涂覆处理石墨管、原子吸收法测定骨肿瘤患者血清和组织中微量铂

中国药理学通报 1999年第4期第15卷 实验方法学

作者：卜海富　孙　昕　窦红漫

单位：卜海富　(安徽医科大学第一附属医院骨科)；孙　昕　肿瘤科，合肥　230022；窦红漫　安徽中医学院附属医院病理科，合肥　230038

关键词：顺铂；钨涂覆石墨管；分光光度法，骨肿瘤；原子吸收

　　摘要　目的　开发一种涂覆石墨管测定肿瘤患者血清及组织中顺铂的方法。方法　采用石墨炉原子吸收光谱法。结果　钨涂覆石墨管能消除样品中基体干扰，给出较高的灵敏度和准确度。结论　涂覆石墨炉法快速、简单、准确，适用于血清和组织中顺铂的测定。

　　中国图书分类号　R 738.1； R 979.19

　　文献标识码　A　文章编号　1001-1978(1999)04-0380-02

Determination of cisplatin in serum and tissue of cancer patients

　　by atomic absorption spectrometry with coated graphite tube

BU Hai-Fu, SUN Xin, DOU Hong-Man(Dept of Orthopaedics, The First Affiliated Hospital, Anhui Medical Univ ersity,Hefei　230022)

　　ABSTRACT　AIM　To develop an assay of cisplatin in serum and tissue of cancer patients by coated graphite tube.METH OD S　The method of atomic absorption spectrometry with coated graphite tube was used.RESULTS　The tungsten-coated graphite tube could eliminate sample matrix effect and was sensitive and accu rate.CONCLUSION　The method is convenient for the assay and gives the accurate results, suitable for assaying cisplatin in serum and tissue of cancer patients.

　　KEY WORDS　cisplatin; tungsten-coated graphite tube; spectrometry , bone neoplasms;atomic absorption

　　顺氯氨铂(简称顺铂)是有效的抗肿瘤药物，由于具有较大的毒副作用，主要是对肝肾功能毒害，甚至造成致命性损伤，使临床应用受到限制。为寻找最佳用药量、最低毒副作用、最佳疗效的治疗肿瘤手段，需建立一种适用于临床的样品分析方法学，以科学依据指导临床合理用药。本实验首先提出用涂覆技术处理石墨管并配以合适的表面活性剂，大幅度提高测定灵敏度和准确度，消除基体干扰，成功地测定生物样品中的顺铂浓度。

　　1　实验与方法

　　1.1　仪器与主要试剂　180—80型原子吸收分光光度计(偏振塞曼效应)，顺铂空心阴极灯，普通热解石墨管，LXJ—1型高速离心机，高速匀浆机(瑞士产)，亚沸蒸馏器(上海产)。

　　铂标准溶液：由高纯金属铂丝(上海化学试剂厂进口分装)按常规方法配制成质量浓度为1g·L^-1；铂标准工作液，由蒸馏水逐级稀释成质量浓度为50mg·L^-1钨酸盐、锆酸盐、钒酸盐、镧盐涂覆液体积分数均为0.078；体积分数为0.50的医用白蛋白；体积分数为0.0025的Triton X-100(含体积分数为0.01的HNO₃)。

　　所有试剂均为优级纯或分析纯，水为双重亚沸蒸馏水。

　　1.2　仪器工作条件　波长：265.9nm；灯电流：12.5mA；狭缝：0.4nm；Ar气流量：200 ml·min^-1；进样量：20μl；测定方式：浓度直读；计算方式：峰高定量。石墨炉升温程序：干燥80～120℃20s；灰化800～800℃ 20s；原子化2700～2700℃ 5s；清除2800～2800℃4s。

　　1.3　方法　血清和组织标本取自经顺铂治疗的骨肿瘤患者。血清样：患者血液1.5 ml，置预先去离子化洁净试管中，静置2h，经高速离心，分离出清亮血清。取血清0.5ml(严禁溶血)，加体积分数为0.0025 的Trit on X-100(含体积分数为0.01的HNO₃)混合液1ml，摇匀后上机测定。组织样：去除结缔组织和污血，取粉碎组织样0.5～1.0g,加HNO₃3ml置电热板上，由低温缓慢升高，加热消除处理溶液至清亮，蒸至近干，取下冷却，加体积分数为0.0025的Triton x-100(含体积分数为0.01的HNO₃)混合液1ml，混匀后进样。

