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肝癌患者PBMC的TNFR表达及治疗的影响

肝癌患者PBMC的TNFR表达及治疗的影响

世界华消化杂志 1999年第7期第7卷 研究快报

作者:白 岚 王倩荣 邹衍泰 牛杰志 张万岱 袁爱力

单位:白 岚  张万岱 袁爱力  第一军医大学南方医院全军消化疾病研究所 广东省广州市 510515; 王倩荣  河南中医学院基础部 河南省郑州市 450000; 邹衍泰  南方医院肝胆外科 广东省广州市 510515; 牛杰志  广州空军医院肿瘤科 广东省广州市 510228

关键词:肿瘤坏死因子受体;肝肿瘤;外周血单个核细胞;流式细胞仪技术

  中国图书馆分类号 R735.7

  Subject headings TNFR primary hepatocellular carcinoma flow cytometry PBMC

  1 材料和方法

  1.1 材料 30例正常对照为广州市中心血站自愿献血员,男28例,女2例,年龄40岁±11岁;31例本院住院肝癌患者,男28例,女3例,年龄为50岁±12岁,根据临床,实验室,影像学及病理诊断,其中29例为乙肝病毒感染阳性,入院后据病情选择肝动脉插管栓塞并化疗(TAE)或LAK细胞109加IL-2 20万U/d×6(生物治疗).

  1.2 方法 取受试者外周静脉血5mL肝素抗凝,用淋巴细胞分离液常规分离,获PBMC用D-Hank's液洗两遍,将细胞浓度调至1×106个/mL. 取单细胞悬液0.5mL加入单抗Htr 20或Utr4 0.5μg,4℃,1h,用Hank's洗3遍,再加入荧光标记的二抗1∶100 50μL,4℃,30min,洗后固定,流式细胞仪分析检测和用S-P一步法检测PBMC的TNFR Ⅰ,TNFRⅡ表达.

  2 结果

  2.1 健康PBMC的TNFR表达 用流式细胞仪技术及S-P一步染色法检测正常成PBMC的TNFRⅠ表达阳性百分率分别为38.5%±8.5%,39.6%±7.6%,而TNFR Ⅱ分别为44.9%±9.1%,46.4%±8.0%,两种方法检测结果无显著差异(P>0.05.)

  2.2 肝癌患者PMBC的表达 肝癌患者PBMC的TNFRⅠ和TNFRⅡ表达率分别为28.4%±9.1%,37.5%±9.5%,均显著低于正常对照(P<0.001).

  2.3 治疗对肝癌患者TNFR表达的影响 12例肝癌患者用LAK 109加IL-2 20万 U/d×6,其PBMC的TNFRⅠ阳性率明显升高达42.9%±9.0%(P<0.001),TNFRⅡ表达略有升高,尚无统计学意义(P>0.05);肝癌患者行TAE治疗(丝裂霉素10mg,卡铂200mg,表阿霉素20mg,碘油15mL)1wk,3wk后其PBMC的TNFRⅠ,TNFRⅡ表达率与治疗前无明显差异.

  3 讨论

  众所周知,肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor,TNF)是一种在体内具有多种重要生物活性的细胞因子,其体内作用的发挥有赖于细胞膜TNFR的介导. 血循环中的TNF水平及其活性检测已广泛用于多种疾病的免疫状态评估,而对PBMC的TNFR表达的检测尚不多[1]. 我们同时用两种方法测定了30例健康PBMC的TNFRⅠ和TNFRⅡ阳性表达率,结果可靠稳定,使其有望成为新的临床免疫指标之一.

  肝癌患者的免疫异常已为大家公认,我们以往的研究已显示肝癌患者血清中的sTNFRⅠ,sTNFRⅡ均显著高于正常,并且化疗,LAK可使sTNFRⅠ水平又明显高于治疗前. 关于血中升高sTNFR的来源尚不明确,既可源于多量外周血PBMC的TNFR高表达和释放,也可来源于肝脏或其他器官内的TNFR表达阳性细胞. 本文结果显示肝癌患者PBMC的TNFRⅠ,和TNFRⅡ表达不仅不高,反而显著低于正常对照,这一方面显示肝癌患者的异常免疫状态; 另一方面也提示肝癌患者血中高水平sTNFR并非来源于外周血PBMC的高表达率(但还没证实单个淋巴细胞的受体表达数量),而可能来源于肝内的肝癌细胞或激活的免疫细胞;同时也说明了TNFR分布及sTNFR来源的复杂性. LAK细胞加IL-2可使PBMC TNFRⅠ表达增高,并释放多量sTNFR[2,3],肝动脉化疗不能使PBMC表达TNFR增多,却有可能使肝内的免疫活性细胞或肝癌细胞表达TNFR增多,释放多量sTNFR入血,其直接证据正待于我们进一步的研究探讨.

  本课题受广东省自然科学基金资助,No.940312

  通讯作者 白岚

  4 参考文献

  1 刘小菁. 可溶性TNF受体及膜TNF受体检测方法的初步应用. 上海免疫学杂志,1995;3:160

  2 Cope AP, Aderka D, Wallach D, Kahan M, Chu NR, Brennan FM, Feldmann M. Soluble TNF receptor production by activated T lymphocytes: differential effects of acute and chronic exposure to TNF. Immunology, 1995;84:21

  3 Yasuhito Abe, Kuniyoshi Y amauchi, Shigeru Kimura. 75-but 55-kDa tumor necrosis factor receptor is active in the homotypic aggregation and proliferation of human lymphokine-activated T killer(T-LAK) cells in vitro. J. Leukocyte Biology, 1995;57:462

收稿日期 1999-01-20 修回日期 1999-04-19


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