CD44变异体V6、V7/8在非小细胞肺癌中的表达及临床意义
第三军医大学学报2000年第22卷第7期
孙焰 陈幸华 罗平 贺光友
摘 要：目的 探讨CD44 v6、V7/8与非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer,NSCLC)患者的淋巴结转移及预后的关系。方法 采用免疫组化方法观察CD44 v6、V7/8在76例原发性非小细胞肺癌组织及转移淋巴结中的表达。结果 在肺癌中CD44 v6、V7/8表达鳞癌多于腺癌(P＜0.01)；在正常肺组织中无表达。淋巴结转移病例中CD44 v6 33/36(91%)表达阳性，在25例转移淋巴结中24例表达阳性(96%)。CD44 v6在Ⅲ～Ⅳ期患者表达高于Ⅰ～Ⅱ期患者(P＜0.01)。结论 肺癌组织CD44 v6阳性表达对肿癌的组织病理分型、淋巴结转移及临床分期方面有一定的指导意义。
关键词：白细胞分化抗原44变异体；肺癌；转移
大量的研究结果表明CD44 v在许多肿瘤细胞中有高表达，并可能与肿瘤的组织类型和转移密切相关［1］。肺癌是最常见的恶性肿瘤之一，近年的发病和死亡率已跃居我国第一位，我们采用免疫组化方法观察CD44 v6、V7/8在非小细胞肺癌和其转移淋巴结中的表达，以探讨其与肺癌组织类型、临床分期、淋巴结转移的相关性。
1 材料与方法
1.1 标本来源与临床资料 76份组织标本取自西南医院胸外科1990～1998年间原发性肺癌手术切除标本，均有病理科明确的病理诊断。标本经福尔马林固定，石蜡包埋，制成0.5μm的切片，以癌旁5 cm的正常肺组织作阴性对照。肺鳞、腺癌各38例，有淋巴结转移36例，转移淋巴结组织25例，病例中男性54例，女性22例，年龄33～72岁，平均年龄53岁。临床分期按UICC1997肺癌TNM分期标准。
1.2 实验用品
CD44 V6、CD44 V7/8鼠抗人单克隆抗体，HIGH-SABC免疫组化试剂盒(HIGH-SABC1081)及DAB显色剂均购自博士德生物工程有限公司。
1.3 实验方法
按HIGH-SABC试剂盒免疫组化染色步骤进行。阴性对照以TBS代替CD44 v单抗。
1.4 结果判定按试剂盒标准
阴性(-)：整张组织切片均无着色；阳性(+)：癌细胞膜上均匀黄色或浅棕黄色颗粒，胞浆内无或少许着色，阳性细胞数＜50%；强阳性()：癌细胞膜上均匀棕黄色或深棕色颗粒，阳性细胞数＞50%。
1.5 数据处理
组间阳性百分率采用χ2检验。
2 结果
2.1 CD44 V6、V7/8在非小细胞肺癌中的表达
CD44 V6、V7/8在正常肺组织中均无表达。
CD44 V6在38例鳞癌(Squamous cell carcinoma,SCC)中有32例阳性表达(84%)，见图1。其中强阳性11例，弱阳性8例；CD44 v6在肺腺癌(Adenocarcinomd,ADC)中的阳性表达为12例(31%)，见图2，二者差异显著(χ2=21.59，P＜0.01)。CD44 v7/8在鳞癌中阳性表达34例(89%)，见图3；在腺癌中有16例(42%)表达阳性，见图4，差异显著(χ2=13.68，P＜0.01)。
图1 CD44 V6在SCC中表达 胞膜着棕黄色颗粒，间质无着色 (ABC×400)
fig 1 Positive expression of CD44 V6 on the membrne of cell of SCC
brownish yellow granules on the cell membrane, stroma not stained (ABC ×400)
图2 CD44 V6在ADC中表达 胞膜着深棕色颗粒，间质无着色 (ABC×400)
fig 2 Positive expression of CD44 V6 on the membrne of cell of ADC
deep brown granules on the cell membrane, stroma not stained (ABC ×400)
图3 CD44 V7/8在SCC中表达 胞膜着棕黄色颗粒，间质无着色 (ABC×400)
fig 3 Positive expression of CD44 V7/8 on the membrne of cell of sCC
brownish yellow granules on the cell membrane, stroma not stained (ABC ×400)
图4 CD44 V7/8在ADC中表达 胞膜着深棕色颗粒 (ABC ×400)
fig 4 Positive expression of CD44 V7/8 on the membrne of cell of aDC
deep brown granules on the cell membrane (ABC ×400)
2.2 CD44 V6、V7/8与NSCLC淋巴结转移的关系
在76例原发性NSCLC中，有区域或纵隔淋巴结转移的占36例，CD44 v6阳性表达33例(91%)，无淋巴结转移的40例，阳性表达18例(45%)(χ2=20.57，P＜0.01)。在25例转移淋巴结中，CD44 v6阳性表达高达24例(96%)见图5，并且强阳性染色居多。CD44V7/8表达情况与V6不同，有淋巴结转移的36例中13例(37%)阳性表达，无淋巴结转移的40例中17例(42%)阳性表达，二者间无统计学意义，25例转移淋巴结有10例(41%)阳性表达，也明显低于V6。
图5 CD44 V6在转移淋巴结中阳性表达 (ABC×200)
fig 5 Positive expression of CD44 V6 in the
metastatic lymph nodes (ABC×200)
2.3 CD44 V6、V7/8与 nSCLC临床分期关系见表1
表1 CD44 V6、V7/8表达与NSCLC的TNM分期［病例(%)］
tab 1 Correlation of CD44 V6、V7/8 expression
with TNM stage of NSCLC［Case(%)］
| |
Ⅰ |
Ⅱ |
Ⅲ |
