白血病缓解期激活的骨髓细胞Fas配体的表达

中华血液学杂志 1999年第12期第20卷 研究报告

作者：刘子玲　王冠军　易永林

单位：130021　长春，白求恩医科大学第一临床学院血液科

　　激活的骨髓（ABM）具有杀伤肿瘤细胞的活性，为了解其作用机制，我们对ABM细胞Fas配体(FasL)的表达进行了观察，现报告如下。

　　病例和方法

　　1　病例选择　血液系统检查正常者10名，急性白血病经治疗达完全缓解者20例,其中急性非淋巴细胞白血病18例(M₁ 2例，M₂ 7例，M₃ 6例，M₄ 2例，M₅ 1例)，急性淋巴细胞白血病2例，男12例，女8例，中位年龄29岁。

　　2　试剂　rIL-2、抗CD₃单抗、羊抗兔免疫球蛋白-G异硫氰酸酯荧光素（IgG-FITC）抗体均为军事医学科学院产品，兔抗鼠FasL抗体为意大利Calbidchim公司生产。

　　3　ABM体外激活、培养　采集骨髓，以淋巴细胞分离液提取单个核细胞，刺激体系为IMDM培养液中含有单个核细胞1×10⁶/ml,体积分数为20%的人AB血清，根据不同分组在培养体系中分别加入rIL-2 1 000 U/ml,抗CD₃单抗5 μg/ml,细胞置37 ℃、体积分数为5%的CO₂、饱和湿度下培养，3天后收集细胞。

　　4　免疫荧光标记　实验分对照组、rIL-2组、抗CD₃单抗+rIL-2组。不同分组的细胞体外培养3天，调整细胞数为1×10⁷/ml，各取100 μl,分别加入兔抗鼠FasL抗体，混合后置4 ℃中作用45分钟，用0.01 mmol/L、pH 7.2的PBS洗2次，用50 μl小牛血清封闭30分钟，PBS洗2次，加羊抗兔IgG-FITC 20 μl，混匀置4 ℃中作用45分钟，PBS洗2次，以1 g/L多聚甲醛600 μl固定后流式细胞仪检测。

　　5　统计学处理　采用t检验进行统计学处理。

　　结　果

　　对照组FasL几乎无表达，经rIL-2激活后的20例白血病缓解期患者和10名正常人的ABM细胞均不同程度地表达FasL，抗CD₃单抗和rIL-2共同刺激可使其表达量增加（见表1）。

表1　不同条件下ABM细胞表面FasL的表达（%，±s）

　　注：*P值为组间比较；正常人20名，白血病缓解期患者20例

讨　论

　　Fas/FasL是介导细胞凋亡的一对膜蛋白，Fas表达于造血和非造血系统的多种肿瘤细胞膜表面,在T细胞系白血病、浆细胞白血病、髓细胞白血病中Fas表达可能更丰富，人类FasL表达于活化的T淋巴细胞,当FasL与Fas结合时，Fas可向细胞传递“死亡信号”，细胞在数小时内凋亡^［1］。有报道，应用抗Fas抗体、FasL 进行抗肿瘤体外研究，抗Fas抗体能诱导Fas（+）细胞凋亡，白血病细胞株如HL-60，T、B淋巴瘤株SKW6.4，KT3等经抗Fas单抗作用均出现胞体皱缩、染色质凝结，DNA降解为180～220 bp 的片段^［2，3］。

　　我们利用兔抗鼠FasL抗体（鼠与人的FasL有76.9%的相同性^［4］,此抗体可用于鼠和人）分别检测了不同条件下ABM所表达的FasL。结果表明,未激活的正常人和白血病缓解期患者的骨髓细胞不表达FasL,rIL-2激活后均可见FasL的表达,抗CD₃单抗与rIL-2协同作用使其表达量增加，白血病缓解期患者与正常人的ABM细胞FasL的表达差异无显著性。ABM表达FasL,当其与表达Fas的白血病细胞结合即可产生细胞凋亡，从而推测ABM杀伤肿瘤细胞的机制可能与Fas/FasL介导的肿瘤细胞凋亡有关。抗CD₃单抗使ABM细胞表面FasL表达量增加,提示合理的多种细胞因子联合作用可通过Fas/FasL途径增强ABM的杀伤效应。

　　抗Fas抗体、FasL在体外具有高效杀伤肿瘤的效应，但是因其存在严重的不良反应而无法用于临床^［1］。体外激活骨髓可诱导免疫细胞表达FasL，使之发挥较强的抗肿瘤作用，又无不良反应，可能在未来抗肿瘤治疗中具有重要意义。

　　参考文献

　　1　Debatin KM, Enenkel-Stoodt S, Benner A, et al. High expression of APO-(CD₉₅) on T lymphocytes from human immunodeficiency virus-1-infected children.Blood,1994,83:3101-3105.

　　2　Trauth BC,Klas C,Peters AMJ,et al.Monoclonal antibody-mediated tumor regression by induction of apoptosis.Science,1989,245:301-305.

　　3　Yonehara S,Ishii Ai,Yonehara M.A cell-killing monoclonal antibody(anti-Fas)to a cell surface antigen co-downregulated with the receptor of tumor necrosis factor.J Exp Med, 1989,169:1747-1756.

　　4　田中正人,长田重一.Fasリガンド-Fasシステム-その机能と生体内での役割.实验医学,1995,13:1861-1865.

收稿：1998-10-13　　修回：1999-06-22