宫颈癌组织中p16和p15基因产物表达及其生物学意义

肿瘤防治杂志 2000年第2期第17卷 基础与临床研究

作者：李霞

单位：李霞(湖北省武汉市第一医院妇产科　武汉市　430030)

关键词：宫颈癌；p16、p15基因；免疫组织化学

　　【摘要】目的：探索p16、p15基因与宫颈癌发生发展的关系。方法：应用免疫组化ABC方法对36例宫颈癌组织中p16、p15基因表达产物进行检测。结果：p16、p15基因产物的阳性表达率分别为63.9%(23/36)、55.6%(20/36)，二者的表达率与宫颈癌病理类型无显著关系(P＞0.05)，而与宫颈癌的浸润、转移及病人的生存期显著相关(P＜0.05)。结论：p16、p15基因表达产物可以作为判断宫颈癌预后的指标。

　　中图分类号：R737.33；R730.231　　文章标识码：A

　　文献编号：1009-4571(2000)02-0146-02

Expression of p16，p15 gene in the Cervix Carcinomas

LI Xia

　　(Department of Obstetrics and Gynecology,Wuhan First Hospital,Wuhan 430030)

　　【Abstract】Objective：In order to investigate the prognostic value of p16，p15 gene in the prediction for patient with cervix carcinoma.Methods：The expression of p16 and p15 gene in 36 cases of cervix carcinoma by immunohisto-chemical staining.Results:p16，p15 protein positive rate was 63.9%(23/36)，55.6%(20/36)，the expression of p16，p15 gene did not correlate with pathological parten (P＞0.05),but with neoplasm invation and with lymph node metastasis and with survival period of patient(P＜0.05).Conclusions：p16，p15 gene expression may be a promising predictor for the prognosis of patient with cervix carcinoma.

　　【Key words】cervix carcinoma；p16，p15 gene；immunohistochemistry

　　p16、p15基因是新近发现的抑癌基因，其编码产物p16蛋白及p15蛋白在调节细胞生长，限制肿瘤发展方面都发挥重要作用。研究表明^［1］，许多肿瘤组织中有该基因的缺失或蛋白水平的下降。为探索p16、p15基因与宫颈癌发生发展的关系，本研究采用免疫组化技术检测宫颈癌组织中p16、p15蛋白的表达。

　　1　材料与方法

　　1.1　临床及病理资料

　　36例宫颈癌标本来源于武汉第一医院、同济医院，所有标本取出后立即投入液氮中，后移入-70℃冰箱保存备用。36例肿瘤标本均经病理学检查确诊，其中子宫颈鳞癌35例，腺癌1例。高分化鳞癌26例，低分化鳞癌8例，未分化鳞癌1例；Figo分期(1994年修订分期)Ⅰ、Ⅱ期17例；Ⅲ、Ⅳ期19例，有周围淋巴结转移者24例。宫颈癌术后生存期≥5年者29例，＜5年者共7例。

　　1.2　主要试剂及方法

　　抗p16、p15抗体为武汉博士德公司产品，稀释度均为1∶50，ABC试剂盒为Vector公司产品。冰冻肿瘤标本切成5 μm厚切片，先经微波炉修复抗原，PBS洗涤后加牛血清蛋白15 min，再加一抗(兔抗)4℃过夜，加生物素标记的二抗及ABC复合物(1∶100)37℃各孵育30 min，DAB显色，透明中性胶封片。阳性对照采用已知的食道癌切片，阴性片对照采用PBS代替一抗。

　　1.3　结果判断

　　以细胞浆内和细胞核中出现棕黄色细小颗粒为阳性。

　　1.4　统计学分析

　　χ²检验。

　　2　结果

　　2.1　p16、p15蛋白表达情况

　　36例宫颈癌中p16、p15蛋白的表达阳性率为63.9%，55.6%。p16与p15蛋白的表达呈正相关，P＜0.01。

　　2.2　p16、p15蛋白表达与宫颈癌临床病理特征及预后的关系

　　p16、p15蛋白的阳性表达率与宫颈癌病理类型无显著关系(P＞0.05)，但与宫颈癌的浸润、转移及病人的生存期显著相关(P＜0.05)，见表1。

表1　宫颈癌临床病理特征与p16、p15基因表达的关系

　　※P＜0.05，※※P＜0.013　讨论

　　p16基因、p15基因又称多肿瘤抑制基因MTS1，MTS2，都定位于人染色体9p21区，所编码的p16、p15蛋白为细胞周期蛋白D/CDK激酶的抑制因子，二者皆与CDK4和CDK6结合，抑制CDK4-cyclinD和CDK6-cyclinD，抑制细胞增殖^［1］。p15基因纯合子缺失或过度甲基化导致该基因失活，使细胞无限制生长^［2，3］。p15基因表达受TGF-β诱导表明其在G₁期有阻断作用^［1］。目前已在许多肿瘤和细胞株中发现有p16、p15基因异常，如白血病、胆囊癌、神经胶质瘤、肺癌、非何杰金氏病、头颈部鳞癌等^［4～6］。文献中有关p16、p15基因缺失的报道较多，但有关p16、p15蛋白表达产物检测的报道极少，在所检索的国内外文献中，未见有p16、p15蛋白宫颈癌中表达的报道。

　　Combart等^［7］研究发现，p15基因的纯合子缺失出现在p16基因发生纯合子缺失时，而p16发生纯合子缺失时不一定出现p15的缺失，故认为p15可能补充p16的缺失。目前已公认p16缺失导致肿瘤的发生，但如果再有p15的缺失则更易导致肿瘤的发生。本研究发现宫颈癌中p16基因产物阳性表达率为63.9%。并且和p15蛋白呈正相关，因而说明宫颈癌中同时存在p16、p15基因的改变。

　　本组资料显示，p16、p15蛋白表达与宫颈癌的组织分化类型无显著关系，表明p16、p15基因的改变不是宫颈癌的早期指标。但二者与患者的生存期及有无浸润转移有关，p16、p15基因表达阳性者宫颈癌患者的预后好，生存期长，因而提示p16，p15基因表达产物是判断宫颈癌病程和预后的指标。

　　综上所述，本研究表明，p16、p15蛋白的表达缺失与宫颈癌的发生无关，但与宫颈癌进展和预后不良有关。该研究从分子水平上为判断宫颈癌的病程和预后找到了理论依据。

　　参考文献：

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　　［7］Combart AF,Morosetti R,Miller Cw,et al.Deletion of the cyclin-dependent kinase inhibitor gene p16 and p15 in no Hodykin′s Lymplomas［J］.Blood,1998,89:1574-1576.

收稿日期：1999-10-19

修回日期：1999-12-18