老年人急性髓细胞白血病P-糖蛋白表达的临床意义

中华老年医学杂志 1998年第4期第17卷 临床研究

作者：李建勇　华东　夏学鸣　王玮　陈子兴　阮长耿

单位：215006 苏州医学院附属第一医院(李建勇、夏学鸣、王玮、陈子兴)；江苏省血液研究所(阮长耿)；无锡市第四人民医院暨苏州医学院附属第四医院(华东)

　　关键词： 白血病，粒细胞，急性；糖蛋白类

　　摘要　目的　探讨P-糖蛋白(P-glycoprotein, P-gp)在初治老年人急性髓细胞白血病(AML)中的表达特点及其预后意义。方法　采用流式细胞术(flow cytometry, FCM)及抗P-gp细胞膜外区域单克隆抗体UIC2检测了37例初治老年人AML白血病细胞P-gp表达。结果　16例(43%)患者P-gp阳性(P-gp⁺)，P-gp与干细胞或祖细胞抗原CD34表达显著相关，与其它免疫表型无关。在可评估疗效的32例中，P-gp⁺15例中的4例(27%)获得完全缓解(CR)，缓解率显著低于P-gp阴性(P-gp^-)17例中的11例(65%)(P＜0.05)。CD34阳性(CD34⁺)14例中CR3例(21%)，也显著低于CD34阴性(CD34^-)者18例中12例(67%)(P＜0.05)。P-gp^-及CD34^-13例中11例(85%)获得CR

　　结论　P-gp阳性及CD34阳性是老年人AML预后差的重要指标。

Clinical significance of the P-glycoprotein expression in acute myeloid leukemia in the elderly

Li Jianyong^*,Hua Dong, Xia Xueming, et al. ^*

First Affiliated Hospital of Suzhou Medical College, Suzhou 215006

　　Abstract　Objective　To explore the features of P-glycoprotein (P-gp) expression and its clinical relevance in previously untreated acute myeloid leukemia (AML) in the elderly. 　　Methods　P-gp was determined by flow cytometry and UIC2 in 37 elderly AML patients. 　　Results　Sixteen cases (43%)expressed P-gp positive. P-gp expression was highly associated with CD34 and was not associated with other cell markers such as CD13 and CD33 etc. Four cases (27%) of the P-gp positive patients achieved complete remission (CR) which was significantly lower than 11 cases(65%) of the P-gp negative patients (P＜0.05). Three cases(21%) achieved CR among 14 CD34 positive patients which was also lower than 12 cases(67%) among 18 CD34 negative cases (P＜0.05). Eleven cases (85%) of P-gp negative and CD34 negative patients achieved CR.　　Conclusions　P-gp positivity and CD34 positivity were important indicators of poor prognosis in elderly AML.

　　Key Words　Acute myeloid leukemia Glycoproteinsis

　　年龄是影响急性髓细胞白血病(AML)独立的预后因素，老年人AML具有独特的临床及生物学特征。经典多药耐药(MDR)是AML化疗失败的重要原因。MDR基因编码一种依赖三磷酸腺苷(ATP)提供能量的跨膜

　　本课题受江苏省科学技术委员会及江苏省卫生厅基金资助(基金编号BS95012)药物排出泵P-糖蛋白(P-gp)，P-gp在肿瘤细胞表面过度表达，可将多种临床上常用的结构与作用方式不同的化疗药物泵出细胞外，从而降低白血病细胞内药物浓度，引起多药耐药(MDR)。MDR1基因在老年人AML中的表达特点及其预后意义文献报道甚少^〔1～3〕。我们采用流式细胞术及抗P-gp细胞膜外区域单克隆抗体UIC2^〔4〕，检测了37例老年AML白血病患者细胞表面P-gp表达，旨在探讨P-gp在老年人AML中的表达特点及其预后意义。