Ⅳ |
χ2 |
P |
| CD44 V6 |
19/37(52) |
8/15(55) |
17/21(82) |
3/3(100) |
14.67 |
＜0.01 |
| CD44 V7/8 |
15/37(42) |
6/15(46) |
10/21(48) |
1/3(33) |
0.2 |
＞0.05 |
3 讨论 白细胞分化抗原CD44是一种多功能跨膜糖蛋白，其编码基因位于11号染色体短臂，它的基因组中有10个V区变异型外显子，在转录过程中第5至16外显子可以一个或多个方式通过不同组合插入相应的mRNA链中，形成不同的CD44转录子(CD44 v)而指导合成一系列结构相似，功能各异的CD44蛋白［2］。国内外的研究表明CD44 v在肺癌组织中表达，在正常肺组织中无表达，Miyoshi检测发现CD44 v3至V7在肺癌中均有表达，而正常肺组织中无表达。本实验支持这一观点，并且还显示CD44 v6在肺鳞癌中的表达量高于腺癌(P＜0.01)，说明CD44 V的表达具有一定的组织类型选择性。Tran等［3］报道CD44 v6在肺鳞癌中91%表达，腺癌47%表达，P＜0.01，而且CD44 v在正常肺组织中无表达。CD44 V不仅在肺组织中表现出组织类型选择性，在其它组织中也有此现象，Kuo［4］用流式细胞仪检测了CD44 v6、V7/8在口腔鳞癌中的表达，阳性染色分别为77.4%和95.2%，CD44 v7/8阳性染色的5年生存率明显低于阴性染色者，其P＜0.05，他认为CD44 v7/8可作为口腔鳞癌预后评价的重要指标。
本实验结果还表明CD44 V6在Ⅲ、Ⅳ期肺癌中的表达明显强于Ⅰ、Ⅱ期(P＜0.01)，这与赵惠儒等［5］的研究相符，他们在90例NSCLC病例中Ⅰ-Ⅳ期的表达分别是57%、58%、85%和100%，Ⅲ～Ⅳ期与Ⅰ～Ⅱ期间差异有显著性(P＜0.01)。
我们发现CD44 V6在淋巴结转移病例中高表达91%，在转移淋巴结中表达为96%。Migoshi［6］报道有淋巴结转移的V6表达明显高于无淋巴结转移者，其分别为79.3%和40.6%(P＜0.01)，他认为CD44 v6与 NSCLC的淋巴结转移有关。CD44 V6不仅在肺癌淋巴结转移中有提示价值，在其它器官的淋巴结转移有相同之处，如头颈部肿癌，消化道肿癌等。Gu-J应用免疫组化和Rt-PCR证实CD44 v6在甲状腺癌的淋巴结转移中起重要提示作用［7］。
许多实验表明CD44 V通过与细胞外基质中的透明质酸、层粘连蛋白和细胞骨架等蛋白结合，介导肿瘤细胞迁移，促进恶性肿瘤细胞的转移［8］。CD44 v在肺癌中的表达及其与肺癌转移的相关性日益受到人们的关注。我们通过免疫组织化和临床资料分析，认为CD44 v6阳性提示肺癌淋巴结转移，具有一定的临床辅助诊断价值，并为肺癌临床分期提供理论依据，提示不良预后。
作者简介：孙焰(1964-)，女，四川省西充县人，硕士，主治医师，主要从事肺癌转移机制方面的研究。电话：(023)68754321孙焰（第三军医大学附属新桥医院全军肿瘤中心，重庆400037；附属西南医院)
陈幸华（第三军医大学附属新桥医院全军肿瘤中心，重庆400037；附属西南医院)
罗平（第三军医大学妇产科实验室)
贺光友（病第三军医大学理研究所，重庆 400038）
参考文献
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［2］ Herrlich P, Zoller M, Pals S T, et al. CD44 splice variants: metastases meet lymphocytes［J］. Immunol Today,1993,14(8):395-401.
［3］ Tran T A, Bhaskar V S, Kallakury M D, et al. Expression of CD44 standard form and variant isoforms in small cell lung car-cinomas［J］. Human pathology,1997,28(7):809-814.
［4］ Kuo M Y, Cheng S T, Chem H M, et al. Expression CD44 s, CD44 V5, cD44 V6, CD44 V7/8 in betel chewing-associated oral premalignan. Lesions and squanous cell carcinomas in Taiwan［J］. J Oral pathol Med,1998,27(9):428-433.
［5］ 赵惠儒，方 军，杜光烨，等.CD44在肺癌中表达的临床研究［J］.中华结核和呼吸杂志，1998，21(9)：541-543.
［6］ Migoshi T, Kondo K, Hino N, et al. The expression of the CD44 Variant exon 6 is associated with Lymph node metastasis in non-small cell lung cancer［J］. clin Cancer Res,1997,3(8):1 289-1 297.
［7］ Gu J, Daa T, Kashima K, et al. Expression of splice variants of CD44 in thyroid neoplasms derived from follicular cells［J］. Pathol int,1998,48(3):184-190.
［8］ Gunthert U, Hofmann M, Kudy W, et al. A new variant of Glycoprotein cD44 confers metastatic potential to rat carcinoma cells［J］. cell,1991,65(5):13-24.
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