TNP-470和丝裂霉素联用对肝癌生长和转移抑制作用的实验研究

癌症 2000年第4期第19卷 快速报道

作者：夏景林　杨秉辉　叶胜龙　林芷英

单位：夏景林　杨秉辉　叶胜龙　林芷英（上海医科大学中山医院肝癌研究所，上海　200032）

关键词：血管生成抑制剂；TNP-470；丝裂霉素；肝细胞癌

　　【摘要】目的：为了验证O-(氯乙酰-氨甲酰基)烟曲霉醇(TNP-470)和丝裂霉素(MMC)联用的增效作用。方法：将40只荷有高转移肝癌的裸鼠随机分成4个组：①对照组；②TNP-470组（30mg/kg，qod×8次）；③MMC组(2mg/kg，biw×6次）；④联合用药组(TNP-47030mg/kg，qod×8次＋MMC2mg/kg，biw×6次）。结果：4个组瘤重分别为2.00±0.25，0.83±0.40，0.92±0.25，0.56±0.27克。统计学分析表明：在瘤重方面，TNP-470组、MMC组和对照组比较差异具有显著性(P＜0.05)，联合用药组和其他3组比较均有显著性差异(P＜0.05)。各组肺转移率分别为50％（5/10），10％（1/10），0％（0/10），0％（0/10）。治疗各组裸鼠活动良好，无明显体重减轻。结论：TNP-470、MMC对肝癌的生长和转移都有明显的抑制作用；TNP-470和MMC联用能起增效作用；MMC并未加重TNP-470引起的体重减轻等毒副作用。

　　中图分类号：R735.705　文献标识码：A　文章编号：1000－467X(2000)04－0341－03

An experimental study of the inhibitory effect of the combination of TNP- 470 and MMC on the growth and metastasis of human hepatocellular carcinoma

XIA Jing- lin　YANG Bing- hui　YE Sheng- long　et al.

　　（Liver Cancer Institute， Zhongshan Hospital， Shanghai Medical University，Shanghai 200032， P.R. China）

　　【Abstract】 Objective： To determine whether O- (Chloroacetyl- carbamoyl)- fumagillol(TNP- 470) could potentiate the anti- tumor effect of mitomycin (MMC). Methods： Forty nude mice bearing high metastatic HCC were randomized into 4 groups： ① control; ② TNP- 470 (30 mg/kg， qod， 8 times); ③ MMC (2 mg/kg， biw， 6 times);④ TNP- 470(30 mg/kg， qod， 8 times)＋ MMC (2 mg/kg， biw， 6 times). Results： The everage tumor weights of the 4 groups were 2.00± 0.25， 0.83± 0.40， 0.92± 0.25， and 0.56± 0.27 (g)， respectively.The differences in the tumor weight between the control and TNP- 470 treated group as well as the control and the MMC treated group were both significant (P＜0.05). The tumor weight of the combination group was significantly different from that of the other 3 groups (P＜ 0.05).The lung metastasis rate of the 4 groups were 50％ (5/10)， 10％ (1/10)， 0％ (0/10)， and 0％ (0/10)， respectively. The mice of each group showed no evident weight loss and no abnormal activity. Conclusions： These results suggested that the combination of TNP- 470 and MMC might produce additive effect. The toxic of TNP- 470 was not affected by adding MMC.

　　Key words

　　Key words： Angiogenesis inhibitor; TNP- 470; Mitomycine; Hepatocellular carcinoma

　　实体瘤由肿瘤细胞和非肿瘤正常细胞两部分组成，这些正常细胞构成肿瘤的间质。肿瘤间质包括：结缔组织（纤维母细胞）、血管（血管内皮细胞）、炎症细胞（巨噬细胞、淋巴细胞）。在某些肿瘤中间质占肿瘤的90％以上^[1]。肿瘤细胞通过细胞间信号系统，调节周围正常细胞（如：血管内皮细胞）的增殖。血管内皮细胞的增殖是肿瘤生长甚至生存的重要环节。肿瘤细胞产生的细胞间信号因子不仅能影响邻近肿瘤区域的正常宿主细胞，而且能影响远离肿瘤组织的某些细胞的功能。因而从理论上讲，肿瘤治疗的方案最好包括以下两个方面：①针对肿瘤细胞的细胞毒药物；②针对那些在肿瘤生长中起关键作用的正常细胞（如：血管内皮细胞），抑制它们的增殖或杀伤这些细胞。

　　化疗和抗血管生成药物的联合应用正是符合这一设想。已有动物实验表明：细胞毒药物和抗血管生成药联用起增效作用^[2，3]。在血管生成抑制剂中最有希望的是TNP-470。我们在动物实验中已经发现：单用TNP-470能抑制裸鼠人肝癌的生长和转移^[4]。本实验利用裸鼠荷人肝癌动物模型，研究TNP-470和丝裂霉素（MMC）联用是否能起增效作用。

　　1　材料和方法

　　1.1材料

　　雌性BALB/c裸鼠，4周龄，体重17.3～23.4g，由中科院上海药物研究所提供。本所建立的高转移人肝癌动物模型（LCI-D20）。O-(氯乙酰-氨甲酰基)烟曲霉素醇(TNP-470)由日本武田Takeda公司提供。MMC（日本协和发酵KyowaHakkoKogyo公司生产)。

