CD54和HLA-ABC在肝癌、肝硬化组织中的表达
细胞与分子免疫学杂志 1999年第2期第15卷 论著
作者：翟守恒 刘俊彬 朱平 王彦宏 张世华
单位：第四军医大学西京医院临床免疫科，西安710032
关键词：CD54；HLA-ABC抗原；肝肿瘤；肝硬化；免疫组织化学
摘要：目的：研究CD54及HLA-ABC在肝细胞肝癌(HCC)及肝硬化(LC)组织中的表达、定位及其意义。方法：以免疫组化APA法，检测CD54和HLA-ABC在HCC及LC组织中的表达和定位。结果：CD54在HCC组织中的阳性率为77.1％(37/48)，且以膜表达为主，呈蜂窝样排列；在LC组织中的阳性率为40.0％(12/30)，以核表达为主。HLA-ABC在HCC组织中的阳性率为30.0％(12/40)，在LC组织中的阳性率为63.3％(19/30)。x2检验，HCC组织中CD54的表达高于LC，两者相差显著(p＜0.05),Power=0.92。HCC组织中HLA-ABC的表达低于LC,两者相关显著(P＜0.05),Power=0.80。结论:CD54在HCC组织中的高度表达并不能引起有效抗肿瘤免疫应答,原因之一可能是HLA-ABC在HCC组织中的表达率降低所致。
中国图书资料分类号：392.11
Expression of CD54 and HLA-ABC on
hepatocellular carcinoma and liver cirrhosis
Zhai Shouheng, Liu Junbin, Zhu Ping, Wang Yanhong, Zhang Shihua.
(Department of Clinical Immunology, Xijing Hospital, Fourth Military Medical University, Xi'an 710032)
Keywords：CD54 HLA-ABC antigen liver neoplasm liver cirrhosis immunohistochemistry
Abstract：Aim: To study the expression, distribution and significance of CD54 and HLA-ABC in liver cirrhosis(LC) and hepatocellular carcinoma(HCC) tissues.Methods: CD54 and HLA-ABC were detected in HCC and LC tissues by immunohistochemical methods.Results: The positive rate of CD54 in human HCC tissues was 77.1％ (37/48). In most cases(25/48) it was expressed on the HCC cell surface with honeycomb-like appearance. In LC tissues, the positive rate of staining against CD54 was 40.0％ (12/30) with the majority showing nuclear staining. The positive rate of HLA-ABC was 30.0％ (12/40) in HCC tissues, but in LC tissues, it was 63.3％ (19/30).Statistical analysis suggested that the expression of CD54 was significantly higher in HCC tissues than that in LC tissues (P＜0.05, Power=0.92). HLA-ABC expression was significantly lower in HCC tissues than that in LC tissues (P＜0.05, Power=0.80). Conclusion: In HCC tissues, the higher expression of CD54 could not evoke effective anti-tumor immune response, one of its reasons may be the lower expression of HLA-ABC.
T细胞介导的细胞免疫应答，在实质器官肿瘤的抗肿瘤免疫应答中起着重要的作用[1]。肝癌细胞表达的MHC-ABC和CD54，能够提供使静止的CD4＋和CD8＋T细胞活化所需要的辅助信号，参与抗肿瘤的免疫应答。CD54在介导肝癌细胞的共刺激作用中也起着一定的作用[2]。本文中我们以抗CD54抗原的单克隆抗体(mAb)，采用免疫组织化学技术，检测了48例肝细胞肝癌（HCC）和30例肝硬化（LC）组织上的相关抗原，并对其表达、定位和分布作了分析，结合对HLA-ABC抗原的检测分析，探讨了其在抗肝癌免疫应答或肝癌细胞免疫逃避中的作用和意义。
1 材料和方法
1.1 标本 48例HCC为1994年～1997年外科手术切除标本。30例LC均为1996年～1997年LC并发上消化道出血病例手术活检标本。所有标本均来自西京医院并经病理学检查证实。经福尔马林固定、脱水后，常规石蜡包埋，制备5μm厚连续切片备用。
1.2 主要试剂 抗CD54分子的鼠抗人mAb(IgG1)及APA免疫组织化染色试剂盒，购自武汉博士德公司。其中抗CD54mAb为美国Zymed实验室的产品。抗HLA-ABC鼠抗人mAb，由本校免疫学教研室提供。
1.3 免疫组化染色 将HCC和LC活检标本的石蜡切片常规脱蜡至水后，PBS振洗，按博士德APA免疫组化试剂盒说明书进行染色(所用抗CD54mAb为1∶100稀释，抗HLA-ABCmAb为1∶200稀释)，DAB显色、苏木精复染，脱水透明后封片，光镜观察，x2检验。对照试验；阳性对照取2例慢性活动性乙型病毒性肝炎组织；阴性对照取2例外伤性肝破裂正常肝组织，并以1％小牛血清PBS液替代一抗作为空白对照。
2 结果
2.1 CD54抗原在HCC和LC上的检出率及分布 在HCC组织中，CD54以膜表达为主，呈蜂窝状排列、弥漫分布。其特征是：有以癌巢分布的趋势，癌巢周边区较为明显，周围无明显的炎细胞浸润(图1)。在高分化和大片坏死后残存的HCC细胞上表达呈阴性，癌周围组织仅在炎细胞浸润明显处有少数细胞呈阳性表达。在LC组织中，CD54以核阳性为主，表达强度低于HCC，弥漫分布，无典型的蜂窝样排列，膜、浆阳性细胞周围，常伴有炎细胞浸润。部分血窦内皮细胞和枯夫氏细胞亦有阳性表达(图2)。CD54在HCC组织中的阳性率高于LC,两者相差显著(P＜0.05),Power=0.92(表1)。
