肺癌患者术前纤维支气管镜取材检测p53蛋白的诊断价值

中华肿瘤杂志 1998年第6期第0卷 临床研究

作者：余庆鹤　肖正清　刘耕云　陆桂君　傅红梅

单位：650032 昆明医学院第一附属医院胸外科(余庆鹤、肖正清、刘耕云)，病理科(陆桂君、傅红梅)

　　关键词： 肺肿瘤/诊断；p53蛋白/分析；支气管镜检查；淋巴转移；免疫组织化学

　　【摘要】　目的　研究支气管粘膜在肺癌和肺良性疾病情况下纤维支气管镜刷检涂片细胞学标本和活检组织标本中p53蛋白的表达情况，以探索在肺癌早期诊断中的价值及其与肺门或纵隔淋巴结转移的关系。方法　用鼠抗人p53单克隆抗体，以sp免疫细胞组织化学方法检测p53蛋白表达。结果　肺癌单纯刷检涂片及单纯活检组织中，p53蛋白表达阳性率分别为33.3％(12/36)和47.2％(17/36)，刷检加活检阳性率为61.1％(22/36)。肺良性疾病刷检涂片及活检组织中，p53蛋白表达均为阴性，与肺癌比较，差异有显著性(P＜0.0001)。结论　术前纤维支气管镜取材检测p53蛋白可作为临床早期诊断肺癌的一个指标，p53蛋白表达与肺癌组织类型、pTNM分期和分化程度无关。

　　Diagnostic value of p53 protein examination in lung cancer through preoperative fibro-optic bronchoscope brushing and biospy　　Yu Qinghe, Xiao Zhengqing, Liu Gengyun, et al. Department of Thoracic Surgery, The First Affiliated Hospital, Kunming Medical College, Kunming, Yun Nan 650032

　　【Abstract】　Objective　To study the expression of p53 protein in lung cancer and benign pulmonary diseases through preoperative fibro-optic bronchoscope brushing and biospy as an approach to early diagnosis of lung cancer and to explore correlation between the expression of the gene product and metastatic involvement of hilar or mediastial lymph nodes.Methods Using a monoclonal antibody against p53, the expression of p53 protein was determined by immunocyto-histochemical techniques.Results　 Positive staining of p53 protein of cells obtained form bronchoscopic brushing and biospy was 33.3%(12/36) and 47.2%(17/36) respectively in lung cancer patients. There was 61.1%(22/36) positive staining of cells harvested by brushing plus biospy in lung cancer. No correlation between p53 protein expression and cell differentiation, histologic type or pTNM staging. No p53 expression was observed in benign pulmonary diseases.Conclusion p53 protein expression in cells collected from bronchoscopic brushing and biopsy may be useful in the diagnosis of lung cancer.

　　【Subject words】　Lung neoplasms/diagnosis　　p53 protein/analysis　　Bronchoscopy　　Lymphatic metastasis　　Immunohistochemistry

　　我们应用免疫组织化学方法，检测肺癌和肺良性疾病术前纤维支气管镜刷检涂片及活检组织中p53蛋白的表达情况，以探讨其在肺癌早期诊断中的价值及其与肺门或纵隔淋巴结转移的关系。

材料与方法

　　1.研究对象：本院1996年1月～1997年1月门诊及住院患者。肺癌组36例，其中20例手术治疗，按国际TNM分期：Ⅰ期7例，Ⅱ期2例，Ⅲa期7例，Ⅲb期3例，Ⅳ期1例。肺良性疾病组36例，其中肺结核15例，炎性假瘤8例，肺炎5例，错构瘤3例，支气管扩张症2例，肺血管瘤1例，肺包囊虫病1例，肺脓疡1例。

　　2.检查方法和标本收集：采用鼻腔、咽喉部喷雾和环甲膜穿刺麻醉，使用01ympusBF-1TR型纤维支气管镜和配套的活检钳、尼龙刷。一般活检取3～5块，刷片4～6张。刷检涂片在丙酮溶液中固定5分钟后放4℃冰箱中保存待测，活检标本用10％福尔马林液固定。

　　3.免疫组织化学染色：采用链霉素抗生物素蛋白——过氧化酶连结法(SP法)，SP试剂盒为福州迈新生物技术开发公司产品，染色步骤按说明书方法进行。

　　4.结果判断：以细胞核呈清晰棕色或胞核胞桨同时呈棕色的细胞数所占比例＞10％为阳性，单纯胞桨着色而无胞核着色或胞核胞桨均无着色或阳性着色细胞数＜10％为阴性。

　　5.统计学处理：四格表确切概率法、χ²检验和秩和检验。

结果

　　1.肺癌、肺良性疾病与p53蛋白表达：结果见表1，2。肺癌组和肺良性疾病组中各有10例在肺切除标本不同部位同时做病理学和p53蛋白检查(肿块组织、肿块与周围肺组织交界部位组织、周围正常肺组织)。病理学仅在肿块组织中异常，而交界部位组织和周围正常肺组织病理学均为正常。p53蛋白检测结果显示：肺癌组，肿块组织中p53蛋白阳性率为70％(7/10)；交界部位组织p53蛋白阳性率为50％(5/10)，与正常肺组织(均为阴性)比较，差异有显著性(P＜0.01，P＜0.05)。肺良性疾病组不同部位检测p53蛋白均为阴性。

