应用顺铂后肝癌细胞超微结构的研究

　　中华肝脏病杂志2000年第8卷第2期

　　韦长元　陈建思　刘剑仑　杨南武　李挺

　　摘　要　目的了解经顺铂化疗后肝癌细胞的超微结构的变化。方法运用透射电镜观察经顺铂化疗后缩小切除的肝细胞癌的形态学特征的改变。结果细胞表面微绒毛消失，细胞接触松驰，细胞核缩小、碎裂、胞质空虚。内质网膜表面核糖体减少或缺少，糖原颗粒减少，线粒体空泡化或出现絮状物，并见凋亡小体。结论经顺铂化疗后的肝癌细胞的超微结构形态学改变符合程序性细胞死亡的过程。说明顺铂能诱导肝癌细胞发生凋亡。

　　关键词：癌，肝细胞；凋亡；药物方法；顺铂

　　应用透射电镜检查结果，探讨经顺铂对大肝癌治疗缩小后切除的癌细胞的超微结构的变化。

　　资料与方法

　　1.一般资料：17例肝细胞癌，男13例，女４例，年龄27～52岁，平均42岁。入院时经Ｂ超和/或CT检查肝肿瘤巨大，病变范围超过右肝两叶，或位于肝Ⅴ、Ⅷ段且与重要血管距离小于１cm，肿瘤最大者为15cm×10cm，最小为6.2cm×4.4cm。

　　2.方法：顺铂20mg加10%葡萄糖液500ml静滴，每天１次，连用５d，休息10d为一周期，用药期间口服碳酸氢钠1.5g，每天3次。用顺铂前先静滴10%葡萄糖液1000ml，并给药防止呕吐。17例经3～6周期治疗后Ｂ超或CT检查肿瘤明显缩小，二期手术切除肿瘤，病理证实为肝细胞癌。

　　3.检查方法：切开17例肝癌标本，观察坏死情况及包膜，并取10～20g新鲜癌组织切成1mm×1mm×1mm薄片，置于预冷的3%戊二醛液固定，按电镜检查要求把标本制成超薄切片，在JEM-1200EX型透射电子显微镜下观察、照相，余下标本用10%甲醛液固定送光镜观察。

　　结 果

　　1.病理变化：17例肿瘤标本均可见肿瘤有完整或完整增厚包膜，厚为1.5～4mm，６例有中心液化坏死。光镜观察，均为肝细胞性肝癌合并门静脉性肝硬化，肿瘤大部分呈凝固性坏死，肿瘤周围有不同程度的淋巴细胞、单核细胞浸润和纤维组织增生。

　　2.电子显微镜：17例肝癌组织中，可见大量的坏死癌细胞，细胞结构大部分消失。未坏死或不完全坏死的癌细胞，大多数癌细胞形状不规则，细胞粒内染色质空虚，粒仁浓缩或碎裂，核膜皱缩或消失、染色体密集于核膜下或染色体断裂，并见到类圆形的凋亡小体。胞质密度增高或呈空泡化，粗面内质网结构松散、脱粒，滑面内质网增多，排列无序。内质网膜表面核糖体减少或缺失，糖原颗粒减少。线粒体空泡化或出现絮状物，嵴模糊不清，桥粒连接疏松，并见凋亡小体脱离细胞体，没入间质或被另外细胞吞饮。细胞膜微绒毛消失，细胞间质仍可见毛细胆管及肝血窦，肿瘤围边可见大量的肌纤维母细胞及淋巴细胞浸润，溶酶体减少，见图1。

图1透射电镜下观察经顺铂化疗后肝癌细胞超微结构的改变

　　讨 论

　　癌细胞的变化不能简单用细胞变性、坏死来解释。经过观察，其细胞核有呈浓缩或碎裂,核膜有皱缩完整或消失，胞质呈空泡状，内质网结构松散、脱粒，线粒体空泡或出现絮状物，峭模糊不清，细胞微绒毛消失，并见到大量的凋亡小体，可见到细胞凋亡、形成凋亡小体、凋亡小体脱落、被吞噬等不同阶段的特征性改变。说明顺铂还能诱导肝癌细胞出现程序性死亡，所以应用顺铂3～6周期后，肿瘤细胞往往发生坏死，肿瘤直径缩小，以至达到Ⅱ期切除的目的。

　　有学者应用电镜观察实验动物或培养的癌细胞进一步研究细胞凋亡，只见到癌细胞单个性死亡，有时也可见被吞噬，但极少数见到凋亡小体的形成[1，2]。我们观察顺铂化疗大肝癌后，发现肝癌细胞发生凋亡后形成的大量凋亡小体，这可能与顺铂主要作用DNA而使核碎裂，核碎片与胞质中其它成分被细胞膜包裹而成凋亡小体等因素有关。顺铂能有效治疗肿瘤，也可能与顺铂诱导细胞程序死亡时与其浓度有关。本实验选用低浓度，持续性应用顺铂，可降低顺铂的毒副作用，亦可利用顺铂对肿瘤细胞作用时的浓度、时间等相关性，以期达到治疗目的。

　　韦长元，男，36岁，副教授，硕士，获得广西科技进步二、三等奖各1次

　　韦长元（530021南宁，广西医科大学肿瘤医院)

　　陈建思（530021 南宁，广西医科大学肿瘤医院)

　　刘剑仑（530021 南宁，广西医科大学肿瘤医院)

　　杨南武（530021 南宁，广西医科大学肿瘤医院)

　　李挺（530021 南宁，广西医科大学肿瘤医院）

　　参考文献

　　［1］杭振镳，魏于全，赵霞.15例肝细胞癌的电镜观察—与早期人胚肝的超微结构对比分析.华西医科大学学报，1996，27: 332-336.

　　［2］Wang XW，Gibson MK，Vermeulen W，et al. Abrogation of p53 induced apoptosis by the hepatisis B virus x gene. Cancer Res，1995，55: 6012-6016.