门脉高压性胃病胃粘膜内皮素1和一氧化氮合成酶基因异常表达

江苏医药 2000年第11期第26卷 短篇论著

作者：吴秀英　管洪庚

单位：苏州大学附属第一医院　215006

　　门脉高压性胃病（PHG）发病机理尚未完全清楚。本实验用硫代乙酰胺复制大鼠肝硬变合并PHG的门脉高压模型（简称PHG模型），以Dotblotting杂交技术从分子水平研究内皮素1（ET-1）及一氧化氮合成酶（NOS）在胃粘膜的表达，探讨ET-1，NO是否参与PHG发病机制，报道如下。

　　材料与方法

　　动物准备与主要试剂Wistar大鼠由苏州医学院实验动物中心提供，共30只，全部雄性，体重150～200 g，随机分两组，每组15只。A组：肝硬变合并PHG的慢性门脉高压症模型大鼠（简称PHG大鼠），模型制作方法是3％硫代乙酰胺大鼠腹腔注射60mg／kg，每日1次，连续16周，即成PHG实验模型。B组：正常对照组，同期饲养。ET-1cDNA探针，长度800 bp，北京医科大学心肺内分泌研究室提供。NOScDNA探针，670 bp，购于华美公司。提供总基因的TRIZOL^TM试剂为GIBCO／BRL公司产品。α-32P-dNTP为Amersham公司产品，放射比活度3000 CI／mmol，焦碳酸二乙酯（DEPC）为Fluka公司产品。

　　分子生物学研究　动物到期后处死取全胃剖开，用0.1％DEPC水反复冲洗，小心剥离胃粘膜，取50～100 mg放入试管。提取总基因按TRIZOL^TM方法，程度为粗玻璃棒捣碎试管内胃粘膜组织―加1 mlTRIZOL^TM试剂―匀浆―0.2 ml氯仿―振荡15秒―离心（12000转／分）15秒―取上清液0.5 ml加0.5 ml异丙醇―离心（12000／分）15秒―70％乙醇洗涤沉淀―凉干，然后膜转移。将所购探针标记α-32P-dNTP，杂交。暗盒中自显影曝光。用灰度扫描仪图像分析系统定量处理放射自显影强度。

　　统计方法　数据以±s表示，方差分析。

　　结　　果

　　ET-1基因表达　大鼠在正常状态下，胃粘膜表达相当量的ET-1，在肝硬变PHG时，ET-1基因表达明显减少，与正常组比较有极显著差异（P＜0.01）见表1。

　　NOS基因表达　大鼠正常情况下胃粘膜表达NOS极少，PHG时表达明显增加，有显著意义（P＜0.05）见表1。

表1　ET-1和NOS基因表达水平（单位，OD）

　　讨　　论

　　对门脉高压性胃病的认识大多源于胃镜对门脉高压患者胃粘膜表面形态观察，专门研究其病理生理机制较少。肝硬变时门静脉压力增高，胃终末静脉回流障碍致胃瘀血，同时胃壁动静脉短路（A-V Shunt）异常开放，动脉血直接流入静脉致胃充血。门脉压力增高是PHG的重要致病因素，除此之外，有证据表明，胃粘膜局部某些调节因子参与PHG病理过程。如Benoit发现门脉高压时胃血流量增加102％，空、回肠仅增加42％、52％，而胃、空回肠同属门脉回流内脏；胃镜资料提示门脉高压时胃微循环改变较肠道明显；临床上门脉高压性胃肠血管病中，胃出血较肠道更常见且严重。上述胃肠病变程度差异不能以门脉压增高作出解释。ET、NO的生理功能是分别使收缩和扩张，作用方式是自分泌或旁分泌在局部发挥生理功能。在正常状态下，胃粘膜局部表达适量的ET和NO，使胃血管保持在一定的舒缩状态，维持局部循环稳定。Casadevall等用NOS特异性抑制剂L-NAME阻断NO效应，发现低剂量L-NAME使门脉高压大鼠胃血流下降，正常大鼠无此变化，大剂量L-NAME使两组大鼠胃血流量均减少，提示门脉高压时胃局部NO释放过多。Ohta等以Northern blot及Western blot分子杂交技术发现门脉高压时胃粘膜NOS表达增加。

　　本研究结果发现肝硬变PHG时，胃粘膜ET-1表达减少，NOS表达增加，其后果是胃缩血管能力下降及扩血管能力增加，这种胃粘膜局部ET／NO平衡失调导致胃局部循环紊乱。PHG时胃充血、瘀血、胃壁A-V　Shunt异常开放等血流动力学变化，除了门脉压升高的基本病因外，可能还与胃粘膜ET／NO比例失调因素有关。有理由认为纠正ET／NO失调能够达到治疗PHG的目的，值得进一步研究（本文感谢管洪庚医师的实验指导及帮助）。