　　1．2方法

　　用皮下种植传代的高转移人肝癌裸鼠模型。当皮下肿瘤处于指数生长期时（约接种第20天），将皮下肿瘤切成2～3mm³小块，接种于40只裸鼠右腋皮下。各组间裸鼠体重无显著性差异。

　　接种第二天起，将裸鼠随机分成4组，每组10只，各组用药情况如下：①对照组：给相应溶剂（各组注射剂量均为0.2ml^．鼠－1^．次－1）。②TNP-470组：30mg/kg，SC，qod，共8次。③MMC组：2mg/kg，biw，IP，共6次。④联合用药组：TNP-47030mg/kg，qod，共8次＋MMC2mg/kg，biw，共6次。

　　接种后第26天终止实验，测定鼠重、瘤重、AFP值，并进行肺转移结节计数。

　　统计学处理：各组间鼠重、瘤重、AFP值用Student-Newman-Keuls检验进行多重均数间的比较，按下列公式计算抑瘤率及q值：

抑瘤率=1－(E_T/E_C）×100％

　　（E_C为对照组平均瘤重，E_T为治疗组平均瘤重）

　　(E_A，E_B，E_(A＋B)分别为TNP-470组、MMC组及联合组抑瘤率）

　　根据q值来判断联合用药的疗效，若＜0.85为拮抗；0.85～1.15为相加；＞1.15为协同。

表1　各组平均瘤重和AFP值(±s)

表2　各组治疗前后裸鼠体重的变化(g,±s）

注：各组之间差异均无显著性（均P＞0.05）。

　　2　结果

　　2.1各组平均瘤重和AFP值的比较

　　从平均瘤重来看，用药各组瘤重明显低于对照组(P＜0.05)，联合用药组瘤重也明显低于单用TNP-470、MMC组(P＜0.05)。q值为0.89说明TNP-470和MMC联用能起相加作用，AFP也反映了类似结果（表1）。SNKGrouping栏中两组字母不同表示两组之间有统计学差异，两组字母相同表示两组之间无差异。

　　2．2各组肺转移结节的比较

　　对照组中肺转移的发生率为50％（5/10），明显高于TNP-470组的10％(1/10），MMC组和联合用药组均未见肺转移。

　　2．3各组副作用的观察

　　整个治疗过程中，各组裸鼠活动良好，治疗前后各组裸鼠体重无明显下降。表2显示了各组治疗前后裸鼠体重的变化，经统计学分析，各组之间差异均无显著性（均P＞0.05）。

　　3　讨论

　　本实验结果显示了单用TNP-470或MMC都能明显地抑制肝癌的生长，表现在瘤重和AFP两个方面，两者对肝癌肺转移的抑制作用也十分明显。对照组肺转移率为50％（5/10），TNP-470组为10％（1/10），MMC组及联合用药组均未见肺转移（0/10）。

　　MMC是常用的化疗药，本实验结果表明，MMC确有较好的抗肝癌作用，它是一种周期非特异性药，它的作用机理主要是和DNA双链交叉联结，抑制DNA的复制，并使部分DNA断裂。

　　TNP-470的抗瘤作用已较为明确，它主要依靠抗血管生成来发挥抗肿瘤作用。

　　本实验结果表明：TNP-470和MMC联合应用能起相加作用。联合用药组的瘤重为0.56±0.27g，它们和单用TNP-470、MMC组(瘤重分别为0.83±0.40，0.92±0.25g)比差异均具有显著性（均P＜0.05）。计算q值为0.89，表明TNP-470和MMC联用起相加作用。化疗药和血管生成抑制剂联用起增效作用在文献中也有报道，Yamaoka报道了TNP-470和顺铂联用能增强对前列腺癌的抑制作用^[5]，Teicher报道了TNP-470和CTX联用能增强对纤维肉瘤的疗效^[6]。

　　合理的联合用药不仅要求增加疗效，而且要求不增加毒副作用。本实验的整个过程中，联合用药组裸鼠活动情况良好，MMC和TNP-470联用未加剧TNP-470引起的体重减轻，这和文献报道相符^[2，3]。

　　化疗药和抗血管生成药联用起增效作用的机理可能为：①由于血管生成的抑制造成远离已生成血管的肿瘤细胞的死亡，从而缩小了肿瘤体积，这就使化疗药更易于到达整个肿瘤组织；②化疗药直接杀伤或抑制肿瘤细胞的同时，也使得肿瘤细胞（或肿瘤相关细胞）产生的血管生成因子减少^[7～9]。

　　联合治疗的方案多种多样，有两种血管生成抑制剂的联用，有两种血管生成抑制剂加一种化疗药等。但联合用药尚有许多问题有待探索，如：联合用药的方案、合理的剂量和给药时间及增效作用的机理等。

　　致谢：日本武田Takeda制药公司及Toguchi博士提供TNP-470。

　　通讯作者：夏景林　Tel:86－21－64041990－2927　Fax:86－21－64037181

　　[参考文献]

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　　［4］Xia JL， Yang BH， Tang ZY， et al. Inhibitory effect of the angiogenesis inhibitor TNP- 470 on tumor growth and metastasis in nude mice bearing human hepatocellular carcinoma [J].J Cancer Res Clin Oncol， 1997， 123： 383～ 387.

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收稿日期：1999－07－06

　　修回日期：1999－07－26