腹泻临床与实验研究.中华医学杂志,1984;64(5):360

(1999-12-16收稿)