资料和方法

　　一、对象

　　自1995年2月至1997年8月苏州医学院附属第一医院收治31例、苏州沧浪医院收治4例、苏州第四人民医院收治2例初治老年人AML，共37例，均无骨髓增生异常综合征(MDS)病史，按FAB标准诊断分型，杂合型急性白血病(HAL)的诊断主要参照欧洲急性白血病免疫分型组(EGIL)制定的积分标准。包括1例M0、9例M1、9例M2、2例M3、6例M4、5例M5、1例M6、1例M7、3例HAL。男20例，女17例；年龄60～79岁，平均64.7岁。诱导方案主要采用高三尖杉酯碱和阿糖胞苷(HA)或柔红霉素和阿糖胞苷(DA)联合化疗方案。按照《全国白血病化疗会议》(1987年，苏州市)制定的标准判断疗效。

　　二、P-gp及免疫表型检测

　　P-gp单克隆抗体(单抗)为UIC2。免疫表型检测所用的单抗包括T淋巴细胞系列(淋系)的CD2、CD3、CD7；B淋巴系列的CD10、CD19、CD22；髓细胞系列(髓系)的CD13、CD14、CD33、CD42b、CD61；干细胞及祖细胞CD34。抗体主要为法国Immunotech公司产品。样本为新鲜骨髓标本，肝素抗凝，常规分离单个核细胞，采用活细胞间接免疫荧光技术染色，流式细胞仪(Epics XL型，Coulter,USA)检测。结果判断：P-gp及CD34阳性细胞(P-gp⁺，CD34⁺)≥10%为阳性，髓系单抗及淋系单抗分别以阳性细胞≥20%及30%为阳性。

　　三、统计学处理

　　数据以均数±标准差表示，组间差异采用t或χ²检验。

结　　果

　　一、P-gp在老年人AML的表达

　　37例中16例(43%)P-gp⁺，其中12例P-gp阳性细胞≥20%。P-gp在老年人AML亚型中的表达情况见附表。

　　二、P-gp与免疫表型的关系

附表　37例老年AML患者P-gp表达与AML亚型的关系

　　分析P-gp与免疫分型所用的12种单抗的关系，显示P-gp⁺组16例中，CD34⁺10例(63%)，显著高于P-gp^-组21例中CD34⁺5例 (24%)(P＜0.05)。P-gp⁺组中，巨核系标志(CD42b或CD61)和CD14⁺均为3例(各19%)，阳性率高于P-gp^-组中的1例(5%)，但二者相比差异无显著性(P＞0.05)。P-gp表达与CD13、CD33等免疫标志无显著相关关系(r=0.34，P＞0.05)。

　　三、P-gp和CD34表达与疗效的关系

　　37例患者中，2例在诱导化疗中死于感染，1例死于脑出血，2例因经济困难未完成治疗。在32例可评估疗效的患者中15例达到完全缓解(CR)，总CR率为47%。15例P-gp⁺者中4例(27%)获CR；17例P-gp^-者中11例(65%)获CR，显著高于前者(P＜0.05)。14例CD34⁺者3例(21%)达CR，也显著低于CD34^-18例者中的12例(67%)(P＜0.05)。P-gp^-及CD34^-13例患者中11例(85%)获CR，CR率最高。CR组P-gp阳性率27%，显著低于未缓解(NR)组的65%(P＜0.05)，CR者P-gp平均表达水平为12%±19%，也明显低于NR组的23%±22%(P＜0.001)。

讨　　论

　　MDR是指肿瘤细胞同时对多种结构和作用机理不同的抗肿瘤药物耐药，它涉及多种复杂机理，主要包括MDR1、多药耐药相关蛋白(MRP)、肺耐药相关蛋白(LRP)、凋亡、再生耐药等。MDR是

　　临床研究最为广泛而深入的一种机理，是AML预后差的重要原因。关于初治老年AML患者MDR1基因表达阳性率，Leith等^〔1〕、Hunault等^〔2〕及Sonneveld等^〔3〕分别报道为55%、44%及57%，本组结果与Hunault等的结果相似，但高于我院报道的全年龄组成年人初治AML的29%^〔5〕。

　　AML不同亚型MDR1基因表达程度存在很大差异，我们也曾有这方面的报道^〔5〕。Poeta等^〔6〕报道M5表达率最高(88%)，国内栾凤君等^〔7〕报道结果也显示M5中P-gp高表达(64%)，HAL中的阳性率也高达67%。本组结果显示，P-gp在老年人AML不同型表达趋势与Poeta等^〔6〕及栾凤君等^〔7〕报道基本一致，在HAL及M5高表达。M0、M3、M6、M7等观察病例较少，尚有待进一步观察积累。

