胃癌细胞对化疗药物和α-干扰素的敏感性试验

中国胃肠外科杂志 2000年第2期第3卷 论著

作者：齐柯　徐冰　南正银　陶霖玉

单位：齐柯 南正银 陶霖玉（518052　深圳，广东深圳南山区人民医院普通外科）；徐冰（深圳三九医药研究院）

　　关键词： 胃癌；化学治疗；α-干扰素；药物敏感性

　　【摘要】　目的　探讨人胃癌细胞株对不同化疗药物、α-干扰素及其相互配伍的敏感性。方法　向体外培养的人胃癌细胞(MGC80-3)中加入不同配伍及不同浓度的化疗药物和α-干扰素，作用一定时间后，采用MTT法检测癌细胞对不同配伍药物的敏感性。结果　联合用药较单一用药的相对抑制率明显增高，尤其以氟尿嘧啶、丝裂霉素和表阿霉素3药联合作用的抑制率最高；随药物剂量的增加，各组的抑制率有所增高，α-干扰素与化疗药物合用时，有协同抑制作用，尤其在先用α-干扰素24小时后， 再加用化疗药物，抑制率明显增高。结论　联合用药化疗疗效优于单一用药，加用α-干扰素具有协同抑制作用，尤以先用α-干扰素后，再联合用化疗药，疗效最佳。

Sensitivity testing of gastric cancer cells to antitumor drugs and interferon-alpha

QI Ke, XU Bing, NAN Zhengyin, et al

　　Department of Surgery, Nanshan Hospital, Guangdong Shenzhen 518052

　　【Abstract】　Objective　To investigate the sensitivity of human gastric cancer cell (MGC80-3) to antitumor drugs and interferon-alpha and to compatibility of medicines.Methods To human gastric cancer cells cultured in vitro was added with different compatibility and concentrations of antitumor drugs and interferon-alpha. After a certain time for reaction, MTT method was used to determine the antitumor sensitivity.Results　There was a higher inhibition rate in the regimens of the combined use of antitumor drugs than that of the drugs used alone. The combined use of 5-Fu, MMC and E-ADM showed the highest inhibition rate of the gastric cancer cells. With the increase of the drug dose, the inhibition rate was significantly increased. Interferon-alpha had a synergetic effect in combination with the antitumor drugs. In particular, after 24 hours of the use of interferon-alpha, antitumor drugs could significantly increase the inhibition rate.Conclusions The therapeutic effect of combined use of the antitumor drugs is superior to that of single antitumor drug. The interferon-alpha has a synergetic effect in the chemotherapy of gastric cancers and a better efficiency used 24 hours before the combined chemotherapy.

　　【Key words】　Gastric cancer　Chemotherapy　Interferon-alpha　Drug sensitivity

　　采用四唑蓝快速比色法(MTT法)^［1］检测人胃癌细胞株(MGC80-3)对临床常用化疗药物氟尿嘧啶(5-Fu)、丝裂霉素(MMC)、表-阿霉素(E-ADM)以及相互配伍的抗癌细胞敏感性，同时检测其与α-干扰素(α-IFN)在抗癌性方面的协同作用。

材料与方法

　　一. 材料

　　(一)细胞来源

　　MGC80-3由中山医科大学免疫学教研室赠送。

　　(二)化疗药物

　　5-Fu针剂(上海旭东海普药业有限公司)，MMC针剂(日本KYOWA公司)，E-ADM(Earmitalia Carlo Erba研究室合成)。上述3药均以无菌0.9%氯化钠溶液配制，-20℃冻存。不同化疗药物配伍分组：A组(5-Fu加MMC)，B组(5-Fu加E-ADM)，C组(5-Fu加MMC加E-ADM)。不同剂量组实验药物浓度见表1。

　　表1　不同剂量组实验药物浓度(mg/L)

　　注：剂量单位为IU/mL

　　(三)α-IFN

　　干扰能(Intron A)注射剂为美国先灵葆雅公司产品，以无菌0.9%氯化钠溶液配制成10、50、100、500 IU/mL 4种不同浓度，-20℃冻存。

　　(四)试剂仪器

　　RPMI-1640培养粉(Gibco BRL公司)，胎牛血清(FBS) (杭州四季青公司)， 二甲亚砜(DMSO) (Sigma公司)，MTT试剂(Sigma公司)，∑960酶标仪。

　　二. 方法

　　(一)MTT法^［1-3］

　　MGC80-3细胞用含20%FBS的RPMI-1640培养液传代培养，将细胞制成1×10⁵/mL细胞悬液，并接种于96孔培养板，每孔100 μL，置CO₂培养箱培养12小时。分别按下述3种方式以20 μL孔加药，每孔设3个复孔：(1)加入不同配伍及浓度的化疗药，或者不同浓度的α-IFN及其与不同化疗药的配伍，培养24小时后，更换新鲜培养液，每孔100 μL，培养48小时；(2)先加入不同配伍及浓度的化疗药，培养24小时后，加入不同浓度的α-IFN，继续培养24小时，更换新鲜培养液，每孔100 μL，培养24小时；(3)先加入不同浓度的α-IFN，培养24小时后，再加不同配伍及浓度的化疗药，然后同方法(2)。最后，每孔均加入MTT(20 μL/孔，5 mg/mL)，再培养4小时，弃去上清液，加入DMSO，每孔100 μL，振摇20分钟，使甲瓒化合物彻底溶解后，在∑960酶标仪上测A值(λ=570 nm)。

