肺瘤平二号对中晚期肺癌患者血小板表面糖蛋白表达的影响

中国中西医结合杂志 2000年第1期第20卷 临床论著

作者：张培彤　朴炳奎　孙桂芝　林红生　裴迎霞

单位：张培彤（中国中医研究院广安门医院(北京100053)）；朴炳奎（中国中医研究院广安门医院(北京100053)）；孙桂芝（中国中医研究院广安门医院(北京100053)）；林红生（中国中医研究院广安门医院(北京100053)）；裴迎霞（中国中医研究院广安门医院(北京100053)）

关键词：中晚期肺癌；活化血小板；血小板；糖蛋白；中药复方

　　内容提要　目的：观察具有益气养阴、活血解毒作用的肺瘤平二号对中晚期肺癌患者血小板表面糖蛋白表达和血小板激活状态的影响。方法：采用流式细胞技术检测30例中晚期肺癌患者服肺瘤平二号前后血小板表面糖蛋白CD41/CD42a、CD36/TSP、CD62/CD63、CD9、CD31表达的改变，并与50名健康志愿者的检测结果进行对照。结果：中晚期肺癌患者血小板表面糖蛋白的表达及血小板激活状态明显高于健康志愿者。结论：服肺瘤平二号可以部分减少中晚期肺癌患者血小板表面糖蛋白的表达和血小板激活状态。

Influence of Feiliuping No. 2 on Platelet Surface Glycoprotein Expression in Mid-Late Stage Lung Cancer Patients

ZHANG Peitong, PIAO Bingkui, SUN Guizhi, et al

　　(Guang′ anmen Hospital of China Academy of TCM, Beijing (100053))

　　Objective: To explore the influence of Feiliuping NO. 2 (FLP), a Chinese herbal preparation for reinforcing Qi, nourishing Yin, activating blood circulation and detoxifying, on surface glycoprotein expression (SGPE) and activated condition of platelet in mid-late stage lung cancer patients.Methods: Changes of platelet surface expression of CD41/CD42a, CD36/TSP, CD62/CD63, CD9 and CD31 were measured before and after FLP treatment by using flow cytometer in 30 cases of mid-late stage lung cancer.Results: The SGPE and activated condition of platelet in mid-late stage lung cancer patients were significantly higher than those of healthy person, and both could be reduced partly by FLP.Conclusion: FLP could influence the SGPE and activate condition of platelet in lung cancer patients.

　　Key words　mid-late stage lung cancer, activating platelet, platelet, glycoprotein, Chinese herbal complex recipe

　　血小板通过与肿瘤细胞相互作用及在相互作用过程中产生的生物活性物质加强肿瘤细胞对血管内皮细胞和内皮下基质的粘附、增加肿瘤细胞诱导血管内皮退缩的能力、促进肿瘤细胞增生和运动能力的增强，加速肿瘤细胞的转移。既往对恶性肿瘤患者血小板功能的异常较少研究。我们发现恶性肿瘤患者血小板表面糖蛋白表达及血小板激活状态较健康人有明显加强⁽¹⁾。具有益气养阴，活血解毒作用的肺瘤平二号膏是一个治疗肺癌的有效方剂，1995年11月～1996年12月我们通过观察具有益气养阴，活血解毒作用的肺瘤平二号膏对中晚期肺癌患者血小板激活状态与粘附分子表达，进一步对肺瘤平二号的作用机理进行解释。

　　资料和方法

　　1　一般资料　健康人为在广安门医院工作的不同年龄健康志愿者，1周内未服用过任何抗血小板药物。健康人50名，男性23名，女性27名，年龄23～68岁，平均42.7岁；30例肺癌患者全部选自1995年11月～1996年12月间在我院肿瘤科住院患者，有明确病理诊断及分期。肺癌患者男性21例，女性9例；年龄39～74岁，平均63.17岁；腺癌19例，鳞癌10例，腺鳞癌1例；Ⅲ期与Ⅲb期14例，Ⅳ期16例。按中国中西医结合学会所定血瘀证诊断标准，其中血瘀证相关症状肿块30例(100%)，疼痛20例(66.67%)，血栓3例(10%)，舌瘀斑5例(16.67%)，紫暗舌17例(56.67%)，青紫舌7例(23.33%)，血小板(PLT)＞30万者7例(23.33%)。

　　2　治疗方法　肺瘤平二号膏为广安门医院制剂(主要由生黄芪、沙参、三七、桃仁等组成)，批号950420。患者每次服15g，每日3次，1个月为1个疗程，同时服用中药安慰汤剂(含焦六曲3g，焦麦芽3g，炒山楂3g，陈皮3g，法半夏3g，甘草3g)，未伍用其他疗法。疗前、疗后取血检测患者血小板表面粘附蛋白表达的变化情况。

