大肠癌中增殖细胞核抗原和p53与nm23的表达及意义
江苏医药 2000年第1期第26卷 基础研究
作者：侯宁 吴波
单位：侯宁（210009 江苏省肿瘤医院病理科）； 吴波（210002 南京军区总医院病理科）
关键词：基因表达；免疫组织化；大肠癌
摘 要：目的 研究大肠癌中增殖细胞核抗原PCNA、p53、nm23的表达及临床病理特征间的关系。方法 应用SP免疫组织化学方法检测77例大肠癌中PCNA、p53、和nm23的表达。结果 PCNA表达强弱与肿块大小、分化程度、浸润深度、淋巴结转移及临床分期密切相关；p53与淋巴结转移及临床分期密切相关；nm23表达与淋巴结转移有统计学意义。结论 PCNA与p53蛋白的表达强度与大肠癌的进程呈正相关，nm23的强表达与淋巴结转移负相关，PCNA与p53正相关，与nm23负相关。由此可见，三项指标的综合表达对大肠癌的临床诊治及其预后评估有重要意义。
The expression of proliferating cell nuclear antigen，p53，nm23 and their significance in human colorectal carcinoma
HOU Ning，Wu Bo．
（Department of pathology，Jiangsu Cancer Hospital，Nanjing 210009）
Abstract：Objective To understand the relation between the expression of PCNA，p53，nm23 and the clinical pathology in human colorectal carcinoma． Method The expression of PCNA，p53 and nm23 in seventy-seven human colorectal carcinomas was studied with sp immunohistochemical technique． Results The expression of PCNA，p53，nm23 in the tumor is correlated with lymph node metastasis and clinical stage．Correlation was also observable in the expression of PCNA and the tumor size，infiltration depth． Conclusion The expression of PCNA and p53 protein are positively correlated to the cancer development，but nm23 has a negative correlation to the metastasis．So the three markers have important significance in clinic treatment and prognosis for colorectal carcinoma．
Key Words：Gene expression Immunohistochemistry Intestinal neoplasm▲
增殖细胞核抗原PCNA与抑癌基因p53蛋白在多种肿瘤中均有表达，且与肿瘤分化、转移、预后均相关，肿瘤转移抑制基因nm23的表达与淋巴结转移相关，但在大肠癌组织内尚无定论［1，2］。本文检测PCNA、p53、nm23在原发性大肠癌中的表达情况，评价以上三项免疫指标在大肠癌的分类诊断及其临床预后判断中的意义。
材料和方法
一、选取本院1996年6月～1998年6月77例大肠癌手术切除标本，男47例，女20例，所有患者术前均未经化疗或／和放疗，根据《中国常见肿瘤的诊治规范》的标准进行分类 。本组77例中，高分化腺癌17例，中分化腺癌34例，低分化腺癌9例，粘液腺癌17例。每例在肿瘤中央及边缘取组织三块，正常肠粘膜3例，经10％的中性福尔马林固定，常规石蜡包埋，连续切片，HE染色。
二、采用SP过氧化物酶标记的链酶卵白素，迈新公司产品鼠抗人PCNA、p53单抗 及兔抗人nm23，PBS液代替一抗作阴性对照，阳性对照片由公司提供。
三、阳性细胞记数和统计处理
1．细胞增殖活性PCNA的阳性率：PCNA为定位于细胞核颗粒性阳性，用高倍镜视野随机选择肿瘤区进行记数，计算每1000个肿瘤细胞中阳性细胞数所占比例，每例至少记数5000个肿瘤细胞（阳性肿瘤细胞数／5000×100％）。本组阳性表达从9.2％～73.2％不等，根据Morin计算方法，以平均阳性率细胞36.2％为标准，低于36.2％者定为低标，反之为高标［3］。
2．p53阳性指标：定位于癌细胞核呈棕黄颗粒状或团块状，阳性细胞＞10％时定为阳性［4］，否则定为阴性。
3．nm23的指标：nm23棕色颗粒分布在粘膜上皮及癌细胞胞浆内，部分膜着色，癌细胞阳性率＞30％者为阳性，癌细胞阳性率＜30％者为阴性。
4．结果应用卡方检验。
结果
一、PCNA 表达阳性的细胞可以存在于正常大肠粘膜、癌旁及癌细胞核内，本组表达见表1。77例大肠癌PCNA高低标者38例占总病例49.3％。PCNA的高标表达与肿块大小、浸润程度、分化程度、Duke′s分期、淋巴结转移呈正相关，有统计学意义。
二、p53 表达阳性仅存在于肿瘤细胞核内，本组阳性者42例，占54.5％见表1。阳性表达与Duke′s分期及淋巴结转移、分化程度正相关。
三、nm23 表达阳性位于浆内，部分膜着色，阳性者50例，占64.9％，见表1。仅与淋巴结转移呈负相关。
四、PCNA与p53蛋白表达两者正相关，42例p53阳性表达中PCNA高标者25例，占59.5％；36例p53阴性中PCNA高标者14例，占40％，P＜0.05，有显著性差异。
表1 PCNA、p53、nm23在大肠癌中的表达
| 生物学指标 |
PCNA |
|
p53 |
nm23 |
| 高标 |
低标 |
P值 |
阳性 |
阴性 |
P值 |
阳性 |
阴性 |
P值 |
|
φ≤4.5cm |
23 |
19 |
|
28 |
14 |
