p53、c-erbB2和增殖细胞抗原在胃癌合并幽门螺杆菌感染中表达的研究

　　中华肿瘤杂志2000年第22卷第3期

刘有恩　路月霞　吕秀美　邓述志

　　关键词：p53 c-erbB2；增殖细胞抗原；胃癌；幽门螺杆菌

　　幽门螺杆菌(Hp)感染与胃癌发生有一定关系，但其确切机理不甚明确。我们通过观察胃癌病变中的Hp感染情况，以及增殖细胞抗原(PCNA)、抑癌基因p53、癌基因c-erbB2表达情况，探讨Hp感染在胃癌演变中的意义。

　　　　一、材料与方法

　　1.材料：1995～1998年间在我院手术的140例原发性胃癌患者中，肠型74例，弥漫型62例，混合型4例。对照组32例。本组病例排除有消化性溃疡病史及其他胃肠道恶性肿瘤史，诊断标准均依据中国常见恶性肿瘤诊治规范的标准进行。

　　2.方法：PCNA(抗体克隆号PC10)、p53(抗体克隆号Do-7)、c-erbB2(多克隆抗体)检测采用免疫酶组化SP法，苏木氏染色法。Hp染色，常规切片，用Hp快银染药盒Warthin-starry法进行。

　　3.判定标准：p53、c-erbB2结合染色反应深度及阳性细胞数分为0～3四级。PCNA计数用PCNA标记指数，按阳性细胞百分率分为0～3四级。

　　4.统计学方法：Stata软件包的χ²检验、Fisher精确检验，Logistic回归。

　　　　二、结果

　　1.病理形态变化及其Hp感染情况：W-S银染色中，Hp呈黑色。在胃癌组织中央，无Hp发现，坏死愈严重则更无Hp。但是Hp往往存在于癌旁粘膜及与其相邻的组织中。癌症组Hp感染显著高于对照组。

　　2.Hp感染与PCNA表达的关系：PCNA阳性表达位于细胞核，呈棕黄色细颗粒状，PCNA标记指数均值从胃癌到对照组呈递减趋势(P＜0.01)。胃癌病变组中，Hp阳性患者Hp感染与PCNA阳性表达及阳性分级呈正相关(P＜0.01)。

　　3.Hp感染与p53异常表达的关系：p53阳性表达位于细胞核，呈棕黄色颗粒状，仅在胃癌组织中表达。胃癌组织中Hp感染与p53表达及分级呈正相关(P＜0.01)。

　　4.Hp感染与c-erbB2过度表达的关系：c-erbB2阳性表达于细胞膜和细胞浆，呈棕黄色颗粒状。各粘膜病变中，Hp感染与c-erbB2过度表达及分级呈正相关(P＜0.01)。

　　5.Hp感染与几种基因共表达的关系：各病变组及对照组胃粘膜中，有的病例有几种基因共表达，此种病例在胃癌中最常见。

　　　　三、讨论

　　Hp在胃癌演变中的重要作用已被广泛关注。本研究结果显示，胃癌组中Hp感染率为55.7%，其中肠型与弥漫型胃癌Hp感染率无差别，表示Hp感染与这两型胃癌均有关，说明肠型和弥漫型胃癌有着相似的病原因素和病理机制。此外，胃癌患者Hp感染率高于对照组，但胃癌组织中央很难发现Hp存在，可能因为胃癌组织中央环境不适宜Hp生长，或因此形态性质改变不易被检出。

　　正如我们所知，PCNA存在于细胞核内，是DNA合成酶δ的辅助蛋白，在DNA合成中起重要作用。肿瘤细胞增殖活跃，处于增殖状态，特别是S期即DNA合成期的细胞，其PCNA表达明显增强。PCNA可作为一项评估细胞增殖状态的指标。本研究结果显示，在胃癌病变组中，Hp感染与PCNAL₁、PCNA阳性率及分级呈正相关。Hp感染者表现为细胞生长迅速，S期细胞数增多，需要合成大量核苷酸，以满足细胞迅速增长的物质需要，易于导致DNA的损伤以及修复的失败，使具有恶性潜能的细胞易于向恶性转化^［1］。Hp持续感染，可能与DNA损伤而使抑癌基因失活和癌基因激活等过程有关。p53是抑癌基因，正常p53是G期DNA损伤检测点，如果遭受损伤，p53蛋白就重复累积促使复制停止，进而有足够的时间使DNA修复。如果修复失败，则p53通过调节下游的WAF₁基因转录，抑制细胞周期的进程或引导细胞衰亡，进而阻止具有癌变倾向的细胞产生。用免疫组化法检测，p53为实变型。本研究中p53仅在胃癌中表达。目前认为正常胃粘膜、萎缩性胃炎、肠化生中无突变型p53表达，一旦发生癌变，则表达率增高。Hp感染与p53阳性率及其分级呈正相关。我们认为，Hp在p53基因突变中起促进作用，使其失去正常抑癌功能，使胃上皮细胞易于向癌细胞转化。c-erbB2癌基因编码产生185000跨膜蛋白，具有酪氨酸激酶活性。c-erbB2蛋白表达与胃癌恶性转化以及胃癌发展有关。众多学者认为，70%胃癌与癌旁粘膜有c-erbB2表达，38%癌旁表达高于相应癌。本研究显示，胃癌病变组中，Hp感染与c-erbB2过度表达及分级呈正相关，说明Hp可能使c-erbB2基因突变，使细胞增殖加快，促进胃癌发生发展^［2］。

　　我们发现在同一组织中，可同时检测出不同的基因表达，而且多个基因同时表达在Hp感染组显著高于无感染组，显示Hp感染的同一个体中，基细胞增殖迅速的同时激活癌基因，使抑癌基因失活，共同影响胃癌的发生发展。关于Hp感染促进胃癌的发生发展，可能是通过Hp产生损伤因素(如细胞毒素等)，减弱了胃粘膜的保护因素(如维生素C等)，使组织损伤，胃上皮细胞增殖加速，以致基因突变，使胃粘膜上皮恶性转化。胃癌的形成机制十分复杂，不可能是由一个因素或一个基因控制，而是许多因素协同作用的结果^［3］。本研究表明，Hp感染在胃癌发生中可能起一定作用，为临床治疗Hp感染及预防胃癌提供了一定的理论基础。

　　作者单位：刘有恩（266001青岛市人民医院外科)

　　吕秀美（266001 青岛市人民医院外科)

　　邓述志（266001 青岛市人民医院外科)

　　路月霞（青岛市北区医院内科）

　　参考文献

　　1，王江，倪灿荣.p53、c-erbB2癌基因蛋白在胃癌中的表达及分布特征.第二军医大学学报，1994，15：20-24.

　　2，孙梅，吕有勇.外源性p53基因表达可抑制人胃癌细胞的恶性增殖.中华肿瘤杂志，1997，19：410-413.

　　3，Theobald M, Biggs J, Dittmer D, et al. Targeting p53 as a general tumer antigen. PCNA, 1995,92：1993-1997.