血栓调节蛋白在胃癌组织中的表达
中华实验外科杂志 2000年第2期第17卷 临床研究
作者：明学志 尹浩然 朱正纲 薛建元 王瑞年 林言箴
单位：明学志 尹浩然 朱正纲 薛建元 林言箴(200025 上海第二医科大学附属瑞金医院外科)王瑞年(上海第二医科大学病理学教研室)
关键词： 血栓调节蛋白；胃癌；基因表达
【摘要】 目的 研究血栓调节蛋白(TM)在胃癌组织中的表达。方法 应用免疫组织化学ABC法对40例手术切除胃癌标本进行TM表达的研究。结果 18例肠型胃癌中，15例TM表达阳性(83.3%)，22例弥漫型胃癌中，11例TM表达阳性(50.0%)；60岁以上病人23例，其中19例TM表达阳性(82.6%)，60岁以下病人17例，其中7例TM表达阳性(41.2%)。肠型胃癌TM的表达明显高于弥漫型胃癌(P＜0.05)；60岁以上病人胃癌组织TM的表达显著高于60岁以下的病人(P＜0.05)。结论 肠型胃癌TM的表达显著高于弥漫型胃癌。
Expression of thrombomodulin in gastric carcinoma
MING Xuezhi, YIN Haoran, ZHU Zhenggang, et al.
(Department of Surgery, Ruijin Hospital, Shanghai Second Medical University, Shanghai 200025, China)
【Abstract】 Objective To study the expression of thrombomodulin (TM) in gastric carcinoma.Methods The expression of TM in 40 cases of gastric carcinoma was detected by means of immunohistochemical ABC.Results Among the 18 cases of gastric carcinoma of intestinal type, 15 were positive for TM (83.3%), 11 out of 22 cases of gastric carcinoma of diffuse type were positive for TM(50.0%), 19 of 23 gastric carcinoma patients over 60 years old were positive for TM (82.6%), 7 of 17 gastric carcinoma patients under 60 years old were positive for TM (41.2%), showing that the expression of TM in gastric carcinoma of intestinal type was significantly higher than that in gastric carcinoma of diffuse type, and that the expression of TM in gastric carcinoma patients over 60 years old was significantly higher than in those under 60 years old.Conclusion TM was overexpressed in gastric carcinoma of intestinal type as compared with that in gastric carcinoma of diffuse type.
【Key words】 Thrombomodulin; Gastric carcinoma; Gene expression 血栓调节蛋白(thrombomodulin, TM)是凝血酶的受体，已知其在人类多种正常组织中表达，亦可表达于许多肿瘤组织，但对其生理和病理学意义还知之甚少。TM在胃癌组织的表达研究至今少见报道，现将我们的研究结果报道如下。材料与方法
1.标本：我院1989～1992年间手术切除的胃癌标本40例。其中男27例，女13例；年龄32～81岁，平均年龄59.2岁。按TNM分期：Ⅰ期9例，Ⅱ期5例，Ⅲ期15例，Ⅳ期11例。根据Lauren分型：肠型胃癌18例，弥漫型胃癌22例；淋巴结转移阳性29例，阴性11例；有远处转移8例，无远处转移32例。全部病人术前均未接受化疗或放疗。标本常规中性甲醛固定，石蜡包埋，切片。
2.免疫组织化学染色：用鼠抗人TM单克隆抗体1∶50(Dako1009，Denmark)进行ABC免疫组织化学染色。方法简述如下：切片常规脱蜡、水化，体积分数为0.3%过氧化氢(H2O2)甲醇室温15min阻断内源性过氧化物酶，非免疫性动物正常血清室温20min，加稀释的一抗，不洗片，4℃冰箱过夜，阴性对照以PBS代替一抗，加生物素化二抗(1∶200 Vector,US)，37℃ 30min，加ABC复合物(1∶100 Vector, US)，37℃ 30min，3，3′-二氨基联苯胺(DAB)显色，苏木素复染，脱水，透明，封片。显色前各步骤后均以磷酸盐缓冲溶液(PBS液)(pH7.4)洗片。