| 肿块直径 |
3.3±1.5cm |
4.7±0.8cm |
＜0.05 |
＞4.5cm |
19 |
16 |
＞0.05 |
22 |
13 |
＞0.05 |
| 浸润深度 |
| 粘膜层 |
6 |
0 |
|
|
2 |
4 |
|
4 |
2 |
| 浅肌层 |
10 |
4 |
8 |
6 |
9 |
5 |
| 深肌层 |
11 |
8 |
10 |
9 |
12 |
7 |
| 浆膜层 |
12 |
26 |
＜0.05 |
22 |
16 |
＞0.05 |
25 |
13 |
＞0.05 |
| 分化程度 |
| 高分化 |
14 |
3 |
|
|
8 |
9 |
|
13 |
4 |
| 中分化 |
18 |
16 |
20 |
14 |
24 |
10 |
| 低分化 |
3 |
6 |
5 |
4 |
6 |
3 |
| 粘液腺癌 |
4 |
13 |
＜0.05 |
9 |
8 |
＞0.05 |
7 |
10 |
＞0.05 |
| Dukes分期 |
| A |
11 |
0 |
|
|
4 |
7 |
|
4 |
2 |
| B |
10 |
5 |
11 |
4 |
11 |
4 |
| C |
13 |
15 |
11 |
17 |
19 |
9 |
| D |
5 |
18 |
＜0.05 |
16 |
7 |
＜0.05 |
11 |
13 |
＜0.05 |
| 淋巴结转移 |
| － |
21 |
6 |
|
|
10 |
17 |
|
21 |
6 |
| ＋ |
18 |
32 |
＜0.05 |
32 |
18 |
＜0.05 |
29 |
27 |
＜0.05 |
讨论 PCNA作为评价细胞增殖活性的指标［5］在细胞增殖周期中的表达随阶段不同而有增减。本研究结果表明，正常大肠粘膜也可见PCNA的细胞核内的弱表达，在大肠癌中不同分化程度及癌的不同区域表达不尽相同。随肿块直径的增大、分化程度的降低、浸润加深、淋巴结转移及临床分期的增加与PCNA的阳性率及强度正相关，且具有统计学差异，而与年龄、性别无关。这表明可以通过对PCNA的阳性率的统计判断大肠癌的恶性程度及预后估计的指标。这与Morin［3］的研究结果一致。
在人类肿瘤中抑癌基因p53是较常见的产生突变的原因，尤以大肠癌中表现更为明显［6］。p53基因有野生型和突变型两种，前者为肿瘤抑制基因，后者为致癌基因，前者的突变、缺失或后者的过表达均可促进肿瘤的发生。野生型蛋白产物半衰期短，较不稳定，因此免疫组化方法检出的是较稳定的突变型p53蛋白，其阳性表达具致癌作用。本研究结果表明p53蛋白的表达与淋巴结转移及临床分期呈正相关，而与年龄、性别、大小、深度、分化程度均无统计学差异。由此可推测p53的表达是预示肿瘤预后的一个较为有意义的指标。
转移是影响肿瘤治疗及预后的主要原因，转移的过程涉及多种癌基因。1984年Steeg［7］等首先从小鼠黑色素瘤中分离鉴定nm23基因，发现其在非转移性肿瘤中的优先表达，而且通过各种实验证明在人类部分肿瘤中的转移抑制作用。本文结果表明，nm23的阳性表达与淋巴结转移呈负相关，且有统计学差异。与临床分期呈反相关趋势，但无统计学意义。与年龄、性别、大小、深度、分化程度均无统计学差异。通过此基因检测可预知肿瘤的转移与否及转移倾向的有无，进而评估肿瘤的治疗和预后。
PCNA高表达与p53蛋白的过表达正相关，提示癌肿的发生发展与多肿瘤基因协同作用有关。本资料表明，随癌肿的进展，基因突变的增加，多基因的相互协同作用更为明显；而随肿瘤进展，nm23的表达逐渐减弱，说明通过多基因表达的检测对大肠癌的预后判断明显优于其中某个单基因表达。因此，通过对癌肿的多基因检测，可更为准确地对肿瘤的诊治及预后提供可靠依据。■
参考文献：
［1］Myeroff LL，Marbowitz SD．Increases NM23—H1 and NM23-H2 messenger RNA expression and absence of mutation in colon carcinomas of low high metastatic potential．J Natl Cancer Inst，1993，85：147．
［2］Morin Kakeji，Y，Adachi Y，et al．The propnostic significance of liferating all nuclear antigen in clinical gastric cancer．Surgery，1993，113：683．
［3］林华，张声，叶圣华，等．p53过表达与胃癌患者淋巴结转移的关系．临床与试验病理学杂志，1996，12：125．
［4］吴少华，蔡树模，张志毅，等．卵巢肿瘤基因nm23—H，CerbB—2，res和p53蛋白的表达与淋巴结转移关系的研究．肿瘤，1997，3：135．
［5］Yu cow，Wodds Al，Levision DA．The assessment of cellular proliferating by immunohistochemistry；A review of currently available methods and their application，I histochemical Journal，1992，24：121．
［6］Levine AJ，Perry ME，Chang A，et al．The 1993 Walter Hubert lecture；the role of the 53 tumor-suppressor gene in tumorigensis．Br J Cancer，1994，49：409．
［7］Ateeg PA，Bevilacqua G，Kopper L， et al．Evidence for a novel gene associated with a low tumor metastatic potential．J Natl Cancer Inst，1988，80：204．
收稿日期：1999-03-02
修稿日期：1999-05-17
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