肺癌bcl-2、C-myc表达及细胞凋亡

　　中华结核和呼吸杂志2000年第23卷第5期

　　王国凤　陈培辉　周燕

　　关键词：肺癌；bcl-2；C-myc；细胞凋亡

　　细胞凋亡是与生物体发育及组织更新有关的生理性细胞死亡过程。近年发现凋亡异常与肿瘤 的发生发展有关。实验证明凋亡受到许多相关基因严密的正负调控^［1］。在体内调 控凋亡的 因素及其相互作用的关系更复杂，但这方面的报道少见且结果不一。本文对我院手术切除的 90例肺癌进行bcl-2、C-myc及细胞凋亡水平的检测，并探讨它们之间的关系及临床病理学 意义。

　　材料与方法　检测标本为我科1993～1996年档案材料。90例肺癌中，男71例，女19例。年龄33～72岁。组 织学类型：鳞癌29例，腺癌27例，细支气管肺泡癌13例，粘液表皮样癌4例，小细胞未分化 癌5例，大细胞癌12例。肺癌临床分期按国际抗癌联盟(UICC)1997年标准，其中Ⅰ期35例， Ⅱ期42例，Ⅲ＋Ⅳ期13例。14例肺良性病变包括结核球，炎性假瘤，肺大泡，支气管扩张及 肺外伤。

　　以S-P免疫组化法(链霉菌抗生物素蛋白过氧化酶连接法)对肺癌bcl-2、C-myc表达进 行检测 ，bcl-2 Ⅰ抗(100)及C-myc Ⅰ抗（9E10）浓缩型试剂工作浓度均为1∶60，二氨基联 苯胺(DAB）显色。

　　以TUNEL(TdT-mediated dUTP-x nick end labeling)法原位标记凋亡细胞。TUNEL试剂盒 为 德国保灵曼原装产品。实验前试剂配制按产品说明书。五溴-四氯-三吲哚磷酸酯/氮蓝四唑(BCIP/NBT)显色，水性封片剂封片。

　　结果判断：bcl-2阳性位于胞膜及胞浆，C-myc阳性位于胞浆及胞核，呈棕黄色颗粒状，背 景 清晰。凋亡细胞呈蓝黑色，散在。以每高倍视野（HPF 10×40）凋亡细胞数判断凋亡水平。 高级数凋亡（++）：＞5个/HPF，低级数凋亡（+）：≤5个/HPF。

　　实验时，均设立阳性及阴性对照。

　　统计学处理：采用卡方检验及确切概率法。

　　结果　肺癌bcl-2、C-myc表达及细胞凋亡：肺癌bcl-2表达率31％(28/90)，C-myc表 达率62％(56/90)，高级数凋亡率48％(43/90)。bcl-2、C-myc表达及细胞凋亡水 平与肺 癌组 织类型、分化、转移及临床分期无关。bcl-2表达者高级数凋亡率(29％，8/28)明显低 于 bcl-2阴性者的高级数凋亡率（56％，35/62）（χ²=6.009，P＜0.05）。C-myc表 达率显著 高于肺良性病变表达率（29%，4/14）(χ²=5.621,P＜0.05)，但与凋亡水平无关。 肺癌bcl- 2表达及凋亡水平与肺良性病变比较差异无显著性，但在良性病变中，bcl-2表达于支气管 上皮基底细胞(图1～3)。

　　肺癌bcl-2与C-myc共同表达及意义：肺癌中bcl-2与C-myc同时表达率为20％(18/90 )。共 同表达与组织类型、分化，局部淋巴结转移及凋亡水平无关，但与远处转移及临床分期密切 相关（P＜0.01）(见表1)。

表1　肺癌bcl-2/C-myc联合表达与远 处转移及临床分期关系

　　注：^△均为同组内比较　　讨论　凋亡是机体清除衰老、病变及多余细胞的一种生理性途径。若应被清除的细胞凋亡受抑制，则其生命期延长，从而使这些细胞受外界致癌因子作用的机会，癌基因激活及癌变的机率增加。肿瘤细胞的凋亡抑制也有助于肿瘤的扩大。凋亡受到相关基因严密的正负调控。bcl-2为凋亡抑制基因，C-myc对细胞生长具有双向调节作用^［2］。本组肺癌检测结果显示bcl-2、 C-myc表达及凋亡水平与肺癌组织类型、分化、转移及临床分期无关，提示凋亡抑制及bcl- 2、C-myc单独表达与肺癌进展无明显关系。由于没有明确的肺癌前病变作为对照，因此不能 否定凋亡抑制在肺癌发生中的作用。肺癌bcl-2表达者凋亡水平明显降低，提示bcl-2表达抑 制肺癌凋亡。肺癌C-myc表达明显高于肺良性病变，而bcl-2在肺良性病变中主要表达在支气 管上皮基底细胞，提示bcl-2、C-myc表达可能与肺癌的发生有关。本组资料结果显示，bcl- 2、C-myc同时表达在远处转移组和临床Ⅲ＋Ⅳ期明显高于无远处转移组和临床Ⅰ＋Ⅱ期，提 示bcl-2及C-myc共同表达在肺癌的进展中具有协同作用，这与早期对其它肿瘤的研究结果一 致^［3,4］。后来的实验证明bcl-2能抑制C-myc诱导的凋亡，但不影响其促有丝分裂功能^{［5， 6］}。推测这可能是bcl-2与C-myc协同作用的一个重要机制。实验结果表明bcl-2与C- myc共同表达时，预示着肺癌预后不良。

　　基金项目：浙江大学医学院附属第二医院科研基金资助项目(000039)

　　作者单位：王国凤（310009杭州，浙江大学医学院附属第二医院病理科)

　　陈培辉（310009 杭州，浙江大学医学院附属第二医院病理科)

　　周燕（310009 杭州，浙江大学医学院附属第二医院病理科）

　　参考文献

　　1，Steller h. Mechanisms and genes of cellular suicide. Science，1995,267:1445 -1449.

　　2，Chiarugi V, Ruggiero M. Role of three cancer “master gene” p53， bcl-2 and C-myc on the apoptotic process. Tumori, 1996, 82:205-209.

　　3，Vaux DL, Cory S, Adams JM. Bcl-2 gene promotes haemopoietic c ell survival a nd cooperates with C-myc to immortalize pre-B cells. Nature,1988,335:440-44 2.

　　4，Strasser A, Harris AW, Bath ML, et al. Novel Primitive lymphoi d tumours indu ced in transgenic mice by cooperation between myc and bcl-2. Nature, 1990,348:331-333.

　　5，Bissonnette RP, Echeverri F,Mahboubi A, et al. Apoptotic cell death induced by C-myc is inhibited by bcl-2. Nature, 1992,359：552-554.

　　6，Fanidi A, Harrington EA, Evan GI, et al. Cooperative interacti on between c-myc and bcl-2 proto-oncogenes. Nature, 1992,359:554-556.