图1 CD54在HCC细胞膜上的表达
Fig1 Positive reaction staining of CD54 on cell membrane of
HCC cells (APA staining× 400)
图2 CD54在LC血窦内皮细胞和枯夫氏细胞上的表达
Fig2 Positive reaction staining of CD54 on the sinusoidal endoth-
elial cells and Kupffer cells of LC tissues (APA staining× 100)
表1 CD54在HCC及LC组织中的免疫组化染色
Tab1 Immunohistochemical examination of CD54 in HCC and LC tissues
| Group |
n |
Positive number(percentage) |
| Nuclei |
Cytoplasm |
Membrane |
Total |
| LC |
30 |
7(23.3％) |
1(3.3％) |
4(13.3％) |
12(40.0％) |
| HCC |
48 |
4(8.3％) |
8(16.7％) |
25(52.1％) |
37(77.1％) |
2.2 HLA-ABC抗原在HCC和LC组织中的检出率及分布 HLA-ABC在HCC组织中，以胞浆表达较为多见，多为全胞浆或以核周围表达较为明显。胞浆、胞膜的表达多分布于坏死组织周围或癌巢周边区，附近有炎性细胞浸润(图3)。核表达呈弥漫性分布，炎性细胞浸润不明显。在LC组织中，胞浆中的表达多位于汇管区或坏死周边区，呈灶状分布。核上的表达呈弥漫性分布，有以假小叶分布的趋势(图4)。HLA-ABC抗原在HCC组织中的表达率低于LC，两者相差显著(P＜0.05),power=0.80(表2)。
图3 HLA-ABC在HCC胞浆的表达
Fig3 Positive reaction staining of HLA-ABC in cytoplasm of
HCC cells(APA staining× 400)
图4 HLA-ABC在LC细胞核和胞浆的表达
Fig4 Positive reaction staining of HLA－ABC on nuclie and cy-
toplasm of LC tissues(APA staining× 400)
表2 HLA-ABC在HCC及LC组织中的免疫组化染色
Tab2 Immunohistochemical examination of HLA-ABC in HCC and LC tissues
| Group |
n |
Positive number(percentage) |
| Nuclei |
Cytoplasm |
Membrane |
Total |
| LC |
30 |
9(30.0％) |
10(33.3％) |
0(0％) |
19(63.3％) |
| HCC |
40 |
2(5.0％) |
8(20.0％) |
2(5.0％) |
12(30.0％) |
3 讨论
CD54抗原，即细胞间粘附分子-1（ICAM-1），是免疫球蛋白超家族成员，主要表达于炎症病灶和免疫应答部位的多种细胞表面[3]。有关CD54在肝癌组织中表达的研究尚少，因此其在抗肝癌免疫中的作用尚不清楚。国外曾报道，CD54在HCC组织中的阳性率为80.0％～96.2％，在癌周围组织则为阴性[4～7]。本文对48例HCC和30例LC的免疫组化研究的结果显示：CD54在HCC组织中的阳性率为77.1％，与国外报道相近似；而在LC组织中则只有40.0％，显著低于HCC。在LC组织中，CD54膜阳性的肝细胞周围有炎性细胞浸润，表明与炎症活动有关。在HCC组织中，CD54的阳性表达则与是否存在炎细胞无关。Momosaki等[5]曾用IFNα，IFNγ，TNFα和IL-Iβ等刺激肝癌细胞系，证明这些炎性细胞因子只能上调CD54的表达，但不足以引起有效的抗肿瘤免疫应答。因此，HCC组织中CD54的高表达，很可能与肝细胞的恶性转化有关，而与抗肿瘤免疫的关系不大。一些学者认为，HCC癌细胞上CD54胞膜外结构域的脱落，可形成可溶性的CD54（sCD54），而sCD54又可与T细胞上的LFA-1相结合，阻断T细胞与靶细胞的结合[5～8]。但为何肝炎活动时sCD54的升高仍可引起有效的免疫应答，而在形成HCC时却不能，这一问题还有待进一步研究。为此，我们检测了40例HCC和30例LC组织中的HLA-ABC抗原。
众所周知，HLA-ABC和内源性抗原肽的复合物与CTL的TCR结合，可为CTL的活化提供“第1信号”，因此，在抗肿瘤免疫应答中，靶细胞上HLA-ABC的表达至关重要。但有关HLA-ABC在肝癌组织中表达的报道仍为数不多。Paterson等〔9〕曾报道，在70例HCC组织中有94.3％表达HLA-ABC。Sung等〔10〕报道，7/11的HCC组织可表达HLA-ABC。但我们的研究结果显示，HLA-ABC在HCC组织中的阳性率仅为30％，而在LC组织中为63.3％，两者差异显著。尽管研究方法的不同可能会影响检测的结果，但同时以同一方法检测得出的结果还是可说明以下的观点，即在由LC向HCC转化的过程中，HLA-ABC抗原表达的降低，势必使CTL对癌细胞的效应作用下降，这可能是HCC发生免疫耐受的原因之一。然而是否还存在其它的原因，尚有待进一步的研究证实。总之，本文研究结果表明，CD54和HLA-ABC的检测，可能对HCC的预后评估和免疫治疗有一定的意义。
作者简介：翟守恒，男，36岁，主治医师，硕士生。联系单位：太原解放军264医院传染科，邮政编码：030001。太原市桥东正街110号，Tel.(0351)4926111转88607
参考文献
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［10］Sung CH, Hu CP, Hsu HC, et al. Expression of class I and class II major histocompatibility antigens on human hepatocellular carcinoma. J Clin Invest, 1998; 83(2):421～429
收稿：1998－11－30
修回：1999－02－10
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