　　3　血小板表面粘附蛋白的检测

　　3.1　试剂　单克隆抗体IgG1FITC(679.1 Mc7)、IgG1PE(679.1 Mc7)、CD9FITC(ALB6，IgG1)、CD31FITC(5.6E, IgG1)、CD36FITC(FA6.152，IgG1)、TSPPE(P10，IgG1)、CD41PE(P2，IgG1)、CD42aFITC(Beb1，IgG1)、CD62PE(CLBThromb/6，IgG1)、CD63FITC(CLBGran/12，IgG1)，除CD42aFITC来自美国BD公司外，其余均来自法国Immunotech公司；2%PBS小牛血清(新生牛血清为杭州四季青生物工程材料研究所出品；终浓度1%PFA(PFA为北京化学试剂公司出品，分析纯)。

　　3.2　检测方法　健康志愿者及患者清晨以塑料注射器空腹抽取静脉血3ml，取后2ml置硅化试管中，以3.8%的柠檬酸钠(1∶9，V/V)抗凝，取全血按常规分别以CD42aFITC/CD41PE、CD36FITC/TSPPE、CD63FITC/CD62PE单克隆抗体进行双标记染色，CD9FITC和CD31FITC单克隆抗体进行单标记染色，分别以IgG1FITC/IgG1PE做同型阴性对照，染色基质为2%PBS小牛血清，染色在暗处进行，室温20min。染色完毕后即以终浓度1%PFA固定待测。测定采用美国BD公司出品FACSort流式细胞仪。校正机器后，先以前向角和侧向角散射光形成的对数散点图在血小板位置设定收集门，以固定条件收集样本。每个样品管收集10^４个PLT后进行分析。采用Macintosh Quadra650计算机和CellQuest软件收集处理样品数据。机器测试条件为FSC电压E00，增益1.00，对数；SSC电压347mV，对数；FL1电压674mV，对数；FL2电压517mV，对数；荧光补偿FL1－0.8%FL2，FL2－24.6%FL1；激光功率15mW，激发光波长488nm。

　　4　统计学方法　采用STATISTICA Release 4.5软件进行统计。疗前、疗后测试结果的对比采用Wilcoxon Matched Pairs检验；疗前及疗后与健康人检测结果的对比采用Mann-Whitney U检验。

　　结　　果

　　实验结果表明(表1)，患者疗前CD42a^＋CD41^＋血小板CD42a的表达比健康人降低，治疗后CD42a^＋CD41^＋血小板CD42a的表达有所增强，尽管它们的值仍比健康人低，但在它们之间已没有统计学差异；疗后CD36^＋TSP^＋、CD36^＋TSP^－、CD9^＋、CD63^－CD62^＋、CD63^＋CD62^＋、CD63^＋CD62^－血小板的数目较疗前有较明显的下降，有统计学差异，但它们的值与健康人相比仍明显高出，未能降至健康人水平，统计学上也有明显差异；服用肺瘤平二号后CD36^＋TSP^＋血小板TSP的表达、CD36^＋TSP^－血小板CD36的表达强度已接近健康人水平，虽然还略高于健康人，但与健康人相比已没有统计学差异；CD36^＋TSP^＋血小板CD36的表达、CD31^＋血小板的数目则在疗前疗后变化不大，与健康人仍有明显的差异。