　　(二)计算及判别标准

　　≥50%为敏感；30%～50%为中度敏感；＜30%为不敏感。

　　(三)统计学处理　所得数据以均数表示，结果采用t检验进行判断。

结　　果

　　一. 不同化疗药物和不同剂量及药物配伍对胃癌细胞相对抑制率的比较

　　如表2所示。随药物剂量增加，各组相对抑制率有所增高。不同配伍给药时，同一剂量下的相对抑制率明显增大(P＜0.05)。α-IFN单一作用时，对胃癌细胞MGC80-3的抑制作用不明显，本实验中最大相对抑制率仅为28.02%。

　　二. α-IFN对化疗药的协同抑制作用的观察

　　如表3所示。当α-IFN与化疗药物使用时，与单用化疗药物的各配伍组相比较，其相对抑制率有不同程度的增加，尤其是α-IFN先用24小时的各组相对抑制率增加更明显(P＜0.01)。

表2　不同化疗药物及其配伍对胃癌MGC80-3细胞的相对抑制率(，%，n=9)

　　表3　α-IFN不同时间加入化疗药物对胃癌细胞抑制作用的影响(，%，n=9)

　　讨　　论

　　目前，化疗仍是肿瘤治疗中的一项重要手段，特别对不能手术切除的肿瘤更有意义。近年国内外均有学者采用体外测定肿瘤细胞对化疗药物敏感性的方法，以期制定最佳化疗方案，提高化疗疗效^［2，3］。有研究表明，许多不同种类的化学药物对不同种类的敏感肿瘤细胞有促凋亡作用^［4，5］，因此证明配伍用药可提高化疗疗效。我们对不同化疗药物、不同配伍对胃癌细胞的影响以及α-IFN对化疗药物的抗癌协同作用进行了初步的观察，结果提示不同配伍化疗药物的应用对胃癌细胞的相对抑制率有不同程度的增高，以5-Fu为基本的三联用药(5-Fu加MMC加E-ADM)在同一剂量时的抑制率明显高于任何单一用药的抑制率(P＜0.05)，可达到中等敏感。随着药物剂量的增加，相对抑制率也逐渐增高，但血药浓度的增加无疑会加大药物的毒副作用。

　　随着对干扰素研究的深入，发现其不仅具有抗病毒和免疫调节作用，还直接抑制肿瘤细胞增殖，有促进分化、增加表面MHC抗原和肿瘤坏死因子表达的作用，并与5-Fu、ADM、MMC及PPD等化疗药物间均有生化调节作用，可影响多种抗肿瘤药物的活化、降解和清除，且与化疗药物使用时，不良反应较少重叠^［6，7］。本实验结果证明α-IFN对化疗药物的作用有协同、促进作用，无论是单一用药还是配伍用药，在加入α-IFN后，其抑制率均有不同程度的提高，尤其在中、高剂量组，抑制率有明显升高(P＜0.01)。α-IFN加入的时间不同，其协同作用的程度亦不一样，当先加入α-IFN培养24小时后，再加化疗药，其协同抑制作用最大。因此我们认为，在临床应用中，最好先用α-IFN一段时间，再联合应用化疗药物，可有效提高化疗药物疗效；在达到相同疗效的同时，可大大减少化疗药物的剂量，以减轻其毒副作用。

　　自Mosmann^［1］首次报道用MTT法检测抗癌药物对肿瘤细胞杀伤效应以来，经过不断改进，MTT法的敏感性也不断提高，同时该检测方法具有操作简便，周期短，重复性好，成本低，又无放射性污染等特点，较易在临床上应用。因此，在可能的条件下，应对手术切除的癌组织细胞进行化疗药物敏感测定，根据测定结果制定个体化治疗方案，从而提高疗效。

参考文献

　　1，Mosmann T. Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxicity assays. J Immunol Methods 1983;65:55-63.

　　2，Yamaue H, Tanimura H, Nakamori M, et al. Clinical evaluation of chemosensitivity testing for patients with colorectal cancer using MTT assay. Dis Colon Rectum 1996; 39:416-422.

　　3，Xu JM, Song ST, Tang ZM, et al. Evaluation of in vitro chemosensitivity of antitumor drugs using the MTT assay in fresh human breast cancer. Breast Cancer Res Treat 1998;49:251-259.

　　4，Thompson CB. Apoptosis in the pathogenesis and treatment of diseases. Science 1995;259:762-763.

　　5，Dive C, Hickman JA. Drug-target interaction only the first step in the commitment to a programmed cell death. Br J Cancer 1991;64:192-196.

　　6，Ajani JA, Mansfield PE, Dumas P, et al. All chemotherapy preoperatively with cisplatin, 5-Fu and Intron in patients with potentially resectable gastric carcinoma. Proc Assoc Am Physicians 1996;15:208.

　　7，Kupeli S, Beksac M, Kupeli B, et al. Determination of in vitro drug sensitivity to a panel of cystostatic drugs and interferon alpha-2b in patients with renal cell carcinoma. Int Urol Nephrol 1997;29:421-426.

收稿：1999-07-24

　　修回：1999-12-29