庚型肝炎病毒在肝炎及肝癌患者中感染情况

中华流行病学杂志 1998年第6期第19卷 论　　著

作者：窦亚玲¹　芮静安¹　李正谦²　徐素芬¹　焦　平¹王少斌¹　马秋燕¹　李保护¹　温凤仪¹　徐道振²

单位：1　北京邮电总医院　北京医科大学第八临床医学院 100032; 2　北京地坛医院

　　关键词: 庚型肝炎；原发性肝癌；RT-PCR法

　　摘要　为研究庚型肝炎病毒在乙型肝炎、丙型肝炎、非甲—戊型肝炎及原发肝癌患者中的感染情况，选择临床肝炎患者血清及肝癌手术病人的术前血清、肝癌组织及癌旁组织。采用HGV-RT-PCR法检测标本中HGV RNA。结果，在临床乙型肝炎、丙型肝炎、非甲—戊型肝炎及肝癌手术病人中庚型肝炎感染率分别为9%(12/130)、10%(3/30)、17%(4/24)、0%(0/24)。证明庚型肝炎是普遍存在的一种肝炎病毒，并与乙型肝炎、丙型肝炎有较高的重叠感染率，而与肝癌的相关性不大。

　　Infection of GBV-C Virus Among Hepatitis and HCC Patients Dou yaling^*, Rui Jingan, Li Zhengqian, et al.^*Telecommunications General Hospital. The 8th Medical Clinic College, Beijing Medical University,100032

　　Abstract　To study the infection status of GBV-C virus among hBV,HCV,nonA-E and HCC patients, serum of clinical hepatitis patients and HCC patients before operation, and the composition in/beside HCC were collected to examine HGV RNA of the samples, using HGV RT-PCR method. Results showed that among the clinical patients with hBV,HCV, nonA-E and HCC, HGV infection rates were 9%(12/130),10%(3/30),17%(4/24),0%(0/24) respectively, suggesting that HGV is a hepatitis virus with pervasive existence and has high superimposition infection rate with HBV and HCV but with little connection with hCC.

　　Key words　Hepatitis G　Primary hepatocellular carcinoma　RT-PCR

　　HGV是一种与人类肝炎相关的正链RNA病毒。自从Simons及Linnen相继报道了GBV-C、HGV的基因序列后，世界各地对此病毒的感染进行了广泛的研究。但由于各研究者所采取的研究方法、病例选取及研究地域不同，所得出的结论也有较大的差异。本研究选取了184例临床诊断病毒性肝炎患者血清及24例原发肝癌手术病人术前血清及癌组织、癌旁组织，着重研究了HGV RNA在临床肝炎及肝癌患者中的感染情况。

材料及方法

　　一、病例选择：慢性肝炎患者选择北京地坛医院和邮电总医院的住院及门诊病人。肝癌病人选自邮电总医院肝外科手术病人。

　　HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb、HBcAb-IgM采用美国Abbott公司ELISA试剂盒，抗HCV采用第三代美国Abbott公司ELISA试剂盒。

　　二、肝组织处理：手术切除的癌组织和癌旁组织，直接放入液氮罐中储存，分离好的血清于－40℃冰柜中存放。

　　取10～30mg液氮冻存的肝癌组织及癌旁组织至研磨器中，加入5倍体积硫氰酸胍缓冲液(含4mmol/L硫氰酸胍；0.1mmol/L Triscl(pH7.5)；1%β-巯基乙醇研磨至裂解液不再粘稠，移入1.5ml离心管中。

　　加入十二烷基肌氨酸钠至终浓度为0.5%充分混匀12 000rpm离心10min，上清液移入新的1.5ml离心管中。

　　用酚及酚氯仿提取一次，异丙醇沉淀，75%乙醇洗沉淀一次后室温凉干。然后同血清一样进行RT-PCR扩增。

　　三、引物设计及RT-PCR扩增条件：AMV逆转录酶及Taq酶均为Promega公司产品。引物设计参考已发表的HGV序列(GenBanKV44402)，选择NS5区的高保守区段，计算机辅助设计，由赛百盛公司合成，扩增产物为200bp。