3.结果判定：计算染色阳性细胞占全部肿瘤细胞的百分数(至少计数1000个肿瘤细胞)。按百分数分级如下：0：无细胞染色；+：少于5%肿瘤细胞染色；：5%～50%肿瘤细胞染色；：超过50%肿瘤细胞染色［2］。以0和+为阴性表达，和为阳性表达。
4.统计学处理：TM与各临床病理学指标间关系用χ2检验或校正χ2检验处理。
结 果
1.TM在胃癌组织中的表达：TM表达于肿瘤细胞浆和细胞膜，亦在脉管的内皮细胞膜表达。TM主要表达于分化较好的肿瘤细胞，而分化较差者表达较少，粘液细胞癌和粘液癌则呈弱或无表达。
2.TM的表达与各临床病理指标的关系：在各种临床病理指标中，只有Lauren分型和年龄因素与TM有统计学意义。18例肠型胃癌中，15例TM表达阳性(83.3%)；而22例弥漫型胃癌中，11例表达阳性(50.0%)，两型胃癌TM的表达差异有显著性(P＜0.05)。≥60岁年龄组23例中，19例TM表达阳性(82.6%)；60岁年龄组的17例中，仅7例表达阳性(41.2%)，两组差异有显著性(P＜0.05，表1)。
表1 胃癌组织中TM的表达与临床病理指标的关系
| 临床病理因素 |
例数 |
TM表达 |
P值 |
| 阳性(例) |
阴性(例) |
| 年龄 |
＜60 |
17 |
7 |
10 |
＜0.05 |
| ≥60 |
23 |
19 |
4 |
| 性别 |
男 |
27 |
17 |
10 |
＞0.05 |
| 女 |
13 |
9 |
4 |
| Lauren分型 |
肠型 |
18 |
15 |
3 |
＜0.05 |
| 弥漫型 |
22 |
11 |
11 |
| 淋巴结转移 |
阳性 |
29 |
21 |
8 |
＞0.05 |
| 阴性 |
11 |
5 |
6 |
| 远处转移 |
阳性 |
8 |
7 |
1 |
＞0.05 |
| 阴性 |
32 |
19 |
13 |
| 浸润深度 |
T1+T2 |
15 |
7 |
8 |
＞0.05 |
| T3+T4 |
25 |
19 |
6 |
| Borrmann分型 |
Ⅰ+Ⅱ |
15 |
8 |
7 |
＞0.05 |
| Ⅲ+Ⅳ |
25 |
18 |
7 |
| TNM分期 |
Ⅰ+Ⅱ |
14 |
6 |
8 |
＞0.05 |
| Ⅲ+Ⅳ |
26 |
20 |
6 |
讨 论 TM可能类似于钙粘蛋白，是具有凝集素样活性的新一类细胞粘附分子的成员［1］。食管癌细胞TM表达的丧失意味着更易于发生转移。肝癌组织TM表达研究发现，TM表达阳性肝癌病人的肝内转移、门静脉癌栓和肝包膜浸润的机会明显低于TM表达阴性者，且前者术前血浆TM水平明显高于后者，前者术后无复发，生存率显著高于后者。该研究者认为，TM抑制肝细胞癌的肝内转移归因于它的抗凝血效应引起的肿瘤细胞粘附于门静脉的抑制［2］。最近的研究表明，TM在体内外均有抗肿瘤作用，其作用机制与配体结合于TM凝集素区域的决定族从而激发依赖于细胞内区域的信号传导通路有关［3］。
我们的研究结果显示，TM在肠型胃癌的表达明显高于弥漫型胃癌；60岁以上病人胃癌组织TM的表达明显高于60岁以下的病人。我们的研究结果证实，TM可能是新一类细胞粘附分子。这是因为，胃癌Lauren分型的基础正是基于细胞粘附的病理生物学［4］。肠型胃癌细胞相互粘附，形成类似于肠粘膜的结构；而弥漫型胃癌缺乏粘附能力，更易于以单个细胞或巢状向胃壁浸润［4］。因此，表达TM的肠型胃癌具有较好的生物学行为，具有更好的预后。
参考文献
1，Imada S, Yamaguchi H, Nagumo M, et al. Identification of fetomodu-lin, a surface marker protein of fetal development, as thrombomodulin by gene cloning and functional assays. Dev Biol, 1990,140:113-122.
2，Suehiro T, Shimada M, Matsumata T, et al. Thrombomodulin inhibits intrahepatic spread in human hepatocellular carcinoma. Hepatology, 1995,21:1285-1290.
3，Zhang Y, Weiler-Guettler H, Chen J, et al. Thrombomodulin modulates growth of tumor cells independent of its anticoagulant activity. J Clin Invest, 1998,101:1301-1309.
4，Brenes F, Correa P. Pathology of gastric cancer. Surg Oncol Clin North Am, 1993,2:347-370.
(收稿日期：1999-02-20)
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