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肺结核病人外周血T淋巴细胞亚群、嗜银蛋白的测定

肺结核病外周血T淋巴细胞亚群、嗜银蛋白的测定

中华微生物学和免疫学杂志 1999年第3期第19卷 免疫检测

作者:岳立成 王英年 张克佳 刘瑞贞 李文涛

单位:266042 青岛医学院第二附属医院

  结核病的发生、发展及免疫功能等已有不少报道,关于核仁组成区嗜银蛋白(AgNORs)在肺结核病外周血淋巴细胞中的应用研究尚未见报道。本文通过对肺结核病T淋巴细胞亚群及其AgNORs的对比分析,探讨二者的变化规律和相互联系,为指导临床免疫检测及治疗提供参考。

资料与方法

  1.临床资料

  (1)患者组:根据临床症状、体征、X线胸片、痰集菌涂片或培养确诊的肺结核病59例,其中男性47例,女性12例,年龄20~69岁,平均年龄39岁。

  (2)对照组:选择健康献血员50例,其中男性22例,女性28例,年龄22~42岁,平均年龄28岁。

  2.方法

  (1)T淋巴细胞亚群测定:采用碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶(APAAP)法。试剂盒由北京军事医学科学院基础医学研究所提供。

  (2)核仁组成区相关嗜银蛋白(AgNORs)测定:取外周血1ml无菌操作抗凝注入RPMI 1640培养瓶中,恒温37℃培养72小时,分离已转化的淋巴细胞;按陈立其等〔1〕的方法进行涂片染色,每张涂片选择20个视野;应用国产多功能医学图像分析仪(TIPAS)检测,镜下测量100个细胞核的AgNORs面积(GA)和核面积(NA),由计算机算出面积与面积比(GA/NA)的平均值。试剂AgNO3(50%)和明胶(2%)自行配制。

  (3)采用SDAS统计软件处理数据,计算出±s,并进行正态性检验、t检验和直线相关分析。

结果与讨论

  1.肺结核病T淋巴细胞亚群与AgNORs面积与面积比的变化(见表1): 数据显示:肺结核病T淋巴细胞CD3、CD4、CD4/CD8明显降低,CD8明显增高,与对照组比较差异有显著性(P<0.01)。说明辅助性T细胞功能减弱和抑制性T细胞过度活化导致了肺结核病免疫功能低下,从而引起发病及病情恶化。此结果与文献〔2〕报道一致。

表1 肺结核病与正常T淋巴细胞亚群、核仁组成区嗜银蛋白各指标测定结果(±s)

  核仁组成区嗜银蛋白(AgNORs) T淋巴细胞亚群
AgNORs面积(μm2) AgNORs面积/核面积 CD3(%) CD4(%) CD8(%) CD4/CD8
 对照组  50 809.2± 92.5 5.75±0.65 72.74±6.54 49.56±5.63 21.88±2.66 2.12±0.37
 患者组  59 703.1±125.0* 4.16±0.72*  54.32±9.66*  37.41±6.96*  27.39±4.91*   1.39±0.38*
 菌阳组  41 703.1±117.9 4.05±0.63 53.15±9.66 36.39±6.91 27.78±5.39 1.32±0.39
 菌阴组  18 703.0±143.6 4.44±0.61 57.01±8.79 39.72±6.30 25.56±3.87 1.56±0.31
 初治组  42 710.3±131.7 4.26±0.65 54.12±9.60 37.67±6.67 27.93±5.05 1.35±0.36
 复治组  17 685.3±108.4 3.94±0.61 54.88±9.52 36.76±7.46 25.06±4.46 1.47±0.38
 有空洞组 27 677.3±111.2 3.73±0.38 53.81±9.97 37.00±7.25 28.22±5.20 1.31±0.40
 无空洞组 32 724.9±133.4 4.53±0.60 54.78±9.23 37.75±6.59 26.16±4.75 1.46±0.35

  患者组与对照组比较:*P<0.01。菌阳与菌阴、初治与复治、有空洞与无空洞病比较:△ P<0.05

  近年来研究证明,核仁组成区(nucleolar organizer region,NOR)是位于某些染色体上特殊部位的核糖体基因(rDNA),与之结合的酸性非组蛋白可用银染方法显示,这就是核仁组成区嗜银蛋白(AgNORs)〔3〕。研究表明,AgNORs可能就是调节rDNA转录的聚合酶Ⅰ亚单位,在rDNA转录、细胞增殖、蛋白合成过程中起重要的作用。本文中肺结核病AgNORs面积与面积比均显著低于对照组(P<0.01),表明肺结核病淋巴细胞的增殖、分化能力下降;有空洞者较无空洞者变化更明显(P<0.05),菌阳较菌阴病面积比降低更明显(P<0.05),复治病较初治病面积降低更明显(P<0.05),表明随着病情的加重,淋巴细胞的增殖、分化能力均有不同程度的下降。

  2.T淋巴细胞亚群与AgNORs面积、面积比的相关关系(见表2):经正态检验,T淋巴细胞亚群与AgNORs各指标数据均呈正态分布。

表2  T淋巴细胞亚群与核仁组成区嗜银蛋白各指标直线相关系数(r)

变量名 AgNORs面积 AgNORs面积/核面积   CD3   CD4   CD8 CD4/CD8
AgNORs面积  1.0000   ——   ——   ——   —— ——
AgNORs面积/核面积  0.3367*  1.0000   ——   ——   —— ——
CD3  0.2294  0.5476*  1.0000   ——   —— ——
CD4  0.1471  0.5480*  0.8585*  1.0000   —— ——
CD8 -0.2625* -0.4551* -0.5116* -0.4724*  1.0000 ——
CD4/CD8  0.1814  0.5317*  0.7132*  0.8413* -0.6252 1.0000

  * P<0.01 △ P<0.05

  直线相关分析表明:CD8与CD3、CD4/CD8呈显著负相关(P<0.01),CD3、CD4、CD4/CD8任两者间均呈显著正相关(P<0.01)。AgNORs面积与面积比间也存在显著正相关关系(P<0.01)。GA与CD3呈正相关(P<0.05),与CD8呈负相关(P<0.01);GA/NA与CD3、CD4、CD4/CD8均呈显著正相关,与CD8呈显著负相关(P<0.01)。表明T细胞亚群与AgNORs面积、面积比之间存在着较为密切的内在联系。因此,对肺结核病T淋巴细胞亚群及AgNORs面积与面积比的测定,定性定量地反映了肺结核病T淋巴细胞的功能,对全面评价病免疫功能状态、观察疗效、判断预后具有一定意义。

  参考文献

  1 陈立奇,何其华,王戈华,等.对rDNA转录活性的图象分析.遗传学报,1990,17∶75-80.

  2 刘成玉,滕青,邢淑芹,等.肺结核患者可溶性白细胞介素2及膜白细胞介素2受体和T淋巴细胞亚群的研究.中华结核和呼吸杂志,1996,19∶44-45.

  3 彭敦发.DAN定量、AgNORs定量测定及其在大肠癌研究中的意义.实用肿瘤杂志,1993,8∶59-62.

(收稿:1998-04-06  修回:1998-07-20)


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