胃肠道恶性肿瘤患者外周血白细胞雄激素受体的改变及意义
中国肛肠病杂志2000年第20卷第8期
解放军济南医学高等专科学校（250022） 蒋艳霞 曾燕 郑金峰 王兴友
山东医科大学 胡维诚 解放军第106医院 徐勤功
提 要：应用放射配体结合分析法（RBA）及放射免疫测定试剂盒，检测34例胃肠道恶性肿瘤患者与对照组外周血白细胞雄激素受体（AR）及血浆中睾酮（T）浓度。结果证实：所有胃肠道恶性肿瘤患者外周血白细胞的AR明显低于对照组（P＜0.01）；血浆中雄激素水平除女性直肠癌外，其他患者皆低于对照且（P＜0.05）；患者AR含量与年龄间无明显的相关怀（P＞0.05）。提示胃肠道恶性肿瘤的发生与雄激素有某种内在关系，从而为胃肠道恶性肿瘤的发病机制、内分泌治疗及判断预后情况的探讨提供了初步的理论依据。
关键词：胃肠道肿瘤；雄激素受体；睾酮；肛肠病
近年来临床研究与动物实验证实，性激素与胃肠道肿瘤的发生有密切关系[1～3]。在胃肠道肿瘤组织中性激素及受体的变化国内外曾有报道，但尚未见应用放射配体结合分析法测定胃肠道恶性肿瘤患者外周血白细胞AR的改变及意义，进一步探讨雄激素及受体改变与胃肠道恶性肿瘤间的内在关系。
1 材料与方法
1.1 主要试剂 （17-α-甲基3H）三烯醇酮（3H-methyltrienolone,简称3H-R1881）（美国Dupont公司），放射比度87Ci/mmol，放射纯度100%，放射浓度1mCi/ml；R1881（美国Dupont公司）；睾酮-RIA试剂盒（九鼎公司）；Tris-NCL；Tris-NH4CI；DextranT500（Pharmacia药厂产品）；1，4-双-（5-苯基噁唑基）-苯0.4g；2，5-二苯基噁唑4g；二甲苯800ml；乙二醇乙醚200ml；Hanks液。
1.2 检测对象 胃肠道恶性肿瘤34例，其中胃癌10例，男7例，女3例，年龄（55±7.56）岁（42～60岁）；结肠癌12例，男4例，女8例，年龄（54±15.77）岁（23～73岁）；直肠癌12例，男9例，女3例，年龄（62.63±7.01)mqu(52～72岁）。30例健康者为对照组，男女各15例，年龄（52±8.21）负（38～65岁）。
1.3 外周血细胞AR测定
1.3.1 外周血白细胞分离：参照文献[1]分离混合白细胞。将肝素抗凝静脉血8ml离心后，取出血浆保留（用于测定血浆睾酮），5%DextranT500使红细胞聚集沉淀20～30min，然后吸取上清液离心5min，用Tris-NH4CL溶液37℃水温溶解残存的红细胞，用Hanks液洗2遍，得到较为纯净的白细胞。
1.3.2 3H-R1881特异结合分析：应用放射配体结合分析法，用pH7.35的Hanks液混合白细胞调到1×107/ml，取调配好的此悬液0.5ml加放一定量的3H-R1881，定为总结合管，用加等量的3H-R1881及大于其浓度500倍的R1881平行管为非特异结合管。在37℃℃保温1h后，迅速放入冰水并加2ml冷Tris-HCI终止反应，1000×g离心3min，弃上清液，细胞再用冷Tris-HCl洗2～3遍，去除游离激素。最后一次离心后弃尽Tris-HCl液，于细胞沉渣中加入3滴甲酸，在100℃沸水中消化后液闪烁计数。总结合管与非特异结合管计数的差值即为白细胞3H-R1881的特异结合量。按下列公式求出每个白细胞3H-R1881特异结合位点，即受体数。
|
每个细胞受体数 |
= |
每升3H-R1881特异结合克分子数×6.023×1023 |
|
每升细胞数 |
1.3.3 血浆睾酮（T）测定：应用睾酮-RIA试剂盒测定患者及对照组血浆T浓度。
1.3.4 统计学处理：数据以x±s表示，进行t检验，F检验，方法学检验：批内差异（5.6±2.8)%，批间差异（9.7±3.2）%。
