人类白细胞抗原DRB1等位基因与幽门螺杆菌感染的关系

　　中华流行病学杂志2000年第21卷第6期

高长明　李忠佑　丁建华　王建东　胡旭　刘体康　徐天亮　李洪川

　　fujiyoshi Toshinobu　Takezaki Toshiro　Tajima Kazuo

　　　摘　要　目的　研究人类白细胞抗原(HLA)DRB1等位基因与幽门螺杆菌(Hp)感染的关系。方法　用Bioseed hp-IgG定量酶联免疫试剂盒检测46例胃癌、75例食道癌和100例人群对照的Hp-IgG抗体，用Biotest低解析水平HLA-DRB酶联免疫探针杂交测定试剂盒检测HLA-DRB1等位基因。结果　(1)Hp-IgG阳性组DRB1*08基因频度显著高于Hp-IgG阴性组(13.1% vs 4.4%； χ² =11.14, P＜0.001)。Hp-IgG阳性组DRB1*12基因频度显著低于Hp-IgG阴性组(5.4% vs 11.3%；χ²=4.49, P＜0.05)。(2) 胃癌组中DRB1*02基因频度显著高于对照组，而DRB1*07基因频度显著低于对照组，但在胃癌、对照的Hp-IgG阳性组和Hp-IgG阴性组之间的DRB1*02、DRB1*07基因频度差异均无显著性。结论　(1) HLA-DRB1*08基因阳性可能增加对Hp的易感性，DRB1*12基因可能是抵御Hp感染的保护性基因。(2)DRB1*02基因阳性可能是胃癌的宿主遗传危险因素、DRB1*07基因可能是胃癌的保护性因素，但DRB1*02、DRB1*07基因与胃癌的联系和Hp感染无关。

　　关键词：人类白细胞抗原DRB1等位基因；幽门螺杆菌；胃癌

　　幽门螺杆菌(Helicobacter pyloli, Hp)是慢性胃炎的主要病因之一，也是消化性溃疡的主要致病因子^［1-3］。 hp感染可诱发胃黏膜癌变，1994年，国际肿瘤研究机构(IARC)已将Hp列为Ⅰ类致癌原。但是，国内外关于Hp感染与胃癌关系的流行病学研究结果并不一致,我们以前也曾报告，Hp感染在胃癌(不含贲门癌)家族中存在明显的家庭聚集现象，但胃癌病例组与贲门癌、食道癌组Hp感染率之间无统计学意义^［4］。有报告指出，Hp感染受遗传因素和环境因素影响^［5,6］。Hp感染可引起机体广泛的免疫反应，人类白细胞抗原(human leukocyte antigen, HLA)复合体编码的HLA与机体的免疫应答和免疫调节等有关。 hLA复合体由HLA-Ⅰ类、Ⅱ类和Ⅲ类组成，其中Ⅱ类基因复合体包括DP、DQ和DR三个亚区^［7］。 azuma等^［8,9］发现HLA-DQA1*0102基因与抵御Hp感染有关，该基因缺乏可能是Hp感染相关的萎缩性胃炎以及肠型胃腺癌的宿主遗传危险因素。关于HLA- dR基因多态性与Hp感染的关系，国内外尚未见报道，我们研究了江苏黄淮平原地区汉族人群HLA- dRB1基因多态性与Hp感染的关系，其结果报告如下。

　　材料与方法

　　一、研究对象和标本收集

　　1997年2～8月，在江苏省淮安市和邳州市人民医院，随机收集经组织病理学确诊的胃癌48例、食道癌75例，同时在两市收集无癌症病史和胃癌、食道癌家族史的一般人群对照100例(两市各50例）。所有研究对象均为汉族，并且无血缘关系。在221个研究对象中，Hp-IgG抗体阳性者84例,平均年龄51.7岁，Hp-IgG抗体阴性者137例,平均年龄50.1岁，经t检验,两组年龄差异无显著性（t=0.6926, P＞0.1)。研究对象中，男性146人，女性75人，男性 Hp-IgG抗体阳性率为36.0%,女性为41.3%，男、女性Hp-IgG抗体阳性率差异无显著性(χ²=0.5325, P＞0.3)。每个对象抽静脉血，置乙二胺四乙酸钠抗凝管，分离血浆和白细胞层。用QIAamp dNA提取试剂盒提取白细胞DNA，血浆和DNA置-30℃低温冰箱保存备用。

