急性白血病MTS1/P16基因缺失的研究

中国免疫学杂志 2000年第2期第16卷 临床免疫学

作者：黄毓　甘宝文　周建生　薜小霞　周吉成

单位：黄　毓(广西医科大学一附院　南宁　530021)；甘宝文(广西医科大学一附院　南宁　530021)；周建生(广西医科大学一附院　南宁　530021)；薜小霞(广西医科大学一附院　南宁　530021)；周吉成(广西医科大学一附院　南宁　530021)

　　分类号：R733.71

　　急性白血病是我国常见的造血系统恶性疾病。其病因及发病机理目前还不完全清楚，病毒、遗传因素及染色体异常与它的发生都有关系。现已证实，MTS1/P¹⁶基因在人类多种恶性肿瘤中存在着不同形式的改变^［1,2］，但有关MTS1/P¹⁶基因在急性白血病中的研究国内报道少^［3］。我们采用差别 PCR技术对MTS1/P¹⁶基因在急性白血病中纯合缺失进行检测，以了解MTS1/P¹⁶基因缺失与急性白血病的关系。

　　1　材料与方法

　　1.1　标本来源　30例急性淋巴细胞白血病(ALL)，男19例，女11例，年龄2～70岁，中位年龄19岁。43例急性非淋巴细胞性白血病(ANLL)，男24例，女19例，年龄2.5～73岁，中位年龄34岁。对照组15例，为非恶性血液病病人(缺铁性贫血7例，血小板减少性紫癜8例)，均为我院住院病人，诊断标准均符合FAB法，治疗前抽骨髓1～2 ml，以用于DNA提取。

　　1.2　DNA提取　参照《分子克隆实验指南》^［4］提取高分子量DNA，用TE(pH8.0)溶解，紫外分光光度测其 OD值，调整浓度至 50 ng/ml，以备PCR扩增。

　　1.3　引物设计　根据已知MTS1/P¹⁶基因序列，在第2外显子的两侧设计1对扩增引物，PCR扩增物为480 bp，引物序列如下：PS1:5′ - GGAAATTGGAAACTGGAAGC-3′;PS2:5′ - TCTGACCTTTGGAAGCTCT-3′。选用DMD Exon51引物做内对照，其PCR扩增产物为388 bp，引物序列如下：PS1:5′ - GAAATTGGCTCTTTAGCTTGTGTTTC-3′；PS2:5′ - GGAGAGTAAAGTGATTGGTGGAAAATC-3′。上述引物均由中国科学院上海生化所合成。

　　1.4　PCR扩增　PCR反应混合液含10×PCR Buffer,200 μmol/L dNTP，1 μmol/L primer, 200 ng模板DNA， Taq DNA 2.5 U加 H₂O至终体积 50 μl，在DNA扩增仪上进行如下循环：95℃预变性5.0 min ，95℃，1.0 min；58℃，1.0 min；72℃，1.5 min；30个循环。取5　μl　 PCR产物在2%琼脂糖凝胶 (加EB　0.5　μg/ml)上电泳分析(Taq DNA聚合酶为美国Life Technologies 产品)。

　　2　结果

　　30例 ALL有10例MTS1/P¹⁶Exon2纯合缺失，频率为33.3%(10/30)；43例ANLL中有 6例MTS1/P¹⁶ Exon2纯合缺失，频率为14.0%(6/43)，15例对照无MTS1/P¹⁶Exon2纯合缺失。

　　3　讨论

　　MTS1/P¹⁶是定位于人类染色体9P²¹的多肿瘤抑制基因^［2,3］，编码一分子量为16 kD的核磷酸蛋白，P¹⁶蛋白可直接作用于细胞周期蛋白依赖激酶(CDK)4/6，周期素(cyclin)D和RB基因编码蛋白 P^Rb的反馈通路，通过调节 P^Rb活性，抑制细胞从G1→S期转变，防止细胞增殖^［5,6］。MTS1/P¹⁶基因在人类多种原发性肿瘤和细胞系中主要表现为纯合缺失或突变失活。等位基因纯合缺失在白血病细胞系中达25%～65%^［1,7］。本实验发现，30例ALL MTS1/P¹⁶纯合缺失率为33.3%(10/30)，43例ANLL MTS1/P¹⁶纯合缺失率为14.0%(6/43)。文献报道造血系统恶性肿瘤中MTS1/P¹⁶基因缺失和突变的检出率为5.56%～43.60%，平均13.81%，其中以急性淋巴细胞白血病(ALL)检出率最高，平均为29.80%，而在急性非淋巴细胞白血病(ANLL)，慢性粒细胞白血病(CML)和淋巴瘤患者检出率极低^［8］。Hebert报道55例 ALL中22例有MTS1/P¹⁶基因缺失，占44%^［9］。Ogawa报道1组134例AML，仅有2例有MTS1/P¹⁶基因缺失^［10］。

　　MTS1/P¹⁶基因在不同组织的肿瘤标本或来源于不同地区同一种组织的肿瘤标本中，其缺失和突变频率也不同^［11］，这一现象提示MTS1/P¹⁶基因改变在不同组织的癌变过程中的作用有所不同。造成这种差异的原因尚不清楚，但可能与各脏器组织接受致癌物的种类，剂量以及对致癌物的代谢能力有关。本文研究结果，MTS1/P¹⁶基因在ALL中的高频率缺失及在ANLL中的改变，提示MTS1/P¹⁶基因缺失与急性白血病的发生可能有关。■

　　作者简介：黄　毓，女，31岁，医学检验学士，主管技师

　　参考文献：

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收稿日期：1998-08-20

修回日期：1999-01-30