CD_{44<>在肝癌与肝硬化组织中的表达}

江苏医药 2000年第7期第26卷 论著

作者：吴波　孙桂勤　赵欣

单位：吴波　孙桂勤（210002　南京军区南京总医院病理科）；赵欣（南京大学医学院）

关键词：CD₄₄；原发性肝细胞肝癌；肝硬化

　　【摘要】　目的　为了探讨粘附分子CD₄₄在肝癌、肝硬化患者组织中的表达以及其与肝癌、肝硬化的关系。方法　应用免疫组织化学检测CD₄₄在26例肝癌、16例肝硬化以及5例正常肝组织中的表达情况。结果　CD₄₄在正常肝中均有阳性表达，而在肝硬化组织中表达明显增强，在肝癌组织中表达差异很大，并且与肿瘤分化程度密切相关。结论　CD₄₄分子在肝病中的表达随病情而异，对肝细胞肝癌的分化诊断及预后判断具有一定意义。

Expression of CD₄₄ in the tissue of liver cancer and hepatocirrhosis

WU Bo，ZHAO Xin SUN Guiqing　Department of Pathology of Jinling Hospital

　　【Abstract】　Objective　To determine the expression of CD₄₄ in the liver tissue．Method　26 cases of liver cancer，16 cases of hepatocirrhosis and 5 cases of normal liver tissue were studied by HE stain and immunohistochemistry．Results　Positive expression was observed in normal，cirrhotic tissue，and also in liver cancer，but they were in different patterns．Conclusion　CD₄₄ expression varies with the different types of liver lesion and has specific clinical significance．

　　【Key words】　CD₄₄　Primary hepatocellular carcinoma　Hepatocirrhosis

　　CD₄₄是一种粘附分子，能介导细胞与细胞以及细胞与基质间的粘附，近年来的研究发现它与人体肿瘤的发生、发展及转移有着密切的关系，对肿瘤病人的预后判断具有重要的意义。为了探讨CD₄₄分子在肝癌和肝硬化组织中的表达以及与肝癌、肝硬化的关系，我们应用了免疫组织化学的方法检测了肝癌、肝硬化组织中CD₄₄分子的表达。

　　材料和方法

　　一、材料

　　选择我院近年送检的原发性肝细胞肝癌26例，以及同期的肝硬化病例16例，并以5例没有肝脏疾病的尸检肝脏作正常对照。26例肝癌患者中男18例，女8例，年龄在34～69岁，平均年龄47.7岁，16例肝硬化患者均为男性，年龄37～65岁，平均年龄51.8岁，5例尸检死者年龄12～28岁。

　　二、实验方法

　　组织经10％福尔马林固定，常规乙醇脱水，石蜡包埋，4μm切片，HE染色。免疫组化染色为S-P法：切片经常规脱蜡后，水化，用0.6％过氧化氢和乙醇混合液常温下处理10分钟，将切片置于2％磷酸缓冲液（TBS）在高温高压下进行抗原修复，以后各步骤按S-P试剂盒的说明书进行操作，各步骤均用pH7.4，2％TBS液洗涤三次，每次3分钟，DAB显色，并用苏木素复染，光镜观察。同时，设立CD₄₄免疫组化染色的阳性与空白对照。所有切片均进行CD₄₄（H-CAM）染色，肝癌及肝硬化组各选择9例，正常肝选择3例进行CD₄₄v₆染色。鼠抗人CD₄₄（H-CAM），CD₄₄v₆为单克隆抗体。CD₄₄抗体及免疫组化S-P试剂盒为福州迈新公司产品。两种CD₄₄抗体均为即用型抗体。

　　结　　果

　　在5例尸检正常的肝组织中，CD₄₄（H-CAM）和 CD₄₄v₆均有阳性表达，表达类型也基本相同。阳性分布弥漫均匀，在肝细胞膜上出现棕黄色颗粒，细胞浆内表达很弱或不表达，阳性颗粒细。16例肝硬化患者的CD₄₄表达均为阳性，并且阳性表达程度比正常肝脏更强，不但分布广，而且着色深，阳性颗粒大，胞浆内也出现阳性颗粒。而26例肝细胞肝癌的CD₄₄阳性率为55％，阳性表达程度差异很大，有4例表达强阳性，一般呈阳性，11例为阴性表达。结果见表1。

