急性白血病患者血浆可溶性Fas受体的水平及其意义

临床血液学杂志 1999年第2期第12卷 论著

作者：刘陶文　黎金庆　周润华　莫东华　刘健　唐超生

单位：桂林医学院生物工程研究所

关键词：白血病；Fas；受体

　　摘要　目的：了解急性白血病患者血浆可溶性Fas(sF as)受体水平及其意义。方法：用酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测30例急 性白血病患者的血浆sFas含量，并与正常对照组比较。结果：难治复发患 者sFas含量(ANLL 9.69±3.51 μg/L；n=8，All 7.14±2.18 μg/L ；n=7)显著高于(P＜0.01)正常对照 (3.49±2.36 μg/L)和CR组(ANL L 4.23±1.98 μg/L；n=8，ALL 3.72±0.72 μg/L；n=7)。AN LL与ALL患者sFas水平比较差异无显著性(P＞0.05)。结论：初步 提示血浆sFas水平升高与急性白血病预后不良有关。

Role of Plasma Soluble Fas Receptor Levels in Patients with Acute Leuke mia

　　Liu Taowen,Li Jinqing,Zhou Runhua,et al

　　Institute of Bioengneering,Guilin Medical College,Guilin 541004

　　Abstract　Objective:To explore the role of plasma soluble Fas (sFas) receptor levels in patients with acute leukemia.Methods:The levels of plasma sFas in 30 patients with acute leukemia were measured by enzyme linked immunosorbent assays (ELISA),compared with normal controll group. Results:sFas levels in refractory/relapsed patients (ANLL 9. 69±3.51 μg/L;n=8,ALL 7.14±2.18 μg/L;n=7)were remarkabl y higher (P＜0.01)than normal controll (3.49±2.36 μg/L)and com plete remission (CR) subjects (ANLL 4.23±1.98 μg/L;n=8,ALL 3.7 2±0.72 μg/L;n=7),respectively.No significantly difference was found between ANLL and ALL group (P＞0.05).Conclusion:Increa sing levels of plasma sFas in patients suffered from acute leukemia may related with poorprognosis.

　　Key words　Leukemia　Fas　Receptor

　　Fas(又称APO-1、CD₉₅)是富含胱氨酸的跨膜糖蛋白，属于肿瘤坏死因子(TNF)/神经生长因子(NGF)受体超家族成员，表达于各种正常组织和肿瘤细 胞。细胞表面的Fas通过与其配基(Fas-L)结合而激发易感细胞凋亡，对免疫系统的自稳调 节有重要作用。因Fas的mRNA分子之剪接方式不同而导致存在可溶性形式的Fas(sFas)。sFas 通过与Fas-L竞争结合而阻抑Fas途径介导的细胞凋亡^〔1〕。故认为sFas与肿瘤细胞 逃避免疫监视，继而与恶性肿瘤的演变有关。因此，观察一组急性白血病患者血浆sFas的含 量以分析其在急性白血病化疗及预后中的意义。

　　1　材料和方法

　　1.1　临床资料　30例急性白血病，均为我院血液科就诊的患者，其中急性非淋巴细胞白血病(AN LL)16例〔完全缓解(CR)，难治与复发各8例〕，急性淋巴细胞白血病(ALL)14例(CR、难治与 复发各7例)。男23例，女7例，年龄10～56岁，中位年龄32.5岁。难治与复发白血病的 诊断依据文献标准^〔2〕。

　　1.2　对照组　健康献血员8名。男5名，女3名，年龄20～42岁，中位年龄34岁。

　　1.3　实验方法　①标本采集：静脉血，以2%EDTA按9/1 (V/V，血/抗凝剂)抗凝，分离血浆-20℃保存，待测。②血浆sFas含量测定：采用酶联免疫 吸附试验法(ELISA)。试剂由深圳晶美生物工程公司提供(美国Genzyme公司产品分装)。酶标 仪为Bio-Rad Model 550。加Fas重组标准品和血浆于每孔100 μl。同一样品血浆和标准品 各加2孔。密封孔后置37℃ 1 h，洗板3次，每次3 min。每孔加新配制底物100 μl，静置10 min。每孔加50 μl终止液，490 nm测定。③统计学处理：测定数据以±s表 示，两样本均数间比较用t检验。四格表资料用确切概率检验。

　　2　结果

　　2.1　急性白血病患者血浆sFas的含量测定结果　(见附表)。ALL、ANLL组中CR与难治复发患者血浆sFas水平之比较差异有非常显 著性(P＜0.01)；而ALL、ANLL两组间的CR、难治复发患者血浆sFas之差异均无显著 意义(P＞0.05)；CR与对照组相比，血浆sFas水平差异无显著性(P＞0.05) 。

