利用流式细胞术对老年冠心病患者血小板活化状态的研究

中华老年医学杂志 2000年第3期第19卷 论著摘要

作者：张锑　张春青　丛亚琴　郭亦缓　徐从高

单位：（250012 济南市，山东医科大学附属医院流式细胞室）

　　流式细胞术(FCM)以其快速、敏感、准确、特异的优点被广泛用于临床活化血小板的检测。我们于1996年11月至1999年2月用抗活化血小板单克隆抗体(McAb)作探针，测定了67例老年冠心病患者及32例健康人血小板膜糖蛋白CD63(GP53)、CD62P(GMP140)、凝血酶敏感蛋白(TSD)的变化，以探讨老年人冠心病患者血小板活化程度及临床意义。

　　一、资料与方法

　　临床资料：健康对照组32例，均无心脑血管疾病、高血压及糖尿病史，2周内均无服用影响血小板功能药物史，其中男19例，女13例，年龄60～77岁，平均68.1岁。冠心病组67例，均为山东医科大学附属医院住院或门诊病例，男44例，女23例，年龄62～78岁，平均68.3岁；其中不稳定型心绞痛(UA)39例，稳定型心绞痛(SA)11例，心肌梗死17例，均符合1979年WHO制定的缺血性心脏病的诊断标准。

　　方法：免疫荧光单克隆抗体CD63-异硫氰酸(FITC)，TSD-藻红蛋白(PE)及相应的阴性对照均为法国Immunotech公司产品。CD62P-FITC为美国PharMingen产品。血小板制备：静息状态下采集静脉血，106 mmol/L枸橼酸钠抗凝，分离富含血小板血浆(PRP)，1%多聚甲醛固定15 min，PBS洗涤3次，调整血小板浓度为300×10⁹/L，实验管加洗涤后固定的血小板悬液50 μl，相应的McAb 20 μl。对照管加入鼠IgG-FITC或IgG-PE 20 μl，混匀后避光置室温30 min，PBS洗涤2次，加1 ml PBS待测。流式细胞仪为Becton-Dickinson FACS Vantage。激光光源为氩离子激光器，激发波长488 nm，利用Cell Quest软件进行资料采集和分析。

　　二、结果

　　冠心病患者各型(UA、SA、心肌梗死)间与对照组CD63、CD62P、TSD阳性表达率(%)的比较见表1。3种活化血小板膜抗原表达率差异均有显著性(P＜0.001)；冠心病各型间表达水平差异无显著性。

表1　对照组与老年冠心病患者各型间CD63、CD62、TSD

　　阳性表达率的比较(±s，%)

　　注：采用团体t检验， 对照组分别与冠心病各型比较，均为P＜0.001　　三、讨论

　　本资料显示，老年冠心病患者活化血小板膜抗原表达明显升高，表明老年冠心病患者体内血小板活化处于亢进状态，这不仅为老年冠心病患者应用抗血小板药物提供了理论依据，而且可用于评价药物治疗的效果。本资料老年冠心病患者3种活化血小板膜抗原表达升高的程度有所不同，其中以CD63、CD62P升高较为明显，其变化的意义仍有待进一步探讨。用FCM检测活化血小板是近年来血栓研究的一项重要技术，应用荧光标记的特异性McAb在FCM上可直接对血小板GMP及其功能改变进行检测，目前CD63、CD62P、TSD已成为血小板活化的重要指标^〔1〕，为老年人血栓性疾病的诊断、抗血栓药物研究、疾病预后、疗效评估等方面提供了依据。

　　参考文献

　　1，Cahill MR, Macey MG, Dawson JR, et al. Platelet surface activation antigen expression at baseline and during elective angioplasty inpatients with mild to moderate coronary artery disease. Blood Coagul Fibrinolysis, 1996，7:165-168.

(收稿日期：1999-01-04)