　　HGV RNA提取参照文献^［1］的方法，提取后的RNA直接溶于反转录-扩增缓冲液中，加入3μAMV逆转录酶及1U Taq DNA聚合酶，42℃ 30min逆转录成。DNA，94℃ 4min灭活AMV后直接进入第一次PCR扩增，扩增条件为：94℃30s，55℃30s，72℃30s。扩增32个循环后取第一次PCR扩增产物2μl进行第二次PCR扩增，最终PCR产物经2%琼脂糖凝胶电泳分析。

结　　果

　　HGV RNA阳性检出率：乙肝为9%(12/130)、丙肝为10%(3/30)、非甲-戊型肝炎为17%(4/24)。24例肝癌患者术前血清及癌组织、癌周组织为0%(0/24)。

讨　　论

　　庚型肝炎病毒是1995年下半年Simons JN^［2］和Lecrry TP^［3］两家实验室相继报告的一种新型与人类肝炎相关的RNA病毒基因。美国Lecrry TP^［4］等报告，HGV阳性率在慢性肝炎中7.9%，爆发性肝炎中9.1%，非甲-戊型急性肝炎中8.7%，肝细胞癌中3.4%。Linnen J等^［5］研究表明，HGV的感染分布较广泛，乙肝中HGV阳性率为9.72%，丙肝阳性率为18.75%，HGV不但与HBV和HCV重叠感染，同时在非甲-戊型肝炎及多次输血者，自身免疫性肝炎及血友病，酒精性肝炎患者血清中也可检出HGV RNA。在我国HGV与HBV、HCV重叠感染及在非甲-戊型肝炎中的感染率各家报告不一。关于HGV与肝癌组织及癌旁组织之间的相关性尚无满意报道。本实验HGV检出率乙肝为9%(12/130)，丙肝为10%(3/30)。非甲-戊型肝炎17%(4/24)；24例原发性肝癌病人术前血清及癌组织、癌旁组织HGV RNA(－)。说明庚型肝炎病毒是普遍存在的一种肝炎病毒常与乙肝、丙肝重叠感染，这可能HGV 与HBV、HCV传播途径相似有关，是非甲-戊型肝炎中病源之一。本实验显示HCV、非甲-戊型肝炎中HGV RNA检出率与上述报告^［4～5］有差异，可能与感染人群的选择，地域差别及所取的例数有关。24例原发性肝癌病人HGV感染率为0%，提示HGV与肝细胞癌相关性不大，可能在肝细胞癌中不是重要的致癌因子。本实验也显示原发性肝癌病人中19/24例HBsAg(＋)，2/24例抗HCV(＋)。说明在我国肝癌仍主要与乙肝、丙肝病毒感染有关，其中乙肝更为重要。

参　考　文　献

　　1　Chomezynskip,succhin single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction Anal biochem,1987,162∶156.

　　2　Simons JN,Lecrry TP,Darrson GJ,et al. Isolution of novel Virms-like sequences associated with human hepatitis. Nuture Medicine, 1995,1∶564.

　　3　Lecrry TP,Muerhoff AS, Simons JN, et al. Sequence and genomic organization of GBV-C A novel member of the flaviviridne associated with human nonA-E hepatitis. J Ned Virol,1996,48∶60.

　　4　Lecrry TP, Muerhoff As, Simons JN,et al. Molecular diagnostic assays for the detection of GB virus infection. J Ned Virol,1996,48∶23.

　　5　Linnen J, Wages J, Zhong-Keck ZY, et al. Molecular cloning and disense association of hepatitis G virns:atransfusion transmissible agent.Science,1996,271∶505.

(收稿：1998-07-15)