附表　急性白血病患者血浆sFas水平与正常对照组比较

　　P₁：与对照组比较；P₂：ALL、ANLL组内CR与难治复发者比较；P ₃：ALL、ANLL组间CR、难治复发者比较

　　2.2　急性白血病患者血浆sFas水平与化疗反应的关系　A组(＜7)：19例，CR 13例(68.4%)，难治复发6例(31.6%)；B组(＞7) ：11例，CR 2例(18.5%)，难治复发9例(81.8%)。两组比较P＜0.05。将AN LL和ALL患者血浆sFas水平按＜或＞7 μg/L(约为正常对照值的2倍)分为A、B两组，sFas＞7 μg/L为11例，其中难治复发9例(81.8%)、CR 2例(18.2%)；而sFas＜7 μg/L占19 例，难治复发及CR分别为6例(31.6%)和13例(68.4%)。作统计学分析，两组在难治 复发和CR方面的差异有显著意义(P＜0.05)。

　　3　讨论

　　Fas为Ⅰ型糖蛋白，MW为48 kd，作为细胞膜上的一种受体分子，在结构上分为胞 外区、跨膜区和胞内区。其胞外区可与配基特异性结合；胞内区为Fas传导凋亡信号所必需 ，故称之为死亡结构域(death domain)。Fas的天然配基(Fas-L)为Ⅱ型糖蛋白，目前已知 其主要表达于活化的T淋巴细胞。Fas与Fas-L结合诱导细胞凋亡^〔3〕。然而对激活T 细胞凋亡的阻断可能会导致自身免疫性疾病或T细胞淋巴瘤。在人类激活的T、B淋巴细胞、 白血病细胞均有Fas表达，但在静止的淋巴细胞、单核细胞、NK细胞上部未见或仅低表达 〔4，5〕。骨髓增生异常综合征患者的骨髓细胞Fas表达水平升高^〔6〕。一些化 疗药物通过使已表达Fas的白血病细胞对Fas-L表达水平升高而促进该细胞凋亡^〔7〕 。故对Fas凋亡途径的调控有潜在治疗价值。

　　sFas是一缺乏跨膜区的分泌型Fas分子，其结构缺乏19个氨基酸、MW类似于纯化的细胞膜Fas ^〔1，8〕。在多种情况下，血浆sFas水平可增高。据报道sFas含量增加与成人T淋巴 细胞白血病的细胞增殖状态有关，也可因急性白血病发生并发症如败血症所致^{〔9，10 〕}。本文实验结果提示急性白血病难治复发组的血浆sFas水平显著高于CR和正常对照组( P＜0.01)；按血浆sFas含量＞或＜7 μg/L(相当于正常对照值3.49±2.36 μg/L的2倍)将患者分组比较，发现其CR、难治复发率方面的差异有显著意义(P＜0. 05)。其中3例M₄，M₅(FAB分型)患者血浆sFas持续高达10～12 μg/L，临床观察到其 顽固耐受化疗，均于确诊后3个月内死亡；而血浆sFas处于正常对照水平的3例患者，达持续 CR。本研究对正常对照组sFas的测定值高于既往报道^〔11〕，考虑为所用试剂及实验 条件造成之差异。鉴于同一患者的sFas与细胞膜Fas表达水平可以不一致，故认为白血病患 者sFas除可由白血病细胞产生外，尚可来源于T和B淋巴细胞并反映这些细胞的活化状态 ^〔11〕。此外，恶性肿瘤细胞比非恶性肿瘤细胞更易产生和脱落细胞表面蛋白，这也许是 复发难治白血病患者血浆sFas水平升高的机制之一。目前认为sFas可能通过两种方式介导肿 瘤细胞脱避凋亡：①细胞膜Fas的缺乏(消除或脱落成为sFas)而丧失Fas-L的结合部位；②s Fas竞争性结合Fas-L而直接削弱细胞膜Fas与Fas-L的相互作用。显然，血浆sFas水平升高 可见于多种病理情况或机体免疫功能紊乱，且许多因素可影响细胞膜Fas的脱落。sFas对Fas 凋亡途径的干扰在一定程度上可解释急性白血病患者血浆sFas水平升高与复发及耐受化疗的 关系，初步提示高水平sFas与急性白血病预后不良有关。邮政编码：桂林，541004

　　血液 病研究室

　　参考文献

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(1998-06-16 收稿　1998-11-23 修回)