　　二、检测方法

　　Hp-IgG抗体检测采用美国Bioseed公司生产的Hp-IgG定量酶联免疫试剂盒，HLA-DRB1等位基因检测采用Biotest公司生产的低解析水平HLA-DRB酶联免疫探针杂交测定试剂盒。上述所有操作均按照试剂盒所附说明书进行。

　　三、统计分析方法

　　Hp-IgG阳性率、HLA-DRB1等位基因频度用百分数表示，组间的HLA-DRB1等位基因频度比较采用χ²检验。

　　结　　果

　　一、Hp-IgG阳性和阴性组的HLA-DRB1等位基因频度比较

　　一般人群对照、食道癌和胃癌的Hp-IgG阳性组和阴性组的HLA-DRB1等位基因频度见表1。一般人群对照、食道癌和胃癌患者中 hp-IgG阳性组的DRB1*08基因频度均明显高于Hp-IgG阴性组，上述三组人群合计的Hp-IgG阳性组的DRB1*08基因频度为13.1%，显著高于Hp-IgG阴性组的4.4%(χ²=11.14, P＜0.001)。而一般人群对照、食道癌和胃癌患者中Hp-IgG阳性组的DRB1*12基因频度均明显低于Hp-IgG阴性组，上述三组人群合计的Hp-IgG阳性组的DRB1*12基因频度为5.4%，显著低于Hp-IgG阴性组的11.3%(χ²=4.49, p＜0.05)。此外，在一般人群对照、食道癌和胃癌患者中， Hp-IgG阳性组的DRB1*10基因频度也都低于Hp-IgG阴性组，但这种差异未显示出统计学意义。

　　二、对照组与胃癌组 HLA-DRB1等位基因频度比较

　　对照组和胃癌组的HLA-DRB1等位基因频度见表2。胃癌组DRB1*02基因频度为27.2%，显著高于对照组的11.5%(χ²=11.27,P＜0.001）。而胃癌组DRB1*07基因频度为7.6%，显著低于对照组的18.0%（χ²=5.42,P＜0.02）。但在对照以及胃癌的Hp-IgG阳性组、阴性组之间的DRB1*02和*07等位基因频度差异均无显著性(表1)。

　　讨　　论

　　HLA复合体是迄今为止已知的具有最复杂多态性的人类基因系统，目前已经发现有70多种疾病、特别是自身免疫性疾病与这一基因系统的多态性有关^［7］。本研究在国内外首先发现胃癌组HLA-DRB1*02基因频度显著高于对照组，HLA-DRB1*07基因频度显著低于对照组，这一结果表明HLA-DRB1*02基因阳性可能增加胃癌的易患性，而HLA-DRB1*07基因则可能是降低胃癌易患性的保护性基因。此外，在一般人群对照以及胃癌的Hp-IgG阳性组、Hp-IgG阴性组之间的HLA-DRB1*02、DRB1*07基因频度差异均无显著性，表明HLA-DRB1*02、DRB1*07基因和胃癌易患性的联系与Hp感染无关。有报道指出，胃癌及其家族成员中壁细胞抗体水平较高，存在细胞介导的免疫缺陷^［10］。HLA-DRB1*02、DRB1*07基因和胃癌的联系是否与此有关，值得进一步研究。三组人群合计的Hp-IgG阳性组与阴性组DRB1*12基因频度比较：χ²＝4.49，P＜0.05

