足叶乙甙与其他化疗药物对急性白血病细胞毒性相关性的体外研究

中国新药杂志 1999年第4期第8卷 新药与临床

作者：张绍林　刘新郑　李冰　刘林湘　邹典斌　刘少君　席雨人

单位：（河南医科大学第一附属医院血液科，郑州 450052）

关键词：足叶乙甙；急性白血病；体外；细胞毒性

　　摘要　目的：研究VP16和其他化疗药物对白血病细胞毒性的相关性，揭示其交叉耐药性。方法：将白血病细胞与化疗药物微孔液体培养，MTT法检测细胞毒性。结果：VP16与柔红霉素、三尖杉酯碱、长春新碱、氮芥和氢化可的松对白血病细胞的细胞毒性无相关性，与阿糖胞苷细胞毒性呈直线正相关（r=0.4225，P＜0.01）。结论：VP16与治疗急性白血病的多数一线化疗药物无交叉耐药性，而与阿糖胞苷之间有部分交叉耐药性。

CORRELATIONS OF IN VITRO CYTOTOXICITY OF ETOPOSIDE AND OTHER

　　ACUTE LEUKEMIA

Zhang Shaolin,Liu Xinzheng,Li Bing,et al.

　　(Department of Hematology,First Teaching Hospital,Henan Medical

　　University,Zhengzhou 450052)

　　ABSTRACT　OBJECTIVE: The aim of this study is to find cross resistance of leukemic cells between etoposide and other antileukemic agents by the research on the correlation of their in vitro

　　cytotoxicity.METHODS:Leukemic cells from patients with acute leukemia were treated with different antileukemic agents in microwell liquid culture,then the cytotoxicity was measured with MTT assay.RESULTS:There were no correlations between the cytotoxicity of etoposide and daunorubicin,harringtonine,vincristine,nitrogen mustard and hydrocortisone,but a linear positive relation between the cytotoxicity of etoposide and cytarabine (r=0.4225,P＜0.01).CONCLUSION:There is no cross resistance between etoposide and most of the first line antileukemic agents,but partial cross resistance between etoposide and cytarabine.

　　KEY WORDS　Etoposide; Acute leukemia；In vitro；Cytotoxicity

　　足叶乙甙（VP16）是鬼臼毒素的半合成衍生物，具有广谱的抗肿瘤活性。近年来常用于难治及复发急性白血病的治疗，取得了较好疗效^〔1〕。难治及复发急性白血病常对一线化疗药物如柔红霉素（DNR）、三尖杉酯碱（H）、阿糖胞苷（Ara-C）、长春新碱（VCR）、环磷酰胺（CTX）和泼尼松（P）耐药。上述药物是目前治疗急性非淋巴细胞白血病（ANLL）的DA方案和HA方案以及治疗急性淋巴细胞白血病（ALL）的VDCP方案的基本药物。为了探索白血病细胞对上述药物与VP16之间有无交叉耐药性，本实验对VP16与其他化疗药物对白血病细胞体外细胞毒性的相关性进行了研究。

　　材料和方法

　　1　白血病细胞来源

　　白血病细胞取自43例急性白血病患者骨髓，男25例，女18例，年龄14～58岁，平均28.7岁。其中初治ANLL 27例（M₁2例，M_2a 13例，M_2b 1例，M₃4例，M₄2例，M₅4例，M₆1例），初治ALL 10例，难治M2a 2例，难治ALL 2例，慢性粒细胞白血病急粒变2例。化疗前抽取骨髓2 ml，肝素抗凝，常规分离单个核细胞，用含10%胎牛血清的RPMI 1 640培养基制成2×10⁹/L单个核细胞悬液备用。

　　2　细胞培养及细胞毒性检测

　　40孔细胞培养板每孔加入细胞悬液100 μl，根据Limberg公式计算药物浓度：1 ml细胞悬液药物浓度（μl）＝60×D×2×10³／5 000，D为临床用药剂量（mg/(kg^。d)）^〔2〕。所试药物包括VP16、DNR、H、Ara-C、VCR、盐酸氮芥（NM，为CTX的体外代用品）和氢化可的松（HC，为泼尼松的体外代用品），均用0.15 mol/L NaCl溶解配制。药物处理孔加入药液10 μl／孔，对照孔加入等量的0.15 mol/L NaCl溶液，每组3孔。震荡混匀，置5%CO₂，37℃饱和湿度的培养箱培养24 h后加入12.07 mmol/L的MTT磷酸缓冲液10 μl／孔，继续培养4 h，再加入0.04 mol/L盐酸异丙醇100 μl终止反应，并使甲颗粒充分溶解。用DG 3022型酶联免疫检测仪测定各孔570 nm和630 nm波长的吸光度A，取3孔A平均数，按下式计算细胞毒性（CT）：CT＝（1-处理孔A_570～630／对照孔A_570～630）×100%^〔2〕。

　　结果

　　1　患者年龄、性别与VP16细胞毒性的关系

　　18例女性和25例男性患者的细胞毒性分别为(30.2±18.0)%和(34.5±24.7)%，两组差异无显著性（P＞0.05）。患者年龄与VP16的细胞毒性无相关性（r=0.1892，P＞0.05）。

　　2　VP16对ANLL和ALL的细胞毒性比较

　　VP16对31例ANLL（包括慢粒急粒变）和12例ALL的细胞毒性分别为(28±18)%和(36±25)%，两组差异无显著性（P＞0.05）。

　　3　VP16与其他化疗药物细胞毒性的相关性

　　VP16与Ara-C的细胞毒性呈直线正相关（r=0.4225，P＜0.01），而与DNR，H，VCR，NM和HC的细胞毒性均无相关性。

　　讨论

　　化疗耐药性已成为白血病治疗失败的主要原因之一，研究化疗药物对白血病细胞毒性的相关性，对于临床上合理选用化疗药物有一定的借鉴价值。

　　本实验结果显示，VP16对ALL和ANLL的细胞毒性分别为(36.8±26.9)%和(29.1±18.4)%，两组差异无显著性（P＞0.05），可见VP16具有广谱抗白血病效应，对ALL和ANLL均有效，与临床研究结果^〔3〕一致。

　　DA，HA和VDCP方案分别是ANLL和ALL的诱导缓解方案，VP16是有效的治疗难治和复发急性白血病的化疗药物，本实验结果显示VP16对急性白血病细胞的细胞毒性与DNR，H，VCR，NM和HC的细胞毒性之间均无相关性（P＞0.05），提示白血病细胞与上述药物间无交叉耐药性，为VP 16治疗难治及复发急性白血病提供了实验依据。

　　Ara-C是治疗急性白血病最常用的化疗药物之一，实验结果显示VP16和Ara-C对白血病细胞的细胞毒性呈直线正相关（r=0.4225,P＜0.01），显示VP16与Ara-C之间有部分交叉耐药性，提示对于对Ara-C耐药的急性白血病患者应谨慎选择VP16作为二线化疗药物。另外，实验结果还显示VP16的抗白血病作用不受性别和年龄的影响。

　　参考文献

　　1　Ho AD,Lipp T,Ehninger G,et al.Etoposide in leukemia.Past experience and future perspectives.Cancer,1991,67(Suppl)∶S281

　　2　张绍林，席雨人.急性白血病化疗药物体外敏感性MTT法的研究.中华血液学杂志，1990,11∶116

　　3　张绍林，刘少君，邹典斌，等.阿克拉霉素、足叶乙甙和米托蒽醌为主治疗难治及复发急型白血病和预后因素分析.临床血液学杂志,1995,8（增刊）∶10

(收稿：1998-11-04)