急性髓系白血病患者外周血CD34、４Fas及P170的表达及其临床意义
中华血液学杂志 1999年第8期第20卷 研究报告
作者：陈为民 宋团月 伍延安 蔡鹏威 李丽英 李乐
单位：福州，福建省立医院 350001
为探讨急性髓系白血病（AML）凋亡通路与耐药机制的某些特征，我们用流式细胞仪同时检测了22例AML患者外周血CD34、Fas及P170的表达情况，分析如下。
病例和方法
1 病例 22例AML均为我院1997年3月～1998年5月住院的患者。男12例，女10例，年龄19～54岁。初治17例，复治5例。完成2个疗程治疗的18例患者中，有8例在第2疗程后再次检测了3项指标。外周血白细胞(1.70±9.06)×109/L;原始＋幼稚细胞0.245±0.279。用常规化疗方案治疗，2个疗程未达完全缓解（CR）者和早期复发者定为难治组(9例)，2个疗程内达CR者定为敏感组[1](9例)。22例中有4例在留取外周血标本的同时取骨髓标本进行检测。另取8名健康体检者外周血作对照。
2 检测方法 取新鲜EDTA－K2抗凝血或骨髓2ml，分为两份，1份作检测，1份作空白对照。检测管标本100μl分别加入CD34－FITC、Fas－PE、P170－PE荧光标记的鼠抗人特异性单抗工作液各20μl，室温避光作用15分钟，用coultermulti－q－prep全血处理系统溶血后上机检测分析。对照管加入鼠抗人IgG做对照，调整对照管非特异性结合率至1％～2％，按同样方法操作。流式细胞仪为Epicsxl型(Coulter,USA)。所用荧光标记单抗均由Immunotech公司提供。
3 指标判定 分别以P170阳性率＞5％,Fas阳性率＞40％,CD34阳性率＞5％为阳性表达者。
4 统计学处理 样本间比较采用t检验及直线相关分析。
结果
1 CD34、Fas、P170在AML各亚型患者中的表达按上述阳性表达判定标准，3种膜蛋白表达的阳性率分别为CD3482.3％、Fas29.4％、P17041.2％。
2膜蛋白的表达与预后的关系在完成2个疗程的18例患者中，CD34＋者CR率为42.8％，CD34－者CR率为75.0％；P170＋者CR率为33.3％，P170－者CR率为66.7％；Fas＋者CR率为42.8％,Fas－者CR率为54.5％。敏感组9例中2例P170、CD34同时阳性，而难治组9例中5例同时阳性。同时阳性者CR率为37.5％,其中1项阳性者CR率为42.8％。
3 CD34、Fas、P170在AML外周血细胞中的表达结果见表1，其中CD34、Fas、P170三者间呈互为正相关，尤其P170与CD34、P170与Fas相关性显著（r值分别为0.56,0.57，P均＜0.005）。
表1 各组Fas、CD34、P170表达（
±s）
| 组别 |
例数 |
阳性细胞百分率（％） |
| Fas |
CD34 |
P170 |
| AML |
22 |
39.28±17.68 |
31.87±27.61△ |
17.80±24.79＃ |
| 敏感组 |
9 |
37.80±14.69 |
21.92±24.16＃ |
8.48±12.10＊ |
| 难治组 |
9 |
42.26±24.07 |
33.13±32.82△ |
31.73±32.51＃ |
| 正常对照组 |
8 |
31.88±5.89 |
2.65±0.80 |
1.95±1.12 |
注：＃与正常对照组比较，P＜0.025;△与正常对照组比较，P＜0.01;＊敏感组与难治组比较，P＜0.05
4 8例患者在治疗前和治疗2个疗程后分别测定了上述3个指标，其中CR者5例，NR者3例。结果见表2。
表2 8例AML患者治疗前后Fas、CD34、P170表达
| 例号 |
年龄(岁） |
性别 |
诊断 |
疗效 |
治疗前阳性细胞率（％） |
治疗后阳性细胞（％） |
| Fas |
CD34 |
P170 |
Fas |
CD34 |
P170 |
| 1 |
19 |
女 |
M3 |
CR |
19.1 |
0.6 |
1.0 |
23.1 |
13.7 |
1.5 |
| 2 |
26 |
男 |
M5 |
CR |
58.6 |
6.8 |
0.8 |
42.1 |
14.5 |
0 |
| 3 |
24 |
男 |
M5 |
CR |
40.8 |
32.4 |
30.1 |
38.9 |
14.4 |
13.2 |
| 4 |
19 |
女 |
M5 |
CR |
47.0 |
6.5 |
10.0 |
17.5 |
0.2 |
0.1 |
| 5 |
50 |
女 |
M5 |
CR |
87.4 |
7.4 |
0 |
36.7 |
8.8 |
2.7 |
| 6 |
47 |
女 |
M2 |
NR |
52.0 |
16.1 |
30.0 |
42.1 |
14.0 |
38.0 |
| 7 |
34 |
男 |
CMLM2 |
NR |
38.8 |
67.4 |
28.1 |
57.0 |
69.0 |
34.0 |
| 8 |
24 |
女 |
M5 |
NR |
29.1 |
15.1 |
0 |
24.8 |
5.5 |
0 |
5 4例患者同时采集外周血和骨髓标本进行比较，结果见表3。