表1　30例中晚期肺癌患者服药前后血小板粘附蛋白表达变化与健康人的比较

	健康人	患者疗前	患者疗后	患者疗前		P值	患者疗后		P值
	(±s)			RN	RP		RN	RP
E42AP41P	9701.20±218.26	9651.00±135.99	9697.17±348.57	43.45	35.58	0.142694	37.94	44.77	0.203356
XM42AP41P	218.04±80.06	184.91±82.14	216.75±86.89△	46.26	30.90	0.004210*	41.54	38.77	0.605313
YM42AP41P	295.91±126.34	303.85±148.40	278.83±162.73	40.56	40.47	0.976215	42.28	37.53	0.376439
E36PTSPP	84.90±66.12	444.40±175.31	302.03±180.37△	26.12	64.47	0.000000*	27.12	62.80	0.000000*
XM36PTSPP	213.52±118.19	296.17±117.85	297.10±125.48	34.98	49.70	0.006093*	34.42	50.63	0.002520*
YM36PTSPP	142.94±61.80	224.58±101.43	152.74±53.69△	34.60	50.33	0.003373*	40.26	40.90	0.905073
E36PTSPN	9004.26±573.10	9407.73±293.61	9191.80±680.80△	33.54	52.10	0.000544*	36.46	47.23	0.044706*
XM36PTSPN	253.27±122.52	323.07±145.16	266.05±100.16△	36.08	47.87	0.028076*	39.22	42.63	0.524757
E9P	9199.02±782.31	9792.87±456.25	9723.40±343.92△	28.95	59.73	0.000000*	31.45	55.98	0.000007*
XM9P	889.40±264.69	892.78±274.73	863.46±325.24	40.48	40.53	0.992071	41.66	38.57	0.564343
E31P	9208.42±611.82	9705.03±456.56	9690.60±424.76	30.24	57.60	0.000000*	31.06	56.22	0.000003*
XM31P	80.66±19.33	83.46±27.57	78.18±23.21	39.96	41.40	0.788448	41.84	38.27	0.505511
E63N62P	110.40±94.46	946.90±587.01	514.13±291.12△	25.59	65.35	0.000000*	27.82	61.63	0.000000*
YM63N62P	61.58±31.95	63.49±37.57	62.68±28.45	40.80	39.98	0.877579	39.28	42.53	0.544371
E63P62P	36.74±22.93	385.37±295.26	277.53±123.21△	25.50	65.50	0.000000*	25.50	65.50	0.000000*
XM63P62P	53.35±29.99	54.49±23.64	54.24±19.71	38.81	43.32	0.401045	38.20	44.33	0.253097
YM63P62P	138.85±66.76	153.72±90.98	139.25±61.88	39.94	41.43	0.780810	40.04	41.27	0.819200
E63P62N	335.56±189.47	621.00±411.39	488.13±306.69△	33.15	52.75	0.000260*	35.68	48.53	0.016623*
XM63P62N	24.52±10.35	26.59±15.53	25.80±8.97	40.61	40.32	0.956410	38.79	43.35	0.395495

　　注：E42AP41P为CD42a^＋CD41^＋血小板数，XM42AP41P为CD42a^＋CD41^＋血小板CD42a表达的平均荧光道数，YM42AP41P为CD42a^＋CD41^＋血小板CD41表达的平均荧光道数，E36PTSPN为CD₃ 6^＋TSP^－血小板数，XM36PTSPN为CD36^＋TSP^－血小板CD36表达的平均荧光道数，E63N62P为CD63^－CD62^＋血小板数，YM63N62P为CD63^－CD62^＋血小板CD62表达的平均荧光道数；与健康人比较，^*P＜0.05；说明：_N为健康人平均秩和，_P为肺癌患者平均秩和；与疗前比较，^△P＜0.05

讨　　论

　　肺瘤平二号益气养阴、活血解毒，是治疗肺癌的有效方剂。我们的研究证实在中晚期肺癌患者中存在着明显的血瘀症状和血小板激活现象。肿瘤细胞通过对血管壁的侵袭进入血管，经与血小板等血管内有形成分的相互作用，导致血小板的全面激活和释放，血小板表面粘附受体增加，这种改变更加有利于肿瘤细胞的侵袭和转移。CD62和CD63是血小板激活和释放的显著标志，服用肺瘤平二号可减少CD62^＋、CD63^＋的血小板数目，说明肺瘤平二号对血小板的激活和释放有明显的抑制作用。血小板释放的减少可导致血中α颗粒和溶酶体颗粒内容物的含量下降，全面降低凝血激活状态。CD36^＋和TSP^＋血小板数目的下降，CD36、TSP表达的减少说明肺瘤平二号可能通过阻断CD36-TSP-CD36，非CD36的TSP受体-TSP-CD36，非CD36的TSP受体-TSP-纤维蛋白原-αⅡbβ3，CD36-TSP-纤维蛋白原-αⅡbβ3等途径来抑制血小板-血小板间，血小板-肿瘤细胞间的聚合；CD9^＋和CD31^＋血小板数量的减少也意味着中晚期肺癌患者在治疗后血小板亢进的粘附功能有所减弱。服用肺瘤平二号后可使CD36^＋TSP^＋血小板TSP的表达、CD36^＋TSP^－血小板CD36的表达下降至与健康人无明显统计学差异，其他指标虽有所改善，但仍不能恢复到健康人水平。从此也可以看出，如果想要患者的各项指标完全恢复，肿瘤必须得到彻底治疗后方可达到。

　　国家中医药管理局青年基金课题(No.93C011)

参考文献

　　1.张培彤，裴迎霞，朴炳奎，等.肿瘤患者与健康人血小板表面粘附蛋白表达异同的临床观察及意义.中华肿瘤杂志1998；20(3)∶207—209.

收稿：1998-12-08

　　修回：1999-03-30