　　在肝组织中，CD₄₄既可以局限性表达，又可呈弥漫性表达。在本组观察中，我们发现CD₄₄阳性细胞以小叶周边区的肝细胞更为明显，这一特征在肝硬化病例中表现特别显著，中央区CD₄₄以细胞膜上表达为主，而周边区则细胞浆内也有强的阳性表达，在活动性肝硬化病例中，游离到间质中的肝细胞，也就是“碎屑样”坏死细胞呈强阳性。部分肝窦表面的内皮细胞也有较强的阳性表达。

表1　肝病患者CD₄₄（H-CAM）表达情况

　　注：＋表示阳性，++表示中等阳性，+++表示强阳性，－表示阴性。

　　在肝细胞肝癌患者的组织切片中，我们可以很清楚地看到，在CD₄₄阴性表达的肝癌病例，其周围的肝组织CD₄₄呈阳性表达。另外，从本组实验结果也可以看出CD₄₄的表达与癌细胞的分化程度具有密切的联系。CD₄₄的表达情况与肝细胞肝癌的分化程度的关系见表2。

表2　CD₄₄（H-CAM）的表达情况与肝癌分化程度的关系

　　讨　　论　　CD₄₄是一类细胞表面的糖蛋白，又称作人Hemes抗原或鼠PgD-1抗原，能够介导细胞与细胞以及细胞与基质之间的粘着。Tarin等人通过研究发现这一类CD₄₄具有以下几种功能：（1）粘附与其它细胞及透明质酸等在内的细胞间质成分；（2）参与淋巴细胞的归巢；（3）参与淋巴细胞的活化及胞内的信号传递；（4）对药物的摄入和敏感性的作用，提示一些CD₄₄分子可能参与细胞膜通透性的调节^［1］。

　　CD₄₄的另一类作用，即在肿瘤中的表达已逐渐引起人们的重视。在鼠胰腺癌模型中，一种CD₄₄亚型已被证实在肿瘤的转移中起着决定性的作用。而在某些人类的肿瘤中，比如消化道肿瘤、非何杰金氏瘤、甲状腺肿瘤等肿瘤研究中，有人提出，可以把CD₄₄表达情况当作肿瘤分期、分级、转移以及预后的指标，也可把它用作肿瘤的早期诊断和预测肿瘤细胞的生长情况，甚至能够进一步地阐明癌细胞恶变的分子机制^{［2，3，4］}。肿瘤细胞的特点是生长的无序性，从正常肝细胞发生病变发展到肝硬化再到肝癌，可以说是经典的肝癌发生的过程；肝细胞从正常的生长状态到增生，再到肿瘤性增生，经历了细胞功能改变到细胞性质改变的过程，基因及基因产物的表达也发生了质的改变。

　　本研究结果显示在正常肝细胞表面CD₄₄的表达比较强，肝硬化患者肝细胞CD₄₄表达显著加强，而肝细胞肝癌CD₄₄表达差异很大，部分甚至完全不表达；而且，在肝癌患者，越是低分化的癌，即恶性程度越高，CD₄₄表达越弱。由此我们推测，机体在病理状态下，尤其在组织细胞发生恶变时，细胞间增殖信号传导增强，而细胞间粘附力下降，细胞间连接疏松，不利于增殖抑制信号的传导，有利于肿瘤细胞的分裂、增殖。由于细胞间粘附力的下降，有助于肿瘤细胞的运动，使肿瘤细胞易于从原发灶向周边邻近组织浸润以及向远处脏器转移。因此，通过CD₄₄分子在不同肝脏病变过程中肝细胞表达的情况，一方面来判断肿瘤的分化程度及预后，另一方面通过诱导肿瘤表达CD₄₄分子来达到抑制肿瘤转移的目的，可望为肝癌的治疗提供一种新的途径。

　　参考文献

　　1，Pignatelli M，Vessey CJ．Adhesion molecules：Novel molecular tools in tumor pathology．Hum Pathol，1994，25：849．

　　2，吴秋平，路作新．CD₄₄基因异常表达与肿瘤．中国肿瘤生物治疗杂志，1998，5（3）：220．

　　3，Rudzki Z，Jothy S．CD₄₄ and the adhesion at neoplastic cells．J Clin Pathol，1997，50：57．

　　4，Rudy W，Hofmann M，Albiez ZS，et al．The two major CD₄₄ proteins expressed on a metastatic rat tumor cell line are derived from different splice variants：Each one individually suffices to confer metastatic behavior．Cancer Res，1993，53：1262．

　　5，Wielenga VJM，Yamaguchi A，Uano T，et al．Expression of CD₄₄ variant proteins in human colorectal cancer is related to tumor progression．Cancer Res，1993，53：4754．

（收稿：1999-07-02　修回：2000-01-06）