　　1.4　标准曲线　取空白血清，加铂标准溶液，用体积分数为0.0025的Triton x-100(含体积分数为0.01的HNO₃)混合液稀释，使其质量浓度为0.5 mg·L^-1，1.0 mg·L -1，2.0 mg·L^-1。标准曲线见图1。另取铂标准溶液，同理制得标准曲线。

Fig 1　Standard curve

　　1. Standard curve of normal tube；2. Standard curve of coated tube

　　1.5　石墨管涂覆　分别将石墨管完全浸泡在涂覆液及体积分数为0.50的医用白蛋白中24 h，并减压至0.08 MPa 1h渗透处理，取出置干净滤纸上晾干，在120℃烘箱中干燥，使用前按仪器工作条件老化2次，空烧1次，分别制得不同涂覆石墨管^［1］。并以铂溶液测得结果，见表1。

Tab 1　The sensitivity of different graphite tubes

　　2　结果　　质量浓度在0.5～2.0 mg·L^-1范围内线性良好，r=0.9995，测定极限，按能产生0.004吸光度的质量浓度值计算为5.0 mg·L^-1，连续测定4 d同一份试样(预处理后置4℃下保存)，计算日间误差。其变异系数：血清＜4.34%，组织＜5.42%，结果见表2。回收率结果见表3，其血清回收率平均95.45%，组织回收率平均91.84%。

Tab 2　Cisplatin coefficient of variation in serum and tissue

	50μg·L-1		500μg·L-1		2000μg·L-1
	Serum	Tissue	Serum	Tissue	Serum	Tissue
d 1	49.16	46.47	495.00	466.10	1919.00	2125.00
d 2	48.78	48.66	488.06	479.19	1988.11	2108.00
d 3	50.46	51.98	511.07	488.68	2080.43	2195.01
d 4	51.11	50.48	520.00	452.17	1948.30	1936.81
±s	49.88±1.09	49.40±2.38	50.53±14.16	471.53±15.89	1981.39± 72.17	2091.21±109.10
CV%	2.19	4.81	2.90	3.39	4.34	5.42

Tab 3　Recovery rate of cisplatin in serum and tissue

	1 000μg·L-1
	Serum	Tissue
d 1	99.76	92.42
d 2	95.30	87.62
d 3	94.81	89.38
d 4	91.92	97.92
±s	95.45±2.80	91.84±3.91
CV%	3.39	4.92

　　3　讨论

　　3.1　涂覆管选择　用金属盐溶液浸渍石墨管，经金属盐类处理后的石墨管表面能形成较待测物更难熔的碳化物，从而改变了石墨管表面特性，使待测元素不与石墨管直接接触，能有效防止试液渗入管壁，形成碳化物及避免普通碳升华的光散射现象，大幅度提高测定灵敏度重现性^［2］。本实验符合上述论点，将制得涂覆管以铂溶液测定，结果见表1。由表1可见，普通管的相对吸光度仅为0.011，涂锆、涂钨管都能给出较高灵敏度(相对吸光度为0.0901和0.0885)，考虑到试剂通用性、方法推广及分析成本，故选择钨盐涂覆管。

　　3.2　样品介质　生物样品(血、尿)往往含大量有机物和无机盐类，严重的背景吸收给分析此类样品带来很大困难，如果将高粘性样品(血清)直接引入石墨炉，会导致严重暴沸溅跳现象，同时部分试样会残留在进样尖嘴上，形成误差。用表面活性剂能极有效克服这一现象。这可能是由于表面活性剂Triton x-100对样品具有分散作用，使生物样品具有均匀的表面张力所致。本实验结果表明，稀释浓度以体积分数0.1～1对测定结果无影响。

　　作者简介：卜海富，男，49岁，主任医师

　　参考文献

　　1　杨　.减压涂层——氯化钙改进石墨炉原子吸收法沉淀粉末中钼.光谱学与光谱分析，1992；(1)：116～8

　　2　李述信主编.原子吸收光谱分析中的干扰及清除方法，北京：北京大学出版社，1987：299～314

1999-04-14收稿，1999-05-20修回