薏苡仁酯对人鼻咽癌细胞体外增殖的影响
癌症 1999年第6期第19卷 论著摘要
作者：胡笑克，李毓，高敏，李典鸿，梁昌盛
单位：胡笑克，李毓，高敏，李典鸿，梁昌盛 中山医科大学核医学教研室（广州，510089）；李毓，高敏，李典鸿 广东省中医研究所
关键词：鼻咽癌细胞株；CNE2Z；薏苡仁酯；药物作用
中图分类号：R730.23 文献标识码：A
文章编号：1000－467X(1999)06－0730－01
薏苡仁配合放射治疗晚期鼻咽癌（NPC）已取得较好的近期和远期效果〔1〕。但单独使用薏苡仁能否抗NPC还值得深入研究。本文在既往研究的基础上，探讨薏苡仁的有效成分薏苡仁酯（CXL）对人NPC细胞增殖的影响及其可能的作用机理。
1材料与方法
1.1材料
雄性NIH小鼠，本校实验动物中心提供。人NPC细胞株CNE2Z为低分化鳞状细胞癌（广东医学院建株）。CXL注射液（浙江康莱特药业股份有限公司提供，批号96181277）、3HTdR(中国科学院北京原子能研究所)、RPMI1640（Gibco）、顺铂（DDP，济南齐鲁制药厂）。
1.2方法
细胞的增殖能力检测采用3HTdR掺入法和活细胞（台盼蓝拒染）计数法。
测定量效曲线：取对数生长期CNE2Z细胞接种于96孔培养板内，常规培养（5％CO2、95％O2、饱和湿度）12h后，加入药物。设不加药对照组，DDP阳性对照组，CXL实验组。DDP及CXL剂量为10－7～10－4mol/L。加入药物后同条件下继续培养72h。终止反应前4h每孔加入3H－TdR0.5μCi。培养结束后用多头细胞收集器收集细胞，液闪测量其放射性计数（cpm）。计算抑制率，抑制率=[（1－实验组或阳性对照组cpm）/不加药对照组cpm]×100％。以抑制率对浓度作图，绘制量效曲线。
测定CXL的时效关系方法同上，药物浓度取10－4mol/L，培养时间6～72h。药物作用达到规定的时间后，弃去原含药培养基，换用无药培养基，继续培养至72h。
测定CXL对细胞倍增时间的影响用活细胞计数法。t代表培养时间，N0及Nt分别表示接种和培养t小时后的活细胞数，测定药物对细胞倍增时间（TD）的影响。TD=0.301t/（logNt-logN0）〔2〕。
观察药物对骨髓的毒性作用：取3只小鼠右侧股骨常法制备骨髓有核细胞悬液。接种细胞数、培养条件及检测方法同前述（3H－TdR掺入法）。CXL和DDP浓度分别取10－4mol/L，作用72h，计算其对骨髓细胞生长的抑制率。
1.3结果分析与统计处理
采用推广的MichaelisMenten方程〔3〕分析药效动力学参数。显著性差别采用t检验。n代表实验次数。药物的相对效力（RP）在ID50水平求得。设两药物量效曲线直线化后的斜率平行（无统计学差别），B药对于A药的RP=ID50A/ID50B。
2结果
2.1药物对CNE-2Z增殖的影响
CXL和DDP（作用72h）均以量效方式抑制CNE-2Z增殖（图1），ID50分别是10－4.906±10－5.619mol/L和10－5.531±10－6.268mol/L(
±s)，(n=6，下同）。CXL的RP是DDP的23.7±4.5％（两条量效曲线直线化后的斜率分别是：CXL0.968±0.204，DDP0.751±0.153；经检验t=0.851，P＞0.5）。
图1 CXL对CNE2Z增殖的抑制作用
时效关系研究显示，加CXL（10－4mol/L）后12h即见效，并随时间延长抑制作用加强，36h后曲线趋向平坦（图2）。
图2 CXL抑制CNE2Z增殖的时效关系
在本实验条件下，CNE2Z于接种后24h进入对数生长期，5天平台期。在对数生长期，CNE2Z的TD为27.5±5.1h，经CXL（10－4mol/L）处理后，TD延长至38.5±6.5h，增加40.0％±6.2％。
2.2药物对骨髓细胞的毒性作用
正常骨髓细胞经药物（10－4mol/L）作用72h，CXL组对其生长的抑制率为0.2±4.0％，DDP组87.3±10.6％。
3讨论
CXL是从薏苡仁提取的一种有效成分，具有抗癌和免疫调节作用〔4〕。CXL能抑制宫颈癌细胞HeLa53、结肠癌细胞M7009的增殖，但对NPC细胞CNE2Z是否有同样作用尚未见报道。
在本实验条件下，CXL对CNE2Z的增殖呈浓度依赖性抑制。时效曲线显示10－4mol/LCXL对CNE-2Z增殖的抑制作用在加药后12h即见效，且随时间的延长而加强，但36h后抑制作用不再增强。由于细胞DNA合成（3H-TdR掺入）减少，故CNE-2Z的TD明显延长。虽然，CXL的相对效力只有DDP的23.7％，但无骨髓抑制，即使在高剂量（10－4mol/L）长时间（72h）作用下，正常骨髓细胞的生长也未受影响，而DDP则相反，对该细胞的损伤高达87.3％。说明CXL能选择性地抑制NPC肿瘤细胞CNE-2Z的增殖。
基金项目：广东省自然科学基金（No.970839）资助项目
〔参考文献〕
〔1〕李毓.薏苡仁配合放射治疗晚期鼻咽癌的远期疗效分析〔J〕.华夏医学，1998，11（1）：10.
〔2〕徐端正.推广的MichaelisMenten方程在计量效应曲线上的应用〔J〕.上海医科大学学报，1990，17（1）：69.
〔3〕韩锐.抗癌药物研究与实验技术〔M〕.北京：北京医科大学、中国协和医科大学联合出版社，1997：282～283.
〔4〕阴健.中药现代研究与临床应用〔M〕.北京：中医古籍出版社，1995：388～392.
收稿日期：1999－02－24；修回日期：1999－06－11
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