表1　肺癌组纤维支气管镜刷检及活检p53蛋白表达

注:A与B、B与C相比，P＞0.05；A与C相比，P＜0.05

表2　两组患者纤维支气管镜取材p53蛋白表达的比较

　　P＜0.0001

　　2.肺癌组织学类型与p53蛋白表达(刷检加活检)：结果见表3。

　　3.肺癌pTNM分期、分化程度与p53蛋白表达(刷检加活检)：结果见表4。

表3　肺癌组织学类型与p53蛋白表达

注：Hc＝3.31　P＞0.05

表4　肺癌pTNM分期、分化程度与p53蛋白表达的关系

讨论

　　p53基因是在SV40大T抗原基因转染的细胞中发现的^［1］。Finlay等^［2］在研究转化时发现野生型p53基因能抑制细胞转化，突变型p53基因则促进细胞转化，并提出野生型p53基因是抗癌基因。p53基因发生突变时产生的突变型p53蛋白构象发生改变，稳定性增加，且能与一些癌蛋白形成稳定的复合物，使其半衰期大大延长，含量比正常增多，表达增强，并可用免疫组织化学方法检测到。因此，p53蛋白的免疫组化检测是一种快速反映p53基因突变的方法^［3］。

　　本研究通过免疫组化染色法检测36例肺癌和36例肺良性疾病术前纤维支气管镜刷检及活检标本p53蛋白表达情况，结果：肺癌组部分患者刷检涂片及活检组织中有p53蛋白阳性表达，阳性率分别为33.3％和47.2％，刷检加活检则为61.1%;肺良性疾病组刷检及活检p53蛋白均为阴性，与肺癌组比较，差异有显著性(P＜0.0001)，提示p53蛋白可作为肺癌细胞较特异的标志物。肺癌组中，纤维支气管镜检腔内肿块直接取材17例，p53蛋白阳性率64.7％；而镜下未见肿块生长，仅有支气管外压性膨隆，在膨隆处支气管粘膜取材14例，阳性率57.1％，差异无显著性(P＞0.05)。因此，p53蛋白不仅在肿瘤组织中有阳性表达，而且在肿瘤边缘组织中也有阳性表达。本组有5例周围型肺癌在镜检时未发现异常，结合影像学资料定位，在相应肺段支气管插入活检钳多处活检及刷检后诊断肺癌1例(鳞腺癌)；4例未能做出组织学诊断，但其中有3例p53蛋白阳性，推测取材部位在肿瘤附近，已有p53基因突变，故p53蛋白表达阳性，但在肿瘤附近的细胞和组织形态尚无明显改变，最后经手术后病检证实为肺癌(腺癌1例，肺泡癌1例，鳞癌1例)。提示p53基因突变是支气管肺癌的早期事件，且p53基因突变的时间发生在细胞或组织形态改变之前，因而在肺癌的早期诊断中具有意义。我们进一步对部分病例的肺切除标本在不同部位做p53蛋白检测，发现不仅肺癌组织中有p53蛋白阳性表达，而且在癌组织与周围正常组织交界处也有p53蛋白阳性表达，而周围正常肺组织则均为阴性，差异有显著性(P＜0.01及P＜0.05)。肺良性疾病不同部位检测p53蛋白均为阴性，两组病例交界部位病理学检查均为正常，进一步说明p53蛋白在癌组织和癌边缘组织中均有阳性表达。因此，p53蛋白可作为癌细胞较特异的标志物运用于临床，在纤维支气管镜刷检和活检做细胞学、病理学检查的同时做p53蛋白检测有助于肺癌早期诊断，特别是镜检时，支气管未见异常改变的患者更有意义。

　　我们的研究显示，p53蛋白阳性率与肺癌组织学类型及肿瘤大小均无关。p53蛋白表达与肺门或纵隔淋巴结转移的关系，国内外学者研究的结果不一。Marchetti等^［4］报道p53改变与肺门或纵隔淋巴结转移高度相关(P＜0.01)，国内邹伟等^［5］、姜彦多等^［6］的研究结果与此相似，而许良中等^［7］的研究结果则与此相反。我们的研究结果显示，p53蛋白表达与有无淋巴结转移无显著相关(P＞0.05)。虽然Ⅲ～Ⅳ期肺癌p53蛋白阳性率高于Ⅰ～Ⅱ期，但差异无显著性(P＞0.05)；不同分化程度肺癌p53蛋白表达差异无显著性(P＞0.05)。所以，p53蛋白表达与肺癌组织学类型、pTNM分期和分化程度无明显关系。

参考文献

　　1　Lane DP, Crawford LV. T antigen is bound to a host protein in SV40 transformed cells. Nature, 1979, 278: 261-263.

　　2　Finlay CA, Hinds PW, Levine AJ, et al. The p53 proto-oncogene can act as a suppressor of transformation. Cell, 1989, 57: 1083-1089.

　　3　Harris CC, Hollstein M. Clinical implications of the p53 tumor suppressor gene. N Engl J Med, 1993, 329: 1318.

　　4　Marchetti A, Buttitta F, Merlo G, et al. p53 alterations in non-small cell lung cancers correlate with metastatic involvement of hilar and mediastinal lymph nodes. Cancer Res, 1993, 53: 2846-2851.

　　5　邹伟，杨梅怀，张岩峰. p53蛋白在肺癌中表达的研究. 临床与实验病理学杂志，1994， 10： 302-304.

　　6　姜彦多，何安光，朱继江，等. p53基因突变产物在肺癌组织和胸水的表达及其意义. 中国肿瘤临床，1996，23：777-780.

　　7　许良中，朱雄增，蒋国梁，等. 203例肺癌癌基因与抗癌基因癌蛋白的研究. 上海医科大学报，1994，21：241-244.

(收稿：1998-01-19　　修回：1998-03-25)