2 结果
2.1 血浆睾酮含量 患者血浆中睾酮含量除女性直肠癌患者外，其他皆低于对照组（P＜0.05）。见表1。
2.2 白细胞AR特异结合位点 胃癌、结肠癌、直肠癌患者外周血白细胞AR特异结合位点明显低于对照组（P＜0.01）。AR特异结合位点数与患者年龄无明显相关性（P＞0.05）。见表1、2。
表1 胃肠道恶性肿瘤血浆T含量及白细胞AR测定特异结合位点变化（x±s）
| 组别 |
n |
T(ng/dl) |
AR(位点数/细胞） |
Bmax（位点数/细胞） |
Kd(pmol/L) |
| 胃癌 |
男 |
7 |
292.08±114.86** |
430±108.49** |
- |
- |
| 女 |
3 |
35.47±11.25* |
361±42.34** |
- |
- |
| 结肠癌 |
男 |
4 |
115.18±6.78** |
388.25±67.59** |
- |
- |
| 女 |
8 |
25.86±14.33** |
382±82.80** |
- |
- |
| 直肠癌 |
男 |
9 |
284.76±38.96** |
383.09±18.38** |
- |
- |
| 女 |
3 |
39±24.65 |
337.67±22.81** |
- |
- |
| 对照组 |
男 |
15 |
479±29.21 |
612.5±54.35 |
893±36 |
362±32 |
| 女 |
15 |
45.5±12.35 |
584.2±42.24 |
790±42 |
258±29 |
*P＜0.05 * *P＜0.01 VS对照组
表2 胃肠道恶性肿瘤血浆T及白细胞AR含量与年龄关系（x±s）
| 年龄（岁） |
患者数 |
T（ng/dl） |
AR(位点数/细胞） |
| ～30 |
1 |
46.2 |
368 |
| 30～ |
5 |
90.45±38.19 |
405±126.59 |
| 50～ |
25 |
192.87±141.84 |
391.17±67.66 |
| ≥70 |
3 |
28.73±34.43 |
345.67±81.09 |
P＞0.05(F=2.19) P＞0.05(F=0.2774)
3 讨论
临床研究与动物实验证明，性激素对胃肠道的病理生理活动趁着重要调节作用，且与胃肠道肿瘤的发生有密切关系[3，5]，但关于AR在胃肠道肿瘤中的检测及意义，国内外报道甚少，且未见一致意见。
本实验应用放射配体结合分析法检测胃肠道恶性肿瘤患者及对照组明显降低，此结果同Farid[2]检测到肿瘤组织中AR含量低于其周围正常粘膜的结果下一致。AR数目降低可能与肿瘤患者合成AR能力有所减弱或AR表达水平下降有关，也可能是肿瘤细胞某些因子直接导致AR数目下降。国内于庆凯[6]曾报道，大肠癌组织中存在着雌激素受体（ER）和孕激素受体（PR）。李玉军[7]报道，分化低、转移力强的胃癌，其ER的阳性率高。国外Marugo[8]报告，正常大肠组织AR含量高于腺瘤，经雄激素治疗的动物结肠腺瘤的发生率降低，提示雄激素对胃肠道粘膜可能具有保护作用，这与我们的实验结果相吻合。胃肠道恶性肿瘤患者AR数目下降，其意义在于：①AR数目下降，胃肠道粘膜受雄激素的保护作用可能有所减弱，粘膜易受损伤，可能导致肿瘤的发生；②AR数目下降，可能提高消化道粘膜对某些化学致癌物质的敏感性。患者AR数目的异常，提示胃肠道恶性肿瘤具有性激素依赖性，属内分泌依赖性肿瘤[1，9]。另外，本实验发现雄激素受体含量与胃肠道恶性肿瘤患者的年龄无明显的相关性，此结果同Farid[3]报道基本一致。
参考文献（略）
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