c-jun在哮喘豚鼠气道中的表达及平喘药物的影响

中华结核和呼吸感染 1998年第10期第21卷 论著摘要

作者：吕坤聚　王炜　戚好文

单位：710032 西安，第四军医大学西京医院呼吸科［吕坤聚(现在解放军第四○一医院)、戚好文］；解放军第四○一医院(王炜)

　　c-jun为即刻早期原癌基因，参与多种细胞的增殖和生物合成调节过程。我们利用豚鼠哮喘模型，观察过敏原激发哮喘后气道和肺组织中原癌基因c-jun的表达及平喘药物的影响，以探讨c-jun与哮喘的发病关系。

　　方法　雄性豚鼠50只，体重300～400 g，随机分为健康对照组10只，哮喘组13只，沙丁胺醇干预组13只及地塞米松干预组14只。哮喘组和药物干预组豚鼠腹腔内注射10%卵蛋白致敏，2周后用1%卵蛋白雾化吸入激发哮喘；对照组用同样方法致敏，但用生理盐水代替1%卵蛋白激发。沙丁胺醇组按1.2μg/kg于激发前胃饲沙丁胺醇，地塞米松组按0.2 mg/kg于激发前腹腔注射地塞米松。动物激发哮喘后，用1%戊巴比妥钠（60 mg/kg）腹腔注射麻醉动物，剖开胸腔后经右心室肺动脉插管快速灌注生理盐水，继之灌注4%多聚甲醛，取出肺脏置入同一种固定液2～4小时。将上述组织制成厚10μm冰冻切片用于免疫组织化学和HE染色。ABC法免疫组化染色程序：切片入0.3%甲醇-H₂O₂，37℃孵育30分钟；3%山羊血清封闭30分钟；兔抗鼠c-jun蛋白多克隆抗体（1∶20）4℃过夜；生物素化的羊抗兔IgG（1∶200）37℃孵育40分钟；ABC复合物（1∶100）37℃孵育30分钟；DAB显色约5分钟，其间各步骤均以PBS洗片。试验中分别设阴性和阳性对照。用图像分析仪测定不同组标本c-jun免疫反应阳性物质的相对含量，数据经非配对t检验处理，结果以±s表示。

　　结果　(1)哮喘组气道壁和肺组织中可见大量炎症细胞浸润，主要为嗜酸性粒细胞、多型核白细胞，粘膜水肿，管壁内可见大量渗出的炎症细胞。沙丁胺醇组除气道平滑肌收缩较哮喘组减轻外，其余病理改变与哮喘组相似；地塞米松组气道壁仅见少量炎症细胞浸润，粘膜结构完整。(2)免疫组织化学染色见c-jun免疫反应阳性物质呈棕色，分布于上皮细胞和多形核白细胞的胞核，胞质呈阳性反应，反差鲜明。对照组动物气道及肺组织中无或偶见免疫反应极弱的c-jun阳性细胞（图1）；哮喘组和沙丁胺醇组气道壁及肺组织中可见大量的c-jun阳性细胞（图2，3），主要为粘膜上皮细胞和浸润的炎症细胞，阳性炎症细胞主要分布于粘膜层、粘膜下层及平滑肌周围。地塞米松组气道壁和肺组织中仅见少量c-jun阳性细胞(图4)。图像分析结果见附表。

　　讨论　本组研究结果显示，致敏动物诱发哮喘后气道上皮c-jun表达明显增加，表明原癌基因c-jun与哮喘发病关系密切。我们以往研究已证实，原癌基因表达与哮喘气道上皮细胞增殖无关^［1］。因此，我们推测气道上皮c-jun表达可能为上皮细胞活化的特殊方式，与其合成参与哮喘气道炎症反应的细胞因子和炎性介质有关。正常人单核细胞、淋巴细胞及肺泡巨噬细胞不表达原癌基因^［2］。但本组实验发现，随着哮喘的诱发，气道和肺组织中浸润的炎症细胞表达c-jun增加，推测c-jun原癌基因的表达也与这些细胞的活化及生物合成功能增加有关，因此这些细胞的分泌活动也受原癌基因c-jun、c-fos调节^［3，4］。糖皮质激素是治疗哮喘最有效的抗炎药物，其机制主要是减少炎症细胞在气道的浸润和渗出，抑制细胞因子及炎性介质的合成和释放^［5］。本组实验结果显示，地塞米松组气道上皮和炎症细胞内c-jun表达较哮喘组明显减少，气道炎症反应减轻。因此，我们认为糖皮质激素对哮喘气道的抗炎作用可能与其抑制原癌基因c-jun表达有关。β₂受体兴奋剂沙丁胺醇则无此作用。

参考文献

　　1威好文，刘振千，高培松，等.哮喘豚鼠气道上皮细胞中c-fos原癌基因的表达.中华内科杂志，1997，36：476-478.

　　2吴小军.c-fos癌基因与支气管哮喘.国外医学呼吸系统分册，1996，16：171-173.

　　3James D, Bryan A, Gerald R, et al. Regulation of interleukin-2 gene enhancer activity by the T cell accessory molecule CD^＋₂₈. science, 1991, 251:313-316.

　　4Costa JJ, Matossian K, Resnik MB, et al. Adherence dependent increase in human monocyte PDGF β mRNA and associated with increase in c-fos, c-jun and EGR₂ mRNA. J Cell Biol, 1990, 111:2139-2148.

　　5Linden M, Brattsand R. Effects of a corticosteroid, budesonide, on alveolar macrophages and blood monocyte secretion of cytokines: differential sensitivity of GM-CSF, IL-1β and IL-6. Pulm Pharmacol, 1994, 7:43-47.

(收稿：1998-04-14　　修回：1998-05-14)

　　本课题受国家自然科学基金资助(基金编号：39370325)

附表　各实验组动物气道和肺组织中c-jun相对含量(x±s)

　　注：与对照组比较P＜0.01，^▲P＞0.05