肺癌P53蛋白表达与DNA含量及预后的关系

齐鲁肿瘤杂志 1998年第3期第5卷 论著摘要

作者：邹　涛　梁　丽　邹　伟　杨梅怀

单位：邹　涛　沂南县（276300）山东省沂县人民医院；梁　丽昆明市（650102）云南省第二临狱医院；邹　伟　杨梅怀青岛市（266021）山东省青岛医学院病理学教研究

　　P⁵³基因是一种肿瘤抑制基因，对细胞的生长起负性调节作用，其突变失活在肿瘤演进过程中具有重要作用。本文应用免疫组化技术检测了P⁵³蛋白在肺癌中的表达，并用图像分析方法测定DNA含量，初步探讨两者之间的关系及P⁵³蛋白表达的临床病理意义。

　　1　材料和方法

　　1.1研究村料

　　青岛医学院胸外科1977～1988年间共手术切除且经病理诊断为原发性肺癌的组织标本167例，全部进行了术后5年以上随访。选取在预后方面有明显差异的标本82例。其中5年以上生存者48例（5年生存率为28.75％），半年内死亡者34例。标本均经10％福尔马林固定，常规石蜡包埋，4μm厚连续切片，HE染色，按WHO（1981）组织学分型标准分型，计有鳞癌40例，腺癌34例，小细胞癌7例，大细胞癌1例。

　　1.2　研究方法

　　免疫组织化学检测应用LS AB（1abelled stre ptav idin biot in)法。P⁵³蛋白（Do-7)及LS AB试剂盒均购自Da ko 公司P⁵³蛋白工作浓度为1:30,置于4℃冰箱过夜。阳性切片用已知乳腺癌阳性切片，阴性对照省略Ⅰ抗，用PBS代替。以细胞核内出现明显的棕色颗粒为阳性显色。

　　DNA含量应用德国VIDAS型多功能图像分析仪测定。切片经Feulgen 染色，将待测细胞在显微镜下定位，由电视摄像系统提取细胞图像，经数字化处理后输入计算机系统，能过后者求出视野内癌细胞（＞100个）的积分光密度值（IOD），同时测定同切片内淋巴细胞（＞40个）的IOD做为正常二倍体（2C）对照。按下列公式求出DNA倍体值：

　　1.3　统计处理

　　根据资料性质不同，统计学分析分别采用X²检验和t检验。

　　2　结果

　　82例肺癌组织标本中，44例（53.65％）P⁵³蛋白阳性表达，阳性显色定位于癌细胞核内，肿瘤间质及正常肺组织内均未见阳性表达。其中鳞癌P⁵³蛋白阳性表达率为52.5％（21/40），腺癌为52.9％（18/34），小细胞癌为71.4％（5/7），大细胞癌为0（0/1）。经统计学处理，各组织类型间P⁵³蛋白阳性表达率无显著性差异（P＞0.05）。

　　2.1　P⁵³蛋白表达与淋巴结癌转移的关系

　　本文病例中，病理资料有淋巴结情况者71例（鳞癌34例，腺癌30例，小细胞癌7例）。经统计学处理，肺腺癌P⁵³蛋白表达与淋巴结癌转移间有显著关系，淋巴结癌转移阳性组P⁵³蛋白阳性表达率显著高于淋巴结癌转移阴性组（P=0.013)。而在鳞癌和小细胞癌，P⁵³蛋白表达与淋巴结转移间关系不明显（P＞0.05）。

表1　P⁵³蛋白表达与淋巴结癌转移的关系　　

　　2.3　P⁵³蛋白表达与DNA含量之间关系（表3）：

　　本文病例中，P⁵³蛋白阳性表达组DNA含量 （8.91±2.84C）显著高于P⁵³蛋白阴性组（6.60±1.47C）P＜0.05）。在不同组织学类型中，鳞癌和腺癌的P⁵³蛋白表达均与DNA含量之间存在显著相关性，P⁵³蛋白阳性表达者DNA含量显著高于P⁵³蛋白阴性者（P＜0.05）。

表3　肺癌P⁵³蛋白表达与DNA含量的关系

　　3　讨论

　　P⁵³蛋白在调节细胞的增殖过程中起重要作用，它出现于细胞周期的G₁晚期，调节细胞由G₁期进入S期（DNA合成期）。P⁵³蛋白功能异常可导致细胞获得旺盛增殖的能力，需要合成大量DNA以满足其旺盛增殖的需要。Manfred报道肺鳞癌异倍体与P⁵³蛋白表达有明显相关性。因此对人体肿瘤同时进行P⁵³蛋白表达和DNA含量检测，对深入认识肿瘤的发生发展过程有重要意义。本文结果表明，P⁵³蛋白与DNA含量间存在显著正相关关系，肺鳞癌和腺癌P⁵³蛋白阳性表达者DNA含量显著高于P⁵³蛋白阴性者，说明P⁵³基因突变后，其功能由抑癌变为促癌，导致细胞DNA合成增多，增殖能力旺盛。限于本文小细胞癌和大细胞癌例数较少，其结果有待进一部研究。

　　关于P⁵³蛋白与肺癌预后关系的研究，文献报道不多。本文结果显示P⁵³蛋白阳性表达者预后显著差于P⁵³蛋白阴性者（P＜0.05）。在不同组织学类型中，肺腺癌半年内死亡组P⁵³蛋白阳性表达率显著高于5年以上生存组（P=0.045），提示P⁵³蛋白表达在评估肺腺癌预后方面是一个重要指标；同时P⁵³蛋白表达与肺腺癌有无淋巴结癌转移之间也有明显相关性，P⁵³蛋白阳性表达者癌转移阳性率高。文献报道肺献腺癌脑部转移瘤P⁵³基因突变远比其原发瘤多见，亦支持本文结果。Nuorva报道P⁵³蛋白表达在鳞癌的发生发展中是一个早期事件，与肿瘤的恶性转化有关，而与恶性转化后浸润转移的关系不明显。本文肺鳞癌P⁵³蛋白表达与患者预后及淋巴结转移间无相关性，亦支持这一点。笔者认为，原位检测肺癌尤其是肺腺癌P⁵³蛋白的表达，可以更为客观、准确地判断肺癌的生物学行为及预测患者的预后，在临床病理及外科治疗方面有一定的应用价值。