支气管哮喘等患者支气管粘膜活检组织白细胞介素5和白细胞介素8 mRNA的表达

中华结核和呼吸感染 1998年第1期第21卷 论著摘要

作者：孙庆华 朱元珏 许文兵 于小兵

单位：100730 中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院呼吸内科(孙庆华)现在第三军医大学新桥医院呼吸病研究所

　　支气管哮喘是以大量活化的嗜酸粒细胞浸润支气管粘膜为主的气道炎症性疾病，而慢性支气管炎则是以中性粒细胞浸润为主。我们采用原位杂交技术，用白细胞介素(IL)5和IL-8 cDNA探针检测哮喘和慢性支气管炎患者与正常人支气管粘膜活检组织IL-5和IL-8 mRNA的表达，以期发现哮喘和慢性支气管炎发病机制方面的不同之处。

　　选择经临床确诊的哮喘^［１］发作期的患者11例，男5例、女6例，年龄41±3岁；对照组6名，男4名，女2名，年龄39±4岁，均无过敏史、气道激发试验(-)，无其它呼吸系统疾患。以上对象均不吸烟。慢性支气管炎患者9例，男6例，女3例，年龄56±3岁，其诊断符合1979年修订的慢性支气管炎临床诊断及疗效判断标准。纤维支气管镜(纤支镜)检查均得到受试者的同意。常规行纤支镜检查，取3块支气管粘膜组织，依次经多聚甲醛固定、蔗糖洗涤、液氮冷却的异戊烷冷冻后，切于经多聚赖氨酸预处理的玻片，低温贮存。将含有人白细胞介素-5（hIL-5） cDNA的质粒DNA pGEM-4和含有人白细胞介素8（hIL-8）cDNA的质粒DNA pGEM-7(Dr.Y.Sun惠赠，London，United Kingdom)分别转化到大肠杆菌感受态细胞(E.Coli.DH5α，中国医学科学院分子生物学国家重点实验室惠赠)中，扩增后含有hIL-5 cDNA的质粒用内切酶

　　xbaⅠ、BamHⅠ酶切；含有hIL-8 cDNA的质粒用XbaⅠ、SmaⅠ(均为BioLabs产品)酶切并电泳鉴定，从低溶点胶中回收DNA片段，按“地高辛-DNA标记检测试剂盒”(Boehringer mannheim)

　　操作说明进行cDNA探针的标记。每张切片加含探针的杂交液20μl(设未加探针杂交液的对照), 于湿盒内过夜。再依次经冲洗、孵育，苏木素染色，甘油明胶封片，光学显微镜下阅片，深蓝色着色细胞即为阳性杂交信号(图1～4)。实验数据用±s表示。两个样本率的比较，采用U检验。

　　结果 (1)6例对照组IL-5mRNA的表达皆为阴性。(2)在哮喘组中，11例患者有10例I

　　l-5mRNA的信号阳性，1例阴性(U=3.64)；而IL-8 mRNA的信号9例阴性，2例阳性(U=3.28)。

　　与对照组相比，差异均有显著性(P?.01)。(3)在慢性支气管炎组中，9例患者有6例IL-5mRNA的信号阳性，3例阴性(U=2.60)，而9例患者IL-8mRNA的表达全部阳性(U=3.88)。

　　与对照组相比，差异有显著性(P?.01)。

　　讨论 我们通过原位杂交技术发现，11例哮喘患者有10例IL-5 mRNA表达阳性，提示IL-5直接参与了哮喘的发病。在慢性支气管炎组中，9例患者IL-8mRNA的表达全部阳性，显示了中性粒细胞在慢性支气管炎发病中的重要作用。以往认为，IL-5与慢性支气管炎的发病关系不大。而在本研究中发现，9例慢性支气管炎患者有6例IL-5mRNA的信号阳性，3例阴性，提示IL-5也参与了慢性支气管炎的发病。由此可见，哮喘和慢性支气管炎在细胞因子参与的发病机制方面，即有着相似性，也有着明显的不同。而对其发病机制的进一步研究，有助于这两种疾病的诊断和治疗。

　　图1哮喘患者支气管粘膜活检标本切片以地高辛标记的IL-5 cDNA探针行原位杂交深蓝色着色细胞即为阳性信号(×400)图2慢性支气管炎患者支气管粘膜涤检标本切片以地高辛标记的IL-8 cDNA探针行原位杂交。深蓝色着色细胞即为阳性信号(×400)图3哮喘或慢性支气管炎患者支气管粘膜涤检标本切片预先经RNA酶处理后再以地高辛标记的IL-5或IL-8 c

　　dNA探针行原位杂交。未见阳性杂交信号(×400)图4对照组患者支气管粘膜涤检标本切片以地高辛标记的IL-5或IL-8 cDNA探针行原位杂交。未见阳性杂交信号(×400)

　　收稿：1997-02-19 修回：1997-08-18

　　　　　　　　　　　　　　　　参考文献

　　1支气管哮喘的定义、诊断、严重度分级及疗效判断标准。中华结核和呼吸杂志，1993;16(增刊):5-6.