表1　对照组、胃癌及食道癌患者中Hp-IgG阳性组和阴性组HLA-DRB1等位基因频度分布

　　注：三组人群合计的Hp-IgG阳性组与阴性组DRB1*08基因频度比较：χ²＝11.14，P＜0.001；

表2　对照组、食道癌及胃癌患者中HLA-DRB1等位基因频度分布

　　注：对照组与胃癌组比较：DRB1*02：χ²＝11.27，P＜0.001；DRB1*07：χ²＝5.42，P＜0.02　　 李海林、吴斌等^［5,6］分别综述了Hp感染的研究进展，指出Hp感染在人种、地域、经济、卫生、文化、疾病等方面差异有显著性，HLA-DQA基因和宿主抵御Hp感染的反应有关，少食牛奶、水果、蔬菜，维生素C、β-胡萝卜素摄取量低以及吸烟、饮酒均增加Hp感染的危险性。这些研究结果说明遗传因素和环境因素影响Hp感染，并且可以解释为什么不同地区的流行病学研究结果存在不一致。HLA的主要功能是参与自我识别、介导免疫应答、调节免疫反应。Hp感染可引起胃黏膜急、慢性炎症伴中性粒细胞、淋巴细胞、巨噬细胞和血细胞浸润，进而引起机体广泛的免疫反应。本研究在国内外首先发现了HLA-DRB1基因多态性与Hp感染的关系。在本研究结果中，Hp-IgG阳性组的HLA-DRB1*08基因频度显著高于Hp-IgG阴性组。而Hp-IgG阳性组的HLA-DRB1*12基因频度显著低于Hp-IgG阴性组。这一结果表明HLA作为免疫遗传因素与Hp感染有关，DRB1*08基因阳性可能增加Hp的易感性，而DRB1*12则可能是抵御Hp感染的保护性基因。这一结果也从遗传学角度对我们以前报道的Hp感染有明显家族聚集性的结果提供了解释。HLA-DRB1*10基因的频度分布与 hLA-DRB1*12基因相似，但在Hp-IgG阳性组和阴性组之间的差异无统计学意义，这可能是HLA-DRB1*10基因在人群中的分布频度较低以及我们的研究样本量尚嫌不足所致。

　　作者单位：高长明（江苏省肿瘤防治研究所流行病学研究室　南京，210009)

　　李忠佑（江苏省肿瘤防治研究所流行病学研究室　南京，210009)

　　丁建华（江苏省肿瘤防治研究所流行病学研究室　南京，210009)

　　王建东（江苏省肿瘤防治研究所流行病学研究室　南京，210009)

　　胡旭（淮安市卫生防疫站)

　　徐天亮（淮安市卫生防疫站)

　　刘体康（州市卫生局)

　　李洪川（日本鹿儿岛大学医学部）

　　fujiyoshi Toshinobu（日本鹿儿岛大学医学部）

　　takezaki Toshiro（日本爱知县癌中心研究所疫学、预防部）

　　tajima Kazuo（日本爱知县癌中心研究所疫学、预防部）

　　参考文献

　　1，Asaka M, Kato M, Kudo M, et al. Relationship between Helicobacter pylori infection, atrophic gastritis and gastric carcinoma in a Japanese population. Eur J Gastroenterol Hepatol,1995,7(suppl)∶7-10.

　　2，Kuipers EJ, Pals G, Pena AS, et al. Helicobacter pylori, papsinogens and gastrin∶ relationship with age and development of atrophic gastritis. Eur J gastroenterol Hepatol, 1996, 8∶153-156.

　　3，Sippoonen P.Gastric cancer: A long-term consequence of Helicobacter pylori infection? Scand J Gastroenterology, 1994, 29(suppl 201)∶24-27.

　　4，李忠佑，高长明，丁建华，等.上消化道癌及亲属中幽门螺杆菌感染的流行病学调查.中华流行病学杂志，1999,20∶88-90.

　　5，李海林，李若伦. 幽门螺杆菌感染的若干研究进展.国外医学流行病学传染病学分册，1999,26∶169-173.

　　6，吴斌，陈素清. 儿童幽门螺杆菌感染的易感因素和治疗.国外医学流行病学传染病学分册，1999, 26∶223-227.

　　7，李霞，朱运良，庚镇城. HLA与自身免疫性疾病关联性的研究进展.国外医学免疫学分册, 1999, 22∶75-78.

　　8，Azuma T, Konishi J, Tanaka Y, et al. Contribution of HLA-DQA gene to hosts response against Helicobacter pylori. Lancet, 1994,343∶542-543.

　　9，Azuma T, Ito S, Sato F, et al. The role of the HLA-DQA1 gene in resistance to atrophic gastritis and gastric adenocarcinoma induced by Helicobacter pylori infection. Cancer, 1998, 82∶1013-1018.

　　10，Greagan ET.Fraumeni JF.Familial gastric cancer and immunologic abnormalities. Cancer, 1973, 32∶1325-1331.