表3 外周血和骨髓Fas、CD34、P170阳性细胞率（％）
| 例号 |
年龄 |
性别 |
诊断 |
外周血阳性细胞率 |
骨髓阳性细胞率 |
| Fas |
CD34 |
P170 |
Fas |
CD34 |
P170 |
| 1 |
19 |
女 |
M5 |
38.0 |
55.9 |
30.0 |
81.0 |
81.3 |
48.8 |
| 2 |
54 |
女 |
M5 |
38.5 |
6.9 |
6.1 |
29.5 |
12.8 |
2.9 |
| 3 |
42 |
男 |
M5 |
28.4 |
1.5 |
0.4 |
48.6 |
4.3 |
14.1 |
| 4 |
19 |
女 |
M3 |
17.5 |
0.2 |
0.1 |
3.0 |
2.6 |
0 |
讨论 对22例AML的检测表明：Fas在AML患者的外周血中表达不增加，与正常对照差异无显著性（P＞0.05）,且表达程度与FAB分型无明显相关。难治组与敏感组比较差异也无显著性（P＞0.05）。Fas＋者CR率与Fas－者基本相近。治疗前后比较，仅2例在CR后表达有较大幅度下调，其余趋势不明显，提示Fas不能单独作为判断AML临床特征及治疗耐药性的免疫标志。本组AML患者外周血P170高度表达，与正常人群对照差异有显著性（P＜0.025）。而分组显示敏感组表达不增加，难治组表达显著增加；P170＋者CR率明显低于P170－者，与文献[2]报道完全一致。提示P170可作为独立因素影响预后和疗效。有作者认为P170表达增加更多的发生在化疗后和复发期；而本研究表明P170阳性率在初治AML中为41.2％,其敏感组与难治组表达显著不同，CR后表达下调，而未缓解者治疗前高表达者，治疗后仍高表达。本组1例治疗前为0，治疗后仍为0；提示P170的表达状况是白血病细胞或患者个体所固有的内在特性。Habor[3]认为很可能是由于在发病初期出现基因突变引起的。至于1例P170治疗前后均为0，临床却未获CR，说明尚有其他的耐药机制参予。Myint等[4]认为CD34抗原表达是一个负性预后指标，目前这方面的意见尚未统一。国内也有报道[5]CD34表达增高则耐药发生率较高，故其表达也具有独立预后意义。本资料表明CD34抗原在AML中表达明显增高,较正常对照差异有显著性（P＜0.01）。CD34＋者CR率明显低于CD34-者。提示CD34＋患者其AML细胞对化疗具有一定的抵抗，难以进入CR。虽然敏感组与难治组表达无统计学差异（P＞0.05），但数据显示后者表达明显高于前者，故结论与Myint等的报告基本相同。CD34在较为分化的AML－M3型中，其阳性率明显低于其它亚型，可以确定其阶段特异性分化抗原的性质。CD34与P170的表达具有明显的相关性，且两者协同表达者耐药发生率高，是患者对化疗反应性差及易复发的原因之一。我们的资料显示CD34与P170高度相关（r=0.56,P＜0.005）；两者同时高表达者在敏感组9例中有2例，在难治组9例中有5例;两者同时阳性者CR率低于单一阳性者，与上述结论相同。我们的结果还显示Fas与P170表达亦具有高度正相关（r="0.57,P<"0.005）;Fas与CD34亦呈现正相关性(r="0.43,P<"0.025)。此点未见其它文献报告，Fas表达增加是否与P170和CD34增加使凋亡受阻、机体细胞Fas代偿性表达增强有关？有待于进一步研究。本组4例同时检测外周血和骨髓CD34、Fas和P170，初步显示CD34、P170的表达基本同步，CD34表达率骨髓高于外周血；而Fas表达不明显同步。因例数尚少，有待于积累更多的资料、深入研究。
本课题受福建省卫生厅科研基金(97006)资助
参考文献
1 Hiddemann W, Bucher T. Treatment strategies in acute myeloid leukemia. Blut, 1990,6:163－171.
2 Holmes JA, West RR, Whittaker TA, et al. Correlation of MDR status witd clinical outcome in patients witd acute myeloblastic leukemia. Br J Haematol, 1991,77:130－131.
3 Haber DA. Multidrug resistance (MDR1) in leukemia,is it time to test. Blood,1992,79:295－297.
4 Myint H, Lucie NP. The prognostic significance of the CD34 antigen in acute myeloid leukemia.Leuk Lymphoma, 1992,7:425－429.
5 安峻峰，陈济民，李秀珍，等.急性髓系白血病患者原发性mdr1基因与CD34抗原表达及预后关系.临床血液学杂志,1998，11：7－9.
（收稿：1998-08-24修回：1999-03-01)
(校对：王汝瑞)
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