急性髓细胞性白血病骨髓切片原癌基因c-myc的表达

临床血液学杂志 1999年第6期第12卷 实验研究

作者：石军　浦权　杨梅如　刘蕙芝　陶英　李晓

单位：上海市第六人民医院、上海第二医科大学市六临床医学院　血液科　上海市，200233

关键词：白血病，急性/髓细胞；骨髓塑包切片；c-myc原癌基因

　　c-myc是参与调控细胞增殖与分化的原癌基因，已知其表达水平与急性髓性白血病(AML)的发生与预后有关^〔1〕。作者采用本室自行研制的简易Hemapun 959丙酮塑包切片，检测治疗前AML患者髓内白血病细胞c-myc原癌基因的表达水平，并与同一塑包切片切割之常染色切片进行同步观察，以期探讨塑包切片白血病细胞内c-myc蛋白水平的临床意义。

　　1　材料和方法

　　1.1　病例选择　1997年10月～1998年8月，8例经临床、血象和骨髓象按国内习用标准而确诊为AML。其中，男6例，女2例，年龄23～72(中位49)岁，均采用常规剂量DA或HA方案化疗。

　　1.2　取材、处理与切片　以B65-01型活检针于髂后上棘采集治疗前骨髓活检标本。活组织块于冷丙酮中固定2 h后包埋于本室自制的Hemapun 959包埋剂中，4℃下聚合过夜。包埋块切割成3～5 μm厚之切片，常规贴片。

　　1.3　切片常染色　采用苏木素-Giemsa-酸性品红(HCG)染色^〔2〕。

　　1.4　切片c-myc蛋白检测　用APAAP法进行c-myc蛋白免疫组化染色，c-myc为鼠多抗，1∶50稀释。

　　1.5　观察方法　①细胞内c-myc基因表达强度共分四级，-：未着色；+：粉红色弱阳性；：红色中度阳性；：深红色强阳性。②常染色切片：观察c-myc免疫组化染色阳性细胞在对应的常染色切片上之细胞分类。③切片上c-myc蛋白半定量：将骨髓切片分为小梁旁区、间区及中央区^〔2〕，于每个区域至少计算200个有核细胞，算出不同表达强度的c-myc阳性细胞百分比，按下式计算切片内c-myc蛋白半定量值。c-myc蛋白半定量=(%＋X1)+(%X2)+(%+X3)。

　　2　结果

　　2.1　同一塑包块切割之切片上c-myc蛋白免疫组化染色与常染色的同步观察　c-myc阳性细胞分布与常染色下原始细胞分布范围基本相当，均呈弥漫分布，原始细胞间c-myc染色强度不等。另外c-myc染色强阳性的细胞中偶见中、晚幼粒细胞，位于小梁旁区。

　　2.2　治疗前AML骨髓切片上c-myc蛋白半定量值与疗效关系　见附表。8例AML骨髓切片c-myc半定量值平均100(60～152)，其中例1、例2 c-myc值较高，治疗后未缓解，其余6例化疗后均有不同程度缓解。

附表　AML骨髓切片上c-myc基因表达及疗效

例别	myc阳性细胞(%)				myc蛋白 　　半定量值	疗效
	总计	+
1	78	25	33	20	151	NR
2	45	25	5	15	80	CR
3	74	22	26	26	152	NR
4	48	36	10	2	60	CR
5	61	49	7	6	81	CR
6	53	40	8	5	71	CR
7	51	38	10	3	74	PR
8	66	32	23	11	101	PR

　　3　讨论c-myc是参与细胞增殖与分化的调控基因，在增殖能力旺盛的细胞中呈高表达^〔1〕。AML患者增殖旺盛的白血病细胞粘着力强，常分布于小梁旁区，不易被抽吸，加之AML患者骨髓常伴有不同程度的骨髓网硬蛋白纤维增生，使得抽取物涂片不能真实反映髓内主质结构与细胞分布的全貌，从而影响了c-myc蛋白的检测水平。故骨髓活检标本就显得尤为重要。近年来，在骨髓切片上进行癌基因蛋白检测时有报道^〔4〕，但均采用石蜡包埋或冰冻切片。石蜡包埋的缺点是同一患者一次取材之活检块必须纵向分割为二，一半作塑包进行常规染色，供组织学检查用；另一半石蜡包埋供免疫组化检测用，无法进行常规染色与免疫组化染色的同步观察；而冰冻切片上虽能进行部分免疫组化染色，但切片主质内的组织构型和细胞形态模糊，难以准确判定恶性细胞的来源与标记物反应。而骨髓塑包切片就能避免上述弊端。

　　参考文献

　　1　Blick M,Westin E,Gutterman J,et al.Oncogene expression in human leukemia.Blood,1984,64:1234～1239

　　2　浦权，编著.骨髓活检病理学.哈尔滨：黑龙江科学技术出版社，1993.14

(1998-12-27 收稿)