　　AML中P-gp表达与白血病细胞免疫表型的关系曾有报道。我们也曾报道了CD2、CD3、CD7、CD10、CD19、CD22、CD13、CD14、CD33、CD42b、CD61及CD34等细胞表面标志与成年人AML病例P-gp的关系，发现P-gp表达与CD7、CD14、CD42b、CD61、CD34等高度相关^〔5〕。本组对老年人AML的检测结果也显示P-gp与CD14、CD42b/CD61具有一定的相关性。关于AML细胞MDR1基因表达与CD34表达的关系及意义文献报道较多^〔5～9〕。Guerci等^〔8〕报道在AML细胞中MDR1基因表达与CD34阳性表达显著相关，Zhou等^〔9〕未发现二者相关。本组结果与大多结果一致，在老年人AML P-gp过度表达与干细胞及祖细胞抗原CD34表达显著相关。

　　关于MDR1基因表达在老年人AML中的预后意义，Leith等^〔1〕、Hunault等^〔2〕、Sonneveld等^〔3〕报道MDR1基因过度表达与老年人AML预后差高度相关。本组结果显示，P-gp⁺患者的CR率为27%，明显低于P-gp^-的65%；CR患者P-gp⁺率及平均表达水平也明显低于NR患者，进一步表明P-gp过度表达是老年人AML预后差的指标。CD34表达是成年人AML预后差的重要原因^〔10〕。Sonneveld等^〔3〕报道CD34与老年人AML的预后无关，本组结果与其不同，CD34⁺患者的CR率明显低于CD34^-者，而且P-gp^-及CD34^-患者治疗反应最好。因此，我们认为P-gp及CD34阳性可作为老年AML预后不良指标，常规检测P-gp及CD34，可以指导老年人AML的个体化治疗，提高疗效及判断预后。

参　考　文　献

　　 1　Leith CP, Kopecky KJ, Chen IM, et al. MDR1 expression highly predictive for achievement of complete remission (CR) in acute myeloid leukemia (AML) in the elderly: a Southwest Oncology Group Study. Blood, 1995, 86:269a (Abstr).

　　2　Hunault H, Zhou D, Ramon S, et al. MDR expression in acute myeloid leukemia (AML): major prognosis significance in multivariate analysis. Blood, 1995, 86: 269a(Abstr).

　　3　Sonneveld P, Schoester M, Smit E, et al. Expression of the multidrug resistance phenotype MDR1 but not MRP is the single most important prognostic factor in elderly patients with acute myeloid leukemia. Br J Haematol, 1996, 93: 141-147.

　　4　Mechetner EB, Roninson IB, Efficient inhibition of P-glycoprotein mediated multidrug resistance with a monoclonal antibody. Proc Natl Acad Sci USA, 1992, 89:5824-5828.

　　5　李建勇，夏学鸣，华东，等.P-糖蛋白表达在急性非淋巴细胞白血病中的意义.中华内科杂志，1997，36(5)：304-307.

　　6　Poeta GD, Stasi R, Venditti A, et al. Prognostic value of cell marker analysis in de novo acute myeloid leukemia. Leukemia, 1994, 8: 388-392.

　　7　栾凤君，汤美华，杨纯正，等.急性髓细胞白血病患者mdr 1基因产物P-170与免疫表型和FAB分型的关系.中华血液学杂志，1995，16(5)：239-241.

　　8　Guerci A, Merlin JL, Missoum N, et al. Predictive value for treatment outcome in acute myeloid leukemia of celllular daunorubicin accumulation and P-glycoprotein expression simultaneously determined by flow cytometry. Blood, 1995,85:2149-2155.

　　9　Zhou DC, Marie P, Suberville AM, et al. Relevance of MDR1 gene expression in acute myeloid leukemia and comparision of different diagnostic methods. Leukemia, 1992, 6:879-884.

　　10　李建勇，夏学鸣，王爱青，等.急性髓细胞白血病细胞CD34抗原表达的临床及生物学意义.实用肿瘤杂